南阳市中心医院 输血科质量管理体系
作业指导书
（第二版）
编 辑：徐学新
责任编辑：胡 松
2016年 3月
南阳市中心医院输血科
目 录
第一部分 样本管理类作业指导书
1. 患者准备及原始标本识别?????????????????? 2. 临床医生的指导?????????????????????? 3. 申请单的填写、处理及保存????????????????? 4. 输血相容性检测标本采集容器及必须添加剂、采集类型和量??? 5. 标本采集方法??????????????????????? 6. 标本采集注意事项????????????????????? 7. 安全处置????????????????????????? 8. 血液标本的运送?????????????????????? 9. 输血相容性检测标本的接收与拒收的标准??????????? 10.血液标本的保存?????????????????????? 11.附加检验项目及时间限制?????????????????? 12.因分析失败而需要再检验标本的处理????????????? 13.医疗废物的处理?????????????????????? 14.已检标本的处理存放???????????????????? 15.输血科离心机标准操作程序????????????????? 第二部分 试验方法类作业指导书
1. 试管法鉴定ABO血型标准操作规程?????????????? 2. 试管法鉴定RhD血型标准操作规程?????????????? 3. 微柱凝胶卡式法鉴定ABO正反血型及RhD血型标准操作规程??? 4. 盐水法交叉配血试验标准操作规程?????????????? 5. 凝聚胺交叉配血试验标准操作规程?????????????? 6. 微柱凝胶卡式法交叉配血试验标准操作规程??????????
1 1 2 2 3 3 4 6 6 7 7 7 8 8 8 10 17 20 26 29 32
7. 新生儿溶血病（HDN）血型血清学检查标准操作规程??????? 8. 红细胞不规则抗体筛选标准操作规程????????????? 9. 孕妇血清中红细胞血型抗体效价测定标准操作规程??????? 10.冷自身抗体的鉴定????????????????????? 11.温自身抗体的鉴定????????????????????? 12.毛细管离心分离新老红细胞技术??????????????? 13.酶处理细胞的制备????????????????????? 14.输血相容性检测室内质控标准操作规程???????????? 15.输血科室间质评标准操作规程???????????????? 16.室内质控操作流程（简易版）?????????????????17.输血科试剂质量管理操作规程（试剂质控）???????????附质控品使用说明书???????????????????? 18.手工抗人球蛋白试验操作规程???????????????? 19.Rh血型分型 (试管法)试验标准操作规程??????????? 20.ABO及Rh血型抗体效价测定试验标准操作规程????????? 21.吸收-放散试验标准操作规程????????????????? 22.RhD血型确证试验(卡式抗人球法)标准操作规程???????? 23.可溶性血型物质的测定??????????????????? 24.A1和A2亚型鉴定?????????????????????? 25.B亚型鉴定???????????????????????? 26.全自动血型配血分析仪作业指导书??????????????
27.手工卡式操作规程（简易版）?????????????????28.储存式自身输血操作规程?????????????????? 29.输血相容性实验操作规程??????????????????
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37 48 52 55 57 60 61 63 67 70 78 85 104 111 117 124 129 134 137 139 140
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30.输血科全自动血型分析仪使用要点（优化版）????????? 附：异常实验结果的处理方法?????????????????? 第三部分 仪器类操作规程作业指导书
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1. 4℃贮血冷藏冰箱（SANYO）操作规程?????????????? 194 2. -30℃储血冰箱（SANYO）操作规程??????????????? 195 3. 试剂（标本）冰箱操作规程?????????????????? 4. 血型血清学专用（台式KUBOTA KA-2200）离心机操作规程?????5. 高速式离心机操作规程???????????????????? 6. 毛细管离心机标准操作规程?????????????????? 7. 显微镜（OLYMPUS CH30）操作规程??????????????? 8. 电热恒温箱（HH．W21.600型）操作规程???????????? 9. 冰冻血浆解冻仪（PH-1型）操作规程操作规程??????????10.血小板恒温振荡保存箱（XHZ-ⅢA型）操作规程????????? 11.生物安全柜操作规程????????????????????? 12.自动高频热合机操作规程??????????????????? 13.血液加温器使用原则及操作规程???????????????? 14.PX-T型低温血液操作台操作规程????????????????15.血栓弹力图操作规程????????????????????? 16.TD2-24血型卡离心机操作规程?????????????????17.德国Germany WAECO 半导体血液运输箱使用流程???????? 18.冷链系统概述???????????????????????? 19.老肯牌空气消毒机使用说明?????????????????? 20.免疫微柱孵育器操作规程???????????????????
