蚂蟥药材质量标准起草说明
【历史沿革】 《中国药典》（1963年版一部、1977年版一部、1985年版一部、1990年版一部、1995年版一部、2000年版一部、2005年版一部、2010年版一部）收载“水蛭”来源之一，药用干燥全体。
水蛭始载于《神农本草经》，历代本草[1-4]及历版《中国药典》均有收载，药用全体。
【药材名称】 本品为《中国药典》收载“水蛭”项下来源之一。目前多为人工养殖，现制订其标准，将药材名称定为“蚂蟥”。
其他称谓 马蛭、宽身金线蛭、宽身蚂蟥；蛭蝚、至掌、虮、蚑、马蜞、蜞、马蟥、马鳖、红蛭、水琪、蚂蟥蜞、黄蜞、水麻贴、沙塔干、肉钻子、蚂蟥[5-6]。 药材拉丁名 WHITMANIA PIGRA WHITMAN
【来源】 本品经中国科学院昆明动物研究所鉴定为水蛭科动物蚂蟥Whitmania pigra Whitman。
动物形态 体略呈纺锤形，长一般60～130mm，宽13～20mm。背面暗绿色，有5条纵行的黑色间杂淡黄色的斑纹，此黄色部分由各体节中间3环上的圆形斑点构成。腹面两侧以及中间共有9条断续的黑色纵纹。体分107环，节Ⅶ的背面可见4环，腹面仅有3环。体中部完全体节各有5环。眼5对，排列如医蛭型。前吸盘小，口内有颚，颚上有两行钝的齿板。雄性与雌性生殖孔分别位于节Ⅺ和Ⅻ的b5/b6环沟上，两孔相隔5环。射精球细长，贮精囊不发达，常附于前者的下面。阴茎囊相当粗大[7]。
产地及分布 在我国广泛分布，吉林、辽宁、河北、内蒙古、宁夏、甘肃、陕西、山西、山东、江苏、安徽、浙江、江西、湖北、贵州；国外仅见于日本[7]。现多为人工养殖。
生态环境 生长于水田、沟渠、湖沼中，取食螺类[7]。
药用部位 《中国药典》（2010年版一部）收载“水蛭”药用部位为干燥全体。 采集加工 本品夏、秋二季捕捉后，洗净，用沸水烫死，晒干或低温干燥[8]。
品种应用情况 水蛭为传统中药，除配方用药外，目前以水蛭为主要原料的成药制剂“脉血康胶囊”、“活血通脉胶囊”、“疏血通注射液”等。
试验材料 云南海瑞迪生物药业有限公司提供，经鉴定为水蛭科动物蚂蟥。 【性状】 本品根据药材实物描述，与《中国药典》（2010年版一部）收载“水蛭”项下“蚂蟥”描述一致。
【成分】 本研究表明，本品含大量胆甾醇。文献研究表明，蚂蟥含有天山冬氨酸、丝氨酸、谷氨酸等17种氨基酸及Zn、Mn、Cu、Sr、Fe、Hg、Cd等多种微量元素[9]；含有花生四烯酸、亚油酸、亚麻酸等不饱和脂肪酸及硬脂酸、月桂酸、棕榈酸、肉豆蔻酸等饱和脂肪酸[10]。此外，其体内还含有水蛭素、组胺样物质、肝素、抗血栓素等多种活性成分。
【鉴别】 薄层鉴别 《中国药典》（2010年版一部）收载“水蛭”项下有薄层鉴别一项。
分析方法的验证
供试品溶液的制备 方法1取本品粉末1g，加甲醇5ml，超声处理15分钟，滤过，取滤液作为供试品溶液。
方法2取本品粉末1g，加乙醇5ml，超声处理15分钟，滤过，取滤液作为供试品溶液。
方法3取本品粉末1g，加稀乙醇5ml，超声处理15分钟，滤过，取滤液作为供试品溶液。
方法4取本品粉末1g，加生理盐水5ml，超声处理15分钟，滤过，取滤液作为供试品溶液。
方法5 取本品粉末1g，加甲醇25ml，浸泡1小时，加热回流1小时，滤过，滤液蒸干，残渣加乙醇5ml溶解作为供试品溶液。
方法6 取本品粉末1g，加乙醇25ml，浸泡1小时，加热回流1小时，滤过，滤液蒸干，残渣加乙醇5ml溶解作为供试品溶液。
方法7取本品粉末1g，加稀乙醇25ml，浸泡1小时，加热回流1小时，滤过，滤液蒸干，残渣加乙醇5ml溶解作为供试品溶液。
方法8 取本品粉末1g，加生理盐水25ml，浸泡1小时，加热回流1小时，滤过，滤液蒸干，残渣加乙醇5ml溶解作为供试品溶液。
对照物质的选用 《中国药典》（2010年版一部）收载“水蛭”项下采用水蛭对照药材为对照，本品采用蚂蟥对照药材作为对照物质。照供试品溶液制备方法制备对照药材溶液。
展开剂及展开方式 环己烷-乙酸乙酯(4:1)；环己烷-乙醚（4:1）；环己烷-乙酸乙酯-氨水(4:1:0.5) ；环己烷-乙酸乙酯-甲酸(4:1:0.5)；石油醚（60～90℃）-乙酸乙酯 （4:1）；三氯甲烷-甲醇（20:1、40:1、60:1）；石油醚（60～90℃）-丙酮（6:1）；环己烷-丙酮（6:1）。上行展开，展7～10cm。
