本科毕业论文（设计）手册
题 目： 微波辅助提取金银花总黄 酮工艺条件的研究 学 院： 生物工程 专 业： 生物工程 学 号： 姓 名： 指导老师： 葛立军 职称： 讲 师 合作老师： / 职称： / 成 绩：
浙江中医药大学教务处制
学位论文原创性声明
兹呈交的学位论文，是本人在指导老师指导下独立完成的研究成果。本人在论文写作中参考的其他个人或集体的研究成果，均在文中以明确方式标明。本人依法享有和承担由此论文而产生的权利和责任。
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年 月 日
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手册目录
（一）本科毕业论文(设计)正文????????????3 （二）本科毕业论文(设计)任务书?????????????21 （三）本科毕业论文(设计)开题报告????????????23 （四）本科毕业论文(设计)文献综述????????????30 （五）本科毕业论文(设计)外文翻译??????????36 （六）本科毕业论文(设计)指导记录??????????62 （七）本科毕业论文(设计)中期检查表?????????64 （八）本科毕业论文(设计)答辩资格审查表???????65 （九）本科毕业论文(设计)答辩记录??????????66 （十）本科毕业论文(设计)成绩评定书??????????67 （十一）本科毕业论文(设计)作品(实物)验收表????????68
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本科生毕业论文（设计）
微波辅助提取金银花总黄酮工艺条件的研究
姓 名：
指导老师：
合作老师： / 专 业： 生物工程 提交日期： 年 月 日
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目 录
中文摘要???????????????????????????????5 外文摘要???????????????????????????????6 引言?????????????????????????????????7 1．实验材料及仪器???????????????????????????7 1.1材料?????????????????????????????7 1.2试剂??????????????????????????????8 1.3仪器??????????????????????????????8 2．工艺流程………………………………………………………………………………8 3．实验方法????????????????????????????9 3.1标准曲线的制备…………………………………………………………………9 3.2金银花总黄酮传统提法?????????????????????9 3.3微波辅助提取单因素实验方法???????????????????9 3.4微波辅助提取正交试验方法????????????????????9 3.5黄酮含量测定方法????????………?????????????9 4．结果…??????????????????…??????????10 4.1标准曲线绘制??????????????????????????10 4.2 微波辅助提取金银花总黄酮工艺条件的研究（单因素实验）??????10 4.2.1微波功率对金银花总黄酮提取影响???????????????10 4.2.2微波时间对金银花总黄酮提取的影响??????????????11 4.2.3固液比对金银花总黄酮提取的影响???????????????12 4.2.4 乙醇浓度对金银花总黄酮提取的影响 ?????????????13 4.3微波辅助提取金银花总黄酮工艺条件研究（正交实验）????????13 4.4 微波辅助提取与传统乙醇回流法比较???????????????15 5．讨论??????????????????????????????17 6．结论??????????????????????????????17 参考文献??????????????????????????????18 致谢????????????????????????????????20
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微波辅助提取金银花总黄酮工艺条件的研究
白玉龙 指导老师：葛立军
（浙江中医药大学生物工程学院，杭州，浙江 310053）
摘 要：目的 本实验采用微辅助提取，分别通过单因素实验、正交实验考察金银花总黄酮的最佳工艺条件，为金银花总黄酮药理药效研究提供材料，同时为其进一步开放奠定基础。方法 以芦丁为对照品，用紫外-可见分光光度法建立芦丁的标准曲线；在单因素试验的基础上，以总黄酮含量为指标，采用正交试验方法考察液固比、乙醇浓度、提取时间等因素对微波提取工艺参数做初步研究。结果 （1）单因素实验结果：金银花总黄酮的最佳提取工艺为乙醇浓度70%，固液比为1:25，微波时间12min, 微波功率406W。（2）正交实验结果：固液比（B）、乙醇浓度%（A）和微波功率W（C）对指标影响显著。根据以上分析，可定出影响指标的因素显著性主次顺序为：ACBD。总黄酮的优选浸提条件（各因子优水平组合）为最佳提取功率为406W，最佳提取时间为12min，最佳固液比1:25，最佳乙醇浓度为70%。（3）以总黄酮得率为指标，微波辅助提取优于传统回流提取法。 结论 该方法提高了黄酮的提取率，减少了有机溶剂用量，缩短了提取时间。
关键词：金银花；总黄酮；微波辅助提取；正交试验法； 乙醇回流
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Microwave-assisted extraction process of flavonoids in honeysuckle Conditions
Bai Yulong Director：Gelijun
（Bioengineering College, Zhejiang Chinese Medical University, Hangzhou, China,
310053）
Abstract: Objective The purpose of micro-assisted extraction process of total flavonoids in
honeysuckle conditions of a preliminary study and with the traditional craft make that nol compared to optimize the extraction of total flavonoids in honeysuckle conditions. Method Use rutin as reference substance, by ultraviolet-visible spectro photometry rutin standard curves set up; in the single factor test, based on the total flavonoid content as an index, using orthogonal test approachto liquid-solid ratio, ethanol concentration , extraction time on the microwave extraction process parameters to do a preliminary study. Conclusion The experimental results show that: The yield of total flavonoids as an index, microwave-assisted extraction is superior to the traditional reflux extraction method, total flavonoids in honeysuckle the best extraction process for the 70% ethanol concentration, solid-liquid ratio of 1:25, microwave time to 12min, microwave power 406W.