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南阳市中心医院输血科 质量管理体系 作业指导书 文件编号：NY-ZXYY-SXK-002 作业指导书
作业指导书是临床实验室开展日常工作的指导性文件，是所有参与检验前、检验中、检验后过程的工作人员必须遵守的操作行为指南。
第一部分 样本管理类作业指导书
适用于ABO、Rh血型鉴定、稀有血型抗原测定、不规则抗体筛查与鉴定、交叉配血、抗体效价测定、吸收放散试验、抗人球蛋白试验等标本的采集、接收及处理。有效指导输血相容性检测标本的采集、接收及保存，使标本中的待测成分不受影响，标本量能够满足检测的要求，保证检测结果准确可靠。
一 患者准备及原始标本识别
1、患者血液采集前，应避免跑步、骑自行车、爬楼梯等剧烈的运动，要求患者休息15分钟后进行采血,冬季采血时应保持血液循环通畅。
2、 静脉血标本由临床医护人员采集，遵照医嘱准备好标本采集前所用的容器以及消毒器材、一次性注射器、标本条形码、检验申请单或输血申请单等备用。确认患者姓名、病案(ID)号和血型，并将姓名、ID号、血型和标本条形码贴于采血真空试管上。
3、 采血前应向患者做适当解释，以消除其疑虑和恐惧。如遇患者采血后发生晕厥，可让患者平卧，通常休息片刻即可恢复。必要时可嗅芳香氨酊，针刺或指掐人中、合谷等穴位。
4、 标本条形码上的申请单号是原始标本的唯一标识。 二 临床医生的指导
修改内容及修改人：徐学新
批准人：徐学新 启用日期：2016年3月1日 共 233页 第 1页
南阳市中心医院输血科 质量管理体系 作业指导书 文件编号：NY-ZXYY-SXK-002 1、 临床医生必须对患者讲清楚输血相容性检测的目的、采血时间(住院患者应在早晨卧床时采血；其他人员最好在空腹时采血，急诊除外)及相关注意事项。
2、临床医生应向患者讲清楚采集血液标本前，使用青霉素、非那西丁、氨基比林、磺胺、甲基多巴、肝素、右旋糖酐等药物可能会影响检验结果.临床医生若确认患者近期使用过上述药物，应在申请单中注明或直接通知输血科工作人员，以利于试验结果的正确判断。
三 申请单的填写、处理及保存
1、 临床医生在开具输血申请单或输血相容性检测申请单时，应采用计算机程序进行申请，填写完整。门诊患者包括患者姓名、性别、出生日期或年龄、申请科室、病人ID号、申请日期、标本类型、临床诊断、申请检验项目及特殊说明等；住院患者还需要住院号。输血申请单还需要填写患者输血前检测项目结果，包括ABO及RhD血型、血红蛋白含量、白细胞计数、血小板计数、ALT、HBsAg、抗HCV、抗HIV、梅毒等检验结果。
2、 临床医护人员：根据申请单类别，做好标本采集的准备工作。医护人员采集完血液标本后应在输血申请单或检验申请单上注明采集者姓名及采集时间。
3、 输血工作人员：必须在收到临床医生电子打印的、信息完整的输血申请单或检验申请单时，方可接收标本并实施相应的检验。
4、 输血申请单、相容性检测申请单：至少保存10年。
四 输血相容性检测标本采集容器及必需添加剂、标本采集的类型和量
修改内容及修改人：徐学新
批准人：徐学新 启用日期：2016年3月1日 共 233页 第 2页 南阳市中心医院输血科 质量管理体系 作业指导书 文件编号：NY-ZXYY-SXK-002 标本采集容器是一次性含EDTA-K2或EDTA-K3抗凝剂的真空采血管(规格：12mm×l00mm，紫色)；标本采集的类型是静脉血(特殊情况下可以使用动脉血)；标本量是抗凝血≥2ml。
五 标本采集方法