检视方法的选择 喷以10%硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰，日光下检视，再置于紫外光灯（365nm）下检视；喷以10%茚三酮乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰；置于碘蒸汽中熏蒸显色。 表1不同检视方法研究结果 检视方法 喷以10%硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰 碘蒸汽中熏蒸显色 检视结果 两个紫红色主斑点 一个黄色主斑点 喷以10%茚三酮乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰 无斑点 喷以10%硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰，置于紫外光（365nm）灯下检视 耐用性
不同厂牌的薄层板 硅胶G薄层板（青岛海洋化工厂分厂）、硅胶G薄层板（青岛美高集团有限公司）
点样方式点样量 点样方式为接触点样；点样量为1μl 、2μl、 3μl、4μl、5μl。
温度及相对湿度的影响 按照试验所的薄层色谱条件，考察本品在温度15℃、25℃、35℃，相对湿度为40%、65%、80%展开时，对薄层色谱的影响。结果表明，在上述温度、湿度范围内对该薄层色谱结果无明显影响。
预平衡的影响 按照试验所的薄层色谱条件，考察未平衡、平衡15分钟、平衡30分钟展开，对薄层色谱的影响。结果表明，在未平衡、平衡15分钟及平衡30分钟展开，所的斑点的分离度均较好。为简化操作程序，采用未平衡操作展开。
重复性实验 测定3个不同批次的样品，检测结果表明，该方法具有重复性。 验证结果 实验表明，采用方法2制备供试液品溶液，硅胶G薄层板，点样量为2μl，以环己烷-乙酸乙酯（4:1）为展开剂，喷以10%硫酸乙醇溶液，在105℃
两个橙红色荧光斑点 加热至斑点显色清晰，再置于紫外光灯（365nm）下检视，色谱斑点清晰，分离较好，结果易判断。
【检查】 《中国药典》（2010年版一部）收载“水蛭”项下有水分、总灰分、酸不溶性灰分、酸碱度检查项。
水分 测定3个不同批次的蚂蟥样品，测定结果见表2，根据测定结果，将本品水分限度定为不得过18.0%，纳入标准。
总灰分 测定3个不同批次的蚂蟥样品，测定结果见表2，根据测定结果，将本品总灰分限度定为不得过8.0%，纳入标准。
酸不溶性灰分 测定3个不同批次的蚂蟥样品，测定结果见表2，根据测定结果，将本品酸不溶性灰分限度定为不得过1.0%，纳入标准。
重金属 测定3个不同批次的蚂蟥样品，测定结果均未超过百万分之十，结果见表2，未纳入标准。
酸碱度 取本品粉末(过三号筛)约lg，加入0.9％氯化钠溶液10ml，充分搅拌，浸提30分钟，并时时振摇，离心，取上清液，照pH值测定法(附录ⅦG)测定3个不同批次的蚂蟥样品，测定结果见表2，根据测定结果，将本品酸碱度限定为pH 4.5～6.5，纳入标准。
表2水分、总灰分、酸不溶性灰分、酸碱度、重金属测定结果 批号 20130611 水分（%） 总灰分（%） 酸不溶性灰分（%） 酸碱度 12.73 11.43 14.51 20130614 14.53 14.64 13.33 平均值 13.53 4.62 4.57 4.51 4.45 4.43 4.38 4.49 0.44 0.42 0.42 0.40 0.39 0.37 0.41 5.91 5.77 5.93 5.80 5.90 5.79 5.85 重金属 ＜百万分之十 ＜百万分之十 ＜百万分之十 ＜百万分之十 ＜百万分之十 ＜百万分之十 ＜百万分之十 20130617 【浸出物】 《中国药典》（2010年版一部）收载“水蛭”项下有此项目，采用稀乙醇为溶剂，热浸法，测定。检测3个不同批次的蚂蟥样品，测定结果见表3，根据测定结果，将本品浸出物的限度定为不得少于15.0%，纳入标准。