Key words: honeysuckle ; total flavonoids; microwave-assisted extraction; orthogonal test method;
ethanol return
引 言
微波辅助萃取[1-2] ( microwave assisted extraction) MAE又称微波辅助提取，是
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指使用适合的溶剂在微波 反应器中从天然药用植物、矿物或动物组织中提取各种化学成分的技术和方法。MAE是在分析化学中派生出来的新型萃取技术，和传统的水蒸气蒸馏、索氏抽提等技术比较，微波提取技术可以缩短萃取时间、降低能耗、减少溶剂用量、提高收率和纯度、降低生产成本，不仅具有很高的经济效益， 而且有望改变中草药传统的服用方式。微波提取由于其快速高效分离及选择性加热的优势， 在天然产物[2]有效成分的提取方面受到重视，目前 ，利用微波技术提取中药和天然产物生物活性成分，已涉及黄酮类、苷类、多糖、萜类、挥发油、生物碱、鞣质、甾体及有机酸等。
陈斌[3]等利用微波萃取葛根异黄酮的工艺，采用77％乙醇，固液比为 1:1 4 ，且在体系温度低60℃的前提下，微波间隙处理3次，葛根总黄酮的浸出率达96％以上。与传统的热浸提相比，不仅产率高，而且速度快，节能。戴玉锦等通过单因素的特点，大大节省了能源。
王白军4]等对白芥子中总黄酮的微波提取与含量测定[，运用微波技术提取白芥子总黄酮，采用 MCL-3型连续微波反应器中，用80％乙醇，功率400W，反应时间20min，提尽黄酮，比色法测定[7]总黄酮含量，结果测得白芥子中总黄酮含量为 1.85％，平均加样回收率素试验和正交试验对柚皮中黄酮类化合物提取工艺进行了研究。用微波法从柚皮中提取黄酮的最佳工艺条件为，乙醇浓度80％、浸提时间为5 min 、料液比 1:25此时黄酮得率为0. 84mg/g。与传统水浴法的对比试98.96％，相对标准差（RSD）为2.11％( r=6) [8]。首次运用微波技术从白芥子中提取总黄酮，提取速度快，提高了效率，比常规法提取的含量高，其结果令人满意。
本实验采用单因素分组实验方法，在此基础上进行正交试验设计，结合实际情况分别对微波辅助提取法和传统乙醇回流提取法提取金银花总黄酮的最佳工艺进行探究。 1. 材料与方法 1.1 材料
金银花(浙江中医药大学饮片厂提供)60℃烘箱内烘干，打粉备用。 1.2 试剂
芦丁对照品（批号：10080-2003016，含量91.7%）购于中国药品生物制品检定所；所用试剂亚硝酸钠、硝酸铝、氢氧化钠、回收乙醇、95%乙醇皆为分析纯；所用水为去离子水。 1.3 仪器
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粉碎机 （DFT-100克 上海新诺仪器厂） 微波炉 （WP700型 格兰仕微波炉有限公司）； 电子天平 （AG135型 上海精密科学仪器有限公司）； 恒温水浴锅 （018268型 金坛市大地自动化仪器厂）； 旋转蒸发仪 （RE-52 AAA型 上海嘉鹏科技有限公司）； 循环水式真空泵 （SHB-ⅢA 河南省太康科教器材厂）； 电热恒温鼓风干燥箱 （DGG-9140A型 上海森信实验有限公司）； 紫外722型可见分光光度计 （上海光谱仪器有限公司）；
自动平衡离心机 （TDZ5-WS型 赛特湘仪离心机仪器有限公司）。 2. 工艺流程
如图2-1所示：
蒸发浓缩 干燥、溶解 金银花 粉碎、烘干 粉末 浸提、微波处理 滤液 浓缩液 总黄酮粗品
定容 含量计算
2-1 微波辅助提取金银花总黄酮工艺流程图
3. 实验方法
3.1 标准曲线的制备
3.1.1最大吸收波长的选择方法
以亚硝酸钠、硝酸铝和氢氧化钠为显色剂，分别作各样品提取液以及芦丁标准品的吸收曲线，在510nm处均有1个强吸收峰，因此选择510nm为测定波长。
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3.1.2对照品溶液的制备方法
精密称取芦丁对照品10.2mg置50mL容量瓶中，加适量甲醇溶解，并稀释至刻度，摇匀备用。
3.1.3 标准曲线的制备
精密量取对照品溶液0，1，2，3，4，5mL，分别置10mL容量瓶中，加入5%亚硝酸钠溶液0.3mL，振荡摇匀，放置6min；再加入10%硝酸铝0.3mL，振荡摇匀，放置6min；最后加入4%氢氧化钠试液4mL，加甲醇定容至刻度，摇匀，放置15min。采用分光光度法，在510nm处测定吸光度，以对照品量（mg/mL）为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制标准曲线。 3.2 微波提取单因素实验方法
分别考察不同的微波辐射功率,辐射时间,乙醇浓度,固液比对提取效果的影响 3.3 提取工艺正交试验设计方法
系统考察微波提取法的工艺参数，根据已有的资料及实际情况，选用微波辐射功率（A），辐射时间（B），乙醇浓度（C），固液比（D）作为考察因素，以测得的浸提取样品中总黄酮含量为考察指标，选用L9（34）正交表设计，得到供试液。 3.4微波辅助提取法与乙醇回流法比较
比较两种提取方法的处理时间和液固比对总黄酮提取量的影响。传统乙醇回流法提取总黄酮的所需时间比微波辅助提取法提取长得多，且金银花总黄酮提取量比较低;而微波辅助提取的总黄酮较乙醇回流法高。比较此两种方法在最佳条件下的总黄酮含量。
3.5总黄酮含量测定方法
取0.5mL液，加入5%亚硝酸溶液0.3mL荡摇匀，放置6min加入10%硝酸铝0.3mL荡摇匀，放置6min入4%氢氧化钠试液4mL，30%（V/V）乙醇定容至刻度，摇匀，放置15min分光光度法，在510nm定吸光度值由标准曲线计算得总黄酮含量。 4. 结果
4.1 标准曲线绘制
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