1、 静脉血液标本采集过程：临床医生开具申请单→临床护士审核合格后，打印申请单条码，检查真空管条码与申请单是否一致→患者做好准备→找好采血静脉并消毒→使用装有EDTA-K2或EDTA-K3的真空管采集静脉血2ml以上→干棉签压迫针刺处→充分混匀标本(在检验申请单上注明标本采集者姓名和采集时间) →送至输血科检测。注意：一次只能抽取一个患者血液，先抽血注入试管再贴lis条码。
2、 静脉血液标本采集部位：通常采用肘部静脉，优先选择顺序是肘正中静脉、贵要静脉、头静脉；如肘部静脉不明显时，可改用手背静脉或内踝静脉，必要时也可从股静脉采血。儿童可用颈外静脉采血，但有危险性，以少用为宜。为保证检测结果准确性，不能在静脉输液同侧臂或输液三通处采集静脉血液标本。
3、 真空采血法：采用真空采血装置(备有软橡皮套管式止血装置)，穿刺回血后，即可将另一端的硬插管插入真空定量的采血试管内，血液足量后，拔出硬插管即止血。整个采血过程无血液外溢和污染。
4、 注射器采血法：血管条件不好时，也可以采用注射器采血，采完后去掉针头，拔掉真空管塞，将静脉血沿试管壁缓慢注入试管内，重新塞紧试管塞。
修改内容及修改人：徐学新
批准人：徐学新 启用日期：2016年3月1日 共 233页 第 3页 南阳市中心医院输血科 质量管理体系 作业指导书 文件编号：NY-ZXYY-SXK-002 六 标本采集注意事项
1、 严格按照无菌技术操作(除按规定穿戴工作服外，还应戴一次性手套和口罩)，防止患者采血部位感染，保证一人一针，杜绝交叉感染。真空采血过程一般情况无血液外溢和污染，如果有血液标本外溢应立即对其用0.2％过氧乙酸溶液或75％乙醇溶液消毒处理。标本采集过程中，对所使用的采集材料应妥善处置，严格执行无菌操作，使用合格的材料，使用前进行严格检查，保证安全；采血人员对所采集的标本应作好登记，并签名。标本采集过程完成后，对所使用的采集材料应及时、妥善处置，保证环境和人员安全。
2、 静脉采血时，止血带压迫时间宜<1分钟，若止血带压迫>2分钟，大静脉血流受阻而使毛细血管内压上升，可有血管内液与组织液交流，影响检测结果。
3、 抗凝管采集血液标本后，立即将试管轻轻颠倒5、6次，使血液与抗凝剂充分混匀。
4、采血时，应尽量避开水肿、血肿部位、输血同侧手臂、瘢痕部位、动静脉瘘管或任何导管同侧手臂以及静脉输液同侧手臂。
七 安全处置 1、锐利(注射器)器具：
1.1不把用过的锐利器具(注射器等)传递给别人；
1．2不要向用过的一次性注射器针头上套针头套，也不要用手毁坏用过的注射器；
1.3把用过的注射器直接放到专门的容器中，统一处理；
修改内容及修改人：徐学新
批准人：徐学新 启用日期：2016年3月1日 共 233页 第 4页 南阳市中心医院输血科 质量管理体系 作业指导书 文件编号：NY-ZXYY-SXK-002 1.4勿将锐利废弃物同其他废弃物混在一起； 1.5勿将锐利废弃物放在儿童可以接触到的地方。 2、废弃物：
2.1处理废弃物必须采用适当的防护设施，常用的防护设施包括乳胶手套、口罩、防护眼镜、隔离衣等。
2.2没有被污染的废弃物可以按一般性废弃物处理(装入黑色袋)；污染的废弃物可以按医疗废弃物(感染性废弃物，装入黄色袋)处理。
3、意外情况处理：
3.1皮肤有损伤或针刺时，建议尽可能挤出伤口血液，用大量的水冲洗；然后用灭菌生理盐水彻底清洗伤口处，并用75％乙醇溶液消毒；最后用防水的敷料包扎伤口；当皮肤损伤或针刺时，怀疑可能有HIV、HBV、HCV感染，立即进行医疗处理并采取有效的医学预防措施如立即注射乙肝疫苗。专家建议在4～6周检测抗体，周期性复查(6周、12周、6个月)，并将结果上报有关部门。
3.2如果被血液或体液喷溅眼睛、黏膜，立即用大量清水或生理盐水冲洗15～20分钟；如果被血液或体液喷溅皮肤，用肥皂液和流动水清洗污染的皮肤，再用75％乙醇或0.5％碘伏进行消毒；怀疑接触HIV、HBV、HCV感染者的血液时，立即进行医疗处理并采取有效的医学预防措施如立即注射乙肝疫苗。专家建议在4～6周检测抗体，周期性复查(6周、12周、6个月)，并将结果上报有关部门。