表3蚂蟥浸出物测定表
批号 20130611 20130614 20130617 稀乙醇浸出物（%） 21.10 20.82 19.45 21.92 20.89 21.00 20.86% 平均值（%）
【含量测定】 《中国药典》（2010年版一部）收载“水蛭”项下有此项，含量测定限度为每1g含抗凝血酶活性蚂蟥应不低于3.0U。
本品按照《中国药典》（2010版一部）收载“水蛭”项下含量测定方法，检测3个不同批次的蚂蟥样品，测定结果见表4，根据测定结果，将本品抗凝活性，按凝血酶的量计，限度定为每1g含抗凝血酶活性应不低于3.0U ，纳入标准。
表4蚂蟥抗凝活性测定表
批号 20130611 20130614 20130617
【性味与归经】 参照《中国药典》（2010年版一部）收载“水蛭”项下规定性味、归经拟定：咸、苦，平；归肝、脾经。
【功能与主治】 参照《中国药典》（2010年版一部）收载“水蛭”项下规功能主治拟定：破血通经，逐瘀消癥。用于血瘀经闭，癥瘕痞块，中风偏瘫，跌扑损伤。近代用于抗脑血栓形成，高脂血症、肺心病，前列腺肿大等。
【用法与用量】 与《中国药典》（2010年版一部）收载“水蛭”相同。
表1 蚂蟥功能与主治、用法与用量对照表
《参考文献》 ［1］《中国药典》 抗凝活性测定（U） 3.86 3.84 3.86 3.86 3.86 3.85 平均值（U） 3.86 药用部位 性味与归经 功能与主治 用法与用量 咸、苦，平；有破血，逐瘀，通经。用于干燥全体 小毒。归肝经。 徵瘕痞块，血瘀经闭，跌 扑损伤。 1-3g
续表 《参考文献》 药用部位 性味与归经 功能与主治 用法与用量 ［2］《神农本草经》 味咸、平 干燥全体 主逐恶血; 瘀血月闭，破血瘕积聚，无子; 利水 道。 无 ［3］《本草经集注》 味咸、苦平微逐恶血，瘀血，月闭，干燥全体 寒。 破血瘕，积聚，无子。 利水道，又堕胎。 无 ［4］《新修本草》 味咸、苦平、微主逐恶血，瘀血，月闭，干燥全体 寒，有毒 破血瘕，积聚，无子， 利水道，又堕胎 无 ［5］《名医别录》 干燥全体 味苦，微寒，有主堕胎。 毒 无
急性毒性试验 云南中医学院中药药理实验室(国家中医药管理局中医药科研三级实验室)对蚂蟥粉进行了小鼠急性毒性试验，最大浓度、最大灌胃体积下给予动物未见死亡，故测其经口给药的最大耐受量。取22～25g清洁级昆明小鼠40只，分为2组，雌雄各半，以17.92g生药 /kg，按40ml/kg给药，24小时内灌胃给药两次，观察14天。结果表明小鼠的最大耐受量为17.92g生药/kg，相当于临床成人（体重按60kg计）拟用量的358.4倍。与对照组（生理盐水）比较，给药组小鼠体重、饮食、外观、皮毛、行为、分泌物、排泄物均未见明显异常，亦无死亡。实验结束后处死小鼠，肉眼观察各主要脏器未见异常。
【注意】 与《中国药典》（2010年版一部）收载“水蛭”相同。 【贮藏】 与《中国药典》（2010年版一部）收载“水蛭”相同。
参考文献
1 顾观光 . 神农本草经［M］． 杨鹏举校注．北京：学苑出版社，2008. 300. 2 陶弘景 . 本草经集注［M］． 尚志钧，尚元胜辑校．北京：人民卫生出版
社，1994.458.
3 苏敬. 新修本草［M］． 尚志钧辑校．合肥：安徽科学技术出版社，2004. 241. 4 陶弘景． 名医别录［M］． 尚志钧辑校．北京： 人民卫生出版社，1986. 301. 5 江苏新医学院中药大辞典编写组.中药大辞典（上册）.上海：上海科学技
术出版社，1977.1056
6 《全国中草药汇编》编写组编.全国中草药汇编（下册）第二版.北京：人
民卫生出版社，1996.132～133
7 杨潼. 中国动物志蛭纲[ M] .北京: 科学出版社, 1996.136-139 8 国家药典委员会编. 中国药典（2010年版一部）［S］.北京：中国医药科
技出版社，2010.77～78
9 郭文菊，李长安.水蛭的氨基酸及微量元素分析.中医药研究.1997,
13(2):46～49
10 刘君，王淳，张颖，等. GC/MS分析中药蚂蟥脂肪酸的组成. 分析器,2005, (2):37～38