实验七放线菌形态的观察
生科15.2 周罡 201500181104
【实验目的】
1. 掌握配制高氏I号培养基的一般方法。 2. 学习并掌握观察放线菌形态的基本方法。 3. 了解放线菌的基本形态。 【实验原理】
1. 高氏I号培养基
高氏I号培养基是用来培养和观察放线菌形态特征的合成培养基。此合成培养基的主要特点是含有多种化学成分已知的无机盐，这些无机盐可能相互作用而产生沉淀。因此，在混合培养基成分时，一般是按配方的顺序依次溶解各成分，甚至有时还需要将二种或多种成分分别灭菌，使用时再按比例混合。此外，合成培养基有的还要补加微量元素，如Fe元素。
2. 放线菌
放线菌是指能形成分枝丝状体或菌丝体的一类革兰氏阳性细菌。常见放线菌大多能形成菌丝体，紧贴培养基表面或深入培养基内生长的叫基内菌丝（简称“基丝”），基丝生长到一定阶段还能向空气中生长出气生菌丝（简称“气丝”），并进一步分化产生孢子丝及孢子。有的放线菌只产生基丝而无气丝。
在显微镜下直接观察时，气丝在上层、基丝在下层，气丝色暗，基丝较透明。孢子丝依种类的不同，有直、波曲、各种螺旋形或轮生。在油镜下观察，放线菌的孢子有球形、椭圆、杆状或柱状。能否产生菌丝体及由菌丝体分化产生的各种形态特征是放线菌分类鉴定的重要依据。
3. 插片法观察放线菌
将放线菌接种在琼脂平板上，扦上灭菌盖玻片后培养，使放线菌菌丝沿着培养基表面与盖玻片的交接处生长而附着在盖玻上。观察时，轻轻取出盖玻片，置于载玻片上直接镜检。这种方法可观察到放线菌自然生长状态下的特征，而且便于观察不同生长期的形态。 【实验器材】
1. 菌种
青色链霉菌，弗氏链霉菌 2. 溶液和试剂
可溶性淀粉，NaCl，KNO3，K2HPO4·3H2O，MgSO4·7H2O，FeSO4·7H2O，琼脂，酒精
3. 仪器和其他用品 酒精灯，盖玻片，培养皿，普通光学显微镜，，双层瓶（内有香柏油和二甲苯），锥形瓶，解剖刀，镊子 【实验步骤】
1. 高氏I号培养基的配制
按照附件一中的配方配制100mL高氏I号培养基置于300mL锥形瓶中，加塞包好。 2. 灭菌
将5套培养皿用牛皮纸包好，盖玻片10片1包，包4包，同配制好的培养基一起放入蒸汽灭菌锅中110℃灭菌30min。
3. 倒平板
在无菌操作台上，取融化并冷至大约50℃的高氏I号琼脂约20mL倒平板，凝固待用。 4. 接种
在无菌操作台上，用接种环无菌操作分别由青色链霉菌和弗氏链霉菌菌种斜面培养物挑取适量菌在琼脂平板上之字划线。（注：划线后，用记号笔在培养皿底部标记好划线方向）
5. 插片
在无菌操作台上，无菌操作用解剖刀在平板上垂直于划线方向划4条裂口，用镊子将灭菌的盖玻片以大约45°插入划好的裂口内。（注：解剖刀和镊子不用时浸泡在酒精中，使用时灼烧冷却后再进行下一步的操作）
6. 培养
将平板倒置，于28℃培养7d。 7. 镜检
用镊子小心拔出盖玻片，用纸擦去一面培养物，然后将有菌的一面朝下放在载玻片上，直接用低倍镜和高倍镜镜检观察，必要时可用油镜观察。 【实验结果】 青色链霉菌 弗氏链霉菌
附件一：高氏I号培养基配方
20g 可溶性淀粉
KNO3 1g NaCl 0.5g K2HPO4 0.5g MgSO4 0.5g FeSO4 0.01g
20g 琼脂
1000mL 水
pH 7.2~7.4
配制时，先用少量冷水，将淀粉调成糊状，倒入煮沸的水中，在火上加热，边搅拌边加入其他成分，溶化后，补足水分至1000mL