修改内容及修改人：徐学新
批准人：徐学新 启用日期：2016年3月1日 共 233页 第 5页 南阳市中心医院输血科 质量管理体系 作业指导书 文件编号：NY-ZXYY-SXK-002 3.3处理溢出物必须采用适当的防护设施，常用的防护设施包括乳胶手套、口罩、防护眼镜、隔离衣等；患者标本污染环境时，用卫生纸将溢出物吸收，然后用0.2％过氧乙酸溶液或次氯酸钠(有效氯为1 000～2 000mg／L)溶液擦拭消毒，必要时采用紫外线照射对环境进行消毒处理；患者标本污染衣物时，尽快脱掉污染衣服以防止感染物触及皮肤，将已污染的衣物进行适当的消毒处理。如果被患者标本污染的衣服触及皮肤时，应尽快脱掉被污染衣服并进行淋浴；怀疑标本有传染性疾病，同时应采取有效的医学预防措施。
八 血液标本的运送
1、门诊患者的血液标本由集中采血室负责采集；住院患者的血液标本由临床专职外送人员或医护人员运送。
2、 送检地点：综合病房大楼三层输血科标本收取处。 3、 输血相容性检测标本采集后应立即送检，临床科室不应保存相关标本。
4、 血液标本的运送必须保证运送过程中的安全，防止溢出。 九 输血相容性检测标本的接收与拒收的标准 1、 实验室接收合格血液标本的标准：
1.1输血申请单或输血相容性检测申请单应为电子格式(特殊急诊患者除外)，内容必须齐全，签字、审批符合程序，血液标本容器标志应符合本程序相关要求，标本标志应与申请单的相应内容完全一致；
1.2标本种类(含EDTA-K2或EDTA-K3抗凝剂的静脉血)、标本量(抗凝血2.0ml以上)符合所申请试验的要求；
修改内容及修改人：徐学新
批准人：徐学新 启用日期：2016年3月1日 共 233页 第 6页
南阳市中心医院输血科 质量管理体系 作业指导书 文件编号：NY-ZXYY-SXK-002 1.3 血液标本采集后应立即送检。 2、 实验室拒收血液标本的标准：
2.1在一般情况下，血液标本不符合上述接收标准的，血液标本拒收； 2.2标本凝血、溶血者拒收；
2.3血液标本在运送过程中，容器破裂、标本外溢者拒收。 3、 实验室接收不合格血液标本的说明：当患者处于休克、昏迷或为婴幼儿等特殊情况，血液标本量采集困难，标本量不足2.0ml，但离心后能够满足手工操作所需，实验室可以接收此类不符合接收标准的标本，但必须与临床医生联系，经临床医生同意后，实验室方可接受血液标本，并在申请单上注明。
4、拒收标本应及时通知临床医生或护士，但原始标本由实验室保存，其他人员未经允许不得取走。 十 血液标本的保存
输血相容性检测的标本原则上在检测前不保存，收到标本后应立即进行相关检测，如果暂时无法完成检测，可室温短期保存(一般不超过6小时)。
十一 附加检验项目及时间限制
输血相容性检测静脉血液标本的附加检验项目主要为交叉配血，若原始标本有足够的标本量，在血液标本收到后72小时内（未输血）可提出附加检验申请。
十二 因分析失败而需再检验标本的处理
修改内容及修改人：徐学新
批准人：徐学新 启用日期：2016年3月1日 共 233页 第 7页 南阳市中心医院输血科 质量管理体系 作业指导书 文件编号：NY-ZXYY-SXK-002 1、 输血相容性检测因标本蛋白凝块、球蛋白含量异常等原因无法得到准确结果时，应根据具体情况将试验转入手工操作，排除标本异常对自动化仪器的不良影响，以获得可靠的试验结果。
2、 输血相容性检测因仪器运行异常或仪器没有吸到血液标本，导致仪器检测不出结果，应重新对原始血液标本进行检测。
3、 因特殊、疑难血清学表现，无法获取实验结果，而血液标本已经用完时，可以要求临床科室重新抽取标本，进一步进行相关检测.
十三 医疗废物的处理
检验过程中产生的各种废物，按《医疗废物(液)管理程序》进行处理。
十四 已检标本的处理存放
已经完成输血相容性检测的静脉血标本在4℃条件下保存7天，7天后按《医疗废物(液)管理程序》处理。
十五 输血科离心机标准操作程序 1、目的
规范离心机的操作和维护，保证实验室正常工作 2、适用范围
适用于实验室作血浆、血清等分离工作。 3、操作步骤
3.1 打开电源开关，打开盖板，小心将待离心试管放入护管内，注意对称两边护管内的重量应小于1克，盖上盖板。 3.2 转速调节，根据要求调节旋钮。
修改内容及修改人：徐学新
批准人：徐学新 启用日期：2016年3月1日 共 233页 第 8页 南阳市中心医院输血科 质量管理体系 作业指导书 文件编号：NY-ZXYY-SXK-002 3.3 时间设置，根据所需时间调节旋钮。 3.4 等旋转停止后，打开盖板取出离心管。
3.5 工作日结束时后，关掉电源开关。长时间不用时应拔出电源插头，确保安全。 4、注意事项
4.1 为了延长使用寿命，减少故障发生，必须注意对称两边离心管护管内的等重要求；
4.2 为确保离心机内气溶胶不造成实验室污染，应在停止旋转后方 可打开盖板。
4.3 仪器不使用时请罩防尘罩。
4.4 注意检查仪器的运行情况，并填写《仪器使用、维护登记表》。5、仪器维护
5.1 日常维护——保持机外清洁，注意对称平衡，观察噪音异常； 5.2 月维护——每季度用消毒液清洗护管套及机内；
5.3 按需维护——根据使用频率及时更换碳刷，勿使碳刷后金属丝磨擦整流子轴柱，造成硬性损坏； 5.4 严格按照仪器的关机规程关机。 6、期间核查
离心机的定标不需要特别的周期间隔。 7、相关记录
仪器使用、维护登记表。
修改内容及修改人：徐学新
批准人：徐学新 启用日期：2016年3月1日 共 233页 第 9页 南阳市中心医院输血科 质量管理体系 作业指导书 文件编号：NY-ZXYY-SXK-002 第二部分 试验方法类作业指导书
一、试管法鉴定ABO血型标准操作规程
1、目的
为规范输血科ABO血型鉴定的技术操作，确保鉴定结果准确及临床输血安全有效，依据《输血实验室管理程序》4.1.7条款的要求制定本规程。 2、适用范围
本文件适用于本院输血科ABO血型鉴定的操作过程的规范化管理。 3、方法及原理 3.1方法：试管凝集法
3.2原理：根据红细胞上有或无A抗原或/和B抗原，将血型分为A型、B型、AB型及O型4种。可利用红细胞凝集试验，通过正、反定型准确鉴定ABO血型。所谓正定型，是用已知抗-A和抗-B分型血清来测定红细胞上有无相应的A抗原或/和B抗原；所谓反定型，是用已知A细胞和B细胞来测定血清中有无相应的抗-A或/和抗-B。 4、试剂
4.1血清抗A（市售）、抗B（市售）、抗A+B（健康O型人血清）； 4.2 5%A、B及0型试剂红细胞盐水悬液； 4.3受检者血清或血浆； 4.4受检者5%红细胞盐水悬液; 5、样本采集及处理
用一次性EDTA-K2真空采血管抽取静脉血1ml，将标示有患者姓名、性别、
修改内容及修改人：徐学新
批准人：徐学新 启用日期：2016年3月1日 共 233页 第 10页 南阳市中心医院输血科 质量管理体系 作业指导书 文件编号：NY-ZXYY-SXK-002 年龄、住院号、病室/门急诊、床号等信息的标签贴在标本管上，由医护人员或专门人员将患者标本送交输血科。 6、操作步骤
6.1正定型：取洁净小试管3支，分别标明抗A，抗B和抗A+B，用滴管分别加抗A，抗B和抗A+B。分型血清各1滴于试管底部，再以滴管分别加入受检者5%红细胞盐水悬液1滴，混合。
6.2反定型：另取洁净小试管3支，分别标明A，B和O细胞。用滴管分别加入受检者血清1滴于试管底部，再分别以滴管加入A，B和O型5%试剂红细胞悬液1滴，混合。立即以1000r/min离心1min。
6.3将试管轻轻摇动，使沉于管底的红细胞浮起，先以肉眼观察有无凝集（或溶血）现象。如肉眼不见凝集，应将反应物倒于玻片上，再以低倍镜检查。 7、结果判断：凝集为阳性（+），不凝集为阴性（-），ABO定型结果如下表
ABO正反定型结果
标准血清+被检者红细胞 抗A + - - + 抗B - + - + 抗A+B + + - + 血检者 血型 A B O AB 标准红细胞+被检者血清 A细胞 - + + - B细胞 + - + - O细胞 - - - - 8、干扰：
8.1分型血清质量性能符合要求，用毕后应放冰箱保存，以免细菌污染。 8.2试剂红细胞以3个健康者同型新鲜红细胞混和，用生理盐水洗涤1次，以除去存在于红细胞中的抗体及可溶性抗原。
修改内容及修改人：徐学新
批准人：徐学新 启用日期：2016年3月1日 共 233页 第 11页
南阳市中心医院输血科 质量管理体系 作业指导书 文件编号：NY-ZXYY-SXK-002 8.3试管、滴管和玻片必须清洁干燥，防止溶血。
8.4操作方法应按规定，一般应先加血清，然后再加红细胞悬液，以便容易核实是否漏加血清。
8.5按理IgM抗-A和抗-B与相应红细胞的反应温度以4℃为最强，但为了防止冷凝集现象的干扰，一般仍在室温（20～24℃）内进行试验，37℃可使反应减弱。
8.6离心时间不宜过长或过短，速度不宜过快或过慢，以防止假阳性或假 阴性结果。
8.7观察时应注意红细胞呈特异性凝集、继发性凝固以及缗钱状排列的区别。
8.8判断结果后应仔细核对、记录，避免笔误。
9、凝强度判断:观察结果应仔细，首先注意有无凝集，再按下述情况说明凝集强度：
9.1 4＋：红细胞凝聚成一大块，血清透明清晰。 9.2 3＋：红细胞凝集成数小块，血清尚清晰。
9.3 2＋：红细胞凝集分散成多个小块，可见游离红细胞。 9.4 1＋：肉眼可见大颗粒，周围有较多红细胞。
9.5 ±：镜下可见数个红细胞凝集在一起，周围有很多红细胞。 9.6混合凝集视场（MF,mixed field）：镜下可见数个红细胞凝集，大多数红细胞分散分布为MF。阴性（－）：镜下未见凝集，红细胞均匀分布。 10、质量控制：单克隆抗-A（B）试剂应在有效期内使用，每批次在使用前
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批准人：徐学新 启用日期：2016年3月1日 共 233页 第 12页 南阳市中心医院输血科 质量管理体系 作业指导书 文件编号：NY-ZXYY-SXK-002 应检测特异性及效价，试剂红细胞的质控执行《输血科试剂质控标准操作规程》，每天常规血型鉴定前先做室内质控（具体执行《输血科室内质量控制的标准操作规程》），结果在控后方可将常规检查的报告发出。 11、医学解释：
11.1 血液治疗已成为临床上必不可少的治疗手段。输血必须输入ABO同型血，否则输入的红细胞可能迅速被破坏，导致严重的溶血反应，常常威胁生命甚至造成死亡。所以在临床工作中必须杜绝ABO血型不合的血液输入人体，这以显得十分重要。
11.2 肾、皮肤等器官或组织移植时，必须保证供体与受体之间ABO血型符合，否则将发生排斥反应，造成移植术失败。
11.3 ABO血型不合所致的新生儿溶血病，可导致流产、死胎或因出生后抢救不及时而致死等。目前早期诊断仍依赖于ABO血型血清学检查。 11.4 ABO血型在人群中的分布，可用作遗传距离和聚类的分析，现已知道中国人分为北方、南方两大群，前者以较高B基因，后者以较高O基因为特征。
11.5 其他：如亲子鉴定，法医学上对可疑血迹、精斑、毛发等ABO血型鉴定。
12、最常见的误差来源：
12.1自制分型血清抗体效价太低、亲和力不强，造成定型不准。 12.2患者纤维蛋白原升高或异常蛋白质血症（如多发性骨髓瘤，巨球蛋白血症），可产生缗钱状假凝集。新生儿脐带血中含有华顿胶（Wharton jally）或
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批准人：徐学新 启用日期：2016年3月1日 共 233页 第 13页 南阳市中心医院输血科 质量管理体系 作业指导书 文件编号：NY-ZXYY-SXK-002 操作中使用了质量差的玻璃管（瓶），误认其脱下的胶状硅酸盐为串钱状凝集。 12.3病人输入了高分子血浆代用品或静脉注射造影剂等药物，可引起红细胞聚集，易误认为凝集。
12.4 血清中存在不规则抗体，如A2和A2B型患者血清内有A1抗体，能凝集A1红细胞。此外还有I抗体等。有些癌症患者（如胃癌、胰腺癌等）血中大量的可溶性A或B物质可中和抗体血清的抗体，从而抑制反应，造成假的不凝集。
12.5婴儿尚未产生自己的抗体（出生3~6个月后方逐渐产生），或有从母亲获得的血型抗体，故新生儿不宜用血清作反向定型。
12.6老年人血型抗体水平会下降，某些免疫缺陷的人或慢性淋巴细胞白血病、遗传性无丙种球蛋白血症以及有些用了免疫抑制剂的患者，由于免疫球蛋白下降，血型抗体也下降甚至缺如。可出现反向定性错误。
12.7用近期内输过血的患者血液做对照红细胞，其红细胞是多种红细胞的混合物。
12.8病人红细胞已经被大量抗体包被（如某些自身免疫疾病或新生儿溶血病患者的红细胞），或红细胞悬浮于含高浓度蛋白的介质中，红细胞都会自发地发生凝集。
12.9有些人红细胞膜有遗传或获得性异常，易发生多凝集（较罕见）。 12.10 A或B的弱抗原易判断为不凝集（假阴性），而由细菌引起的获得性类B抗原易误判为阳性。
12.11由于患白血病或某些恶性肿瘤（如Hodgkin病）使A或B抗原变弱。
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批准人：徐学新 启用日期：2016年3月1日 共 233页 第 14页 南阳市中心医院输血科 质量管理体系 作业指导书 文件编号：NY-ZXYY-SXK-002 婴儿及老年人的红细胞抗原较青壮年弱，在实验室内保存过久的红细胞及部分衰老的红细胞抗原性也会减弱。
12.12 当用血清配制红细胞悬液时，若血清中有高浓度血型物质则会中和分型血清中的抗体，而不再与红细胞抗原起反应。 12.13红细胞被细菌污染。
12.14嵌合体（chimera）现象，此处指混和细胞群，见于异卵双生子。如有98%O型红细胞，2%B型红细胞会定为O型，但血清中只有抗A抗体。 12.15 用了不洁的玻璃器皿或使用了严重污染的血清、红细胞可出现假阳性。试管沾染了洗涤剂会造成假阴性。
12.16红细胞与血清的比例不当、过度离心或离心不足可引起假阳性或假阴性。
12.17将出现的溶血现象（阳性）误认为阴性结果。
12.18温度过高会造成假阴性。因为ABO血型系统的IgM抗体最适温度为4~22℃，如达37℃凝集力即下降。
12.19 弄错标本、试剂、标签，或出现记录错误。
注意事项:
1、 O型红细胞反应为阴性且抗A、抗B反应强度小于4+、A型红细胞或B型红细胞反应强度小于2+或正反定型不相符，符合上述情况正定型需加做多克隆抗-A、抗-B、抗-H并根据情况加做抗-AB、抗-A1，操作步骤同步骤③，反定型可先加大血清量，从步骤④中的1～2滴血清可最多加至8滴，但需要
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批准人：徐学新 启用日期：2016年3月1日 共 233页 第 15页 南阳市中心医院输血科 质量管理体系 作业指导书 文件编号：NY-ZXYY-SXK-002 在抗体减弱管和O细胞管同时加大血清量，另外根据情况加做A2型红细胞，操作步骤同步骤④，结果判定。
2、 若O型红细胞反应为阳性，其余抗原抗体反应强度符合表1标准相互对应，符合上述情况需对待检血清进行抗体鉴定。
3、 对于正定型单克隆抗-A，抗-B及人源抗-A，抗-B均无法检出抗原，且反定型检出相应抗体的标本，需要进行吸收放散试验，取待检标本压积红细胞1ml，洗涤3次后加入等量人源抗-A或抗-B，同时使用1mlO型压积红细胞进行平行试验，混匀后放入4℃冰箱吸收30分钟，吸收完毕使用冰盐水快速洗涤6次，后进行热放散，收集放散液，并向其中加入1滴A型细胞或B型细胞，1000g离心15秒，肉眼判断红细胞凝集情况，试验管凝集强度高于对照管2+即为阳性结果，反之则为阴性结果。
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南阳市中心医院输血科 质量管理体系 作业指导书 文件编号：NY-ZXYY-SXK-002 在洗涤后的压积红细胞中加入等量的生理盐水，置56℃水浴箱中加热放散，轻摇1分钟混匀细胞后，置水浴中9分钟，迅速以3400转∕分1000g离心1分钟，取上清放散液分成三份于3个标有“A”、“B”、“O”小试管中，分别加入相应的酶处理的A、B、O细胞各1滴，置37℃水浴30分钟，用生理盐水洗涤3次，然后在各管中加1滴抗球蛋白试剂，以3400转∕分1000g离心15秒，看结果。
指示红细胞 Ac + - + -或+ - Bc - + + -或+ - Oc - - - + - 意 义 释放出抗A抗体 释放出抗B抗体 释放出IgG抗AB抗体（可能包括抗A或抗B） 释放出A、B、O血型以外抗体 未释放出抗体 （三）、Rh新生儿溶血病血清学检查（包括其它ABO以外的血型系统引起的新生儿溶血病）
1、标本预处理 同ABO新生儿溶血病 2、血型鉴定 同ABO新生儿溶血病
3、直接抗球蛋白试验 同“ABO新生儿溶血病血清学检查” 4、游离抗体检查
（1）盐水法 取小试管10支，标上1-10号，在各管中加上二滴患儿血清，
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批准人：徐学新 启用日期：2016年3月1日 共 233页 第 42页 南阳市中心医院输血科 质量管理体系 作业指导书 文件编号：NY-ZXYY-SXK-002 并分别加入1滴谱细胞。
（2）抗球蛋白法 记录盐水法结果后，混匀置37℃水浴30分钟，用生理盐水洗涤3次后，加1滴抗球蛋白试剂，以3400转∕分1000g离心15秒，肉眼看结果。
（3）排除ABO溶血 如果需要，取特定Rh血型的ABO红细胞与放散液反应，检测IgG抗A或抗B的含量。 5、释放试验：（乙醚或酸释放抗体法）
（1）乙醚放散 取经洗涤3次的受检者压积红细胞1份加1份生理盐水，2份乙醚，剧烈震荡1-2分钟，然后3400转∕分1000g离心。离心后分成3层，上层是乙醚，中层是红细胞基质，下层是具有抗体的释放液，呈深红色。用吸管吸出底层释放液，置37℃水浴10分钟，除尽乙醚，再离心1次，取上清液即为释放液。
酸放散 三洗并压积红细胞（1ml左右），加入等量的酸，轻轻混匀，3400r/min离心一分钟，取上清液于另一干净试管中，向上清液中滴加碱试剂，直到变色为止（浅蓝色）。离心去沉淀（久保田离心机HLA档）。
（2）抗体检测 预留200ul左右释放液以备其它试验，其余平均分配到10支试管中与1组谱红细胞作间接抗球蛋白试验，以鉴定抗体。
（3）排除ABO溶血 如果需要，取特定Rh血型的ABO红细胞与放散液反应，检测IgG抗A或抗B的含量。
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结论 试验项目 直接抗球蛋白试验 游离抗体检查 释放试验
ABO-HDN 可疑ABO-HDN 非ABO-HDN + + + - + + + - + - - + - + - + - - - - -
附表1 新生儿溶血病检查记录单
附表2 新生儿溶血病检查报告单 附表3
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南阳市中心医院输血科产前血型血清学试验报告单
孕妇 姓 名 资料 孕、产史 实 验 结 果 不规则抗体筛选： IgG抗体效价: 年 龄 岁 血 型 孕周数 配偶血型
检 验 者： 复 核 者：
收到日期： 年 月 日 报告日期： 年 月 日
备注：本报告只对所检测的标本负责，如有疑问请在三日内与我实验室联系，电话：0377-61660031
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