附录I 培养基配方
1 营养琼脂培养基（NA）
主要用于细菌的分离和培养，也可用于细菌的纯化和保存。不加琼脂粉，即配成营养肉汤（NB）培养液。培养基成分如下：
蛋白胨 牛肉浸膏 葡萄糖 酵母粉 琼脂粉 蒸馏水 pH
5.0g 3.0g 2.5g 1.0g 16.0~18.0g 1000ml 7.0~7.2
配制方法：将称好的琼脂，加热熔化；另称取蛋白胨、牛肉浸膏、葡萄糖和酵母粉，溶于少量热水后加入混匀；用5mol/L NaOH调节pH；然后加水定容至1000ml。分装试管或三角瓶后，121℃灭菌20min。 2 Luria-Bertani培养基（LB）
本培养基营养比较充分，主要用于细菌的液体培养。加入16.0~18.0g的琼脂粉，配成固体培养基。培养基成分：
酵母粉 胰蛋白胨 NaCl 蒸馏水 pH
5.0g 10.0g 10.0g 1000ml 7.2~7.4
配制方法：称取酵母粉、胰蛋白胨和NaCl，溶于适量蒸馏水；用5mol/L NaOH调节pH；然后加水定容至1000ml。分装试管或三角瓶后，121℃灭菌20min。 3 金氏B培养基（KB）
本培养基主要用于细菌（荧光假单胞杆菌）的分离。培养基成分：
蛋白胨 MgSO4?7H2O K2HPO4?H2O 纯甘油 琼脂粉 蒸馏水 pH
20.0g 1.5g 1.8g 10.0ml 16.0~18.0g 1000ml 7.2~7.4
配制方法：将称好的琼脂，加热熔化；另称量蛋白胨、MgSO4?7H2O、K2HPO4?H2O和纯甘油，溶于少量热水后加入混匀；用5mol/L NaOH调节pH；然后加水定容
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至1000ml。分装三角瓶后，112℃灭菌30min。 4 胰蛋白胨大豆胨琼脂培养基（TSA）
本培养基主要用于芽孢杆菌的分离。培养基成分：
胰蛋白胨 大豆胨 NaCl 琼脂 蒸馏水 pH
15.0g 5.0g 5.0g 16.0~18.0g 1000ml 7.2~7.4
配制方法：将称好的琼脂，加热熔化；另称取胰蛋白胨、大豆胨和NaCl，溶于少量热水后加入混匀；用5mol/L NaOH调节pH；然后加水定容至1000ml。分装三角瓶后，121℃灭菌20min。
5 酵母粉琼脂培养基（YPA）
本培养基营养较少，主要用于细菌的长期保存。培养基成分：
酵母粉 NH4Cl KCl MgSO4?7H2O K2HPO4 琼脂粉 蒸馏水 pH
3.0g 0.5g 0.2g 0.2g 1.0g 5.0g 1000ml 7.0~7.2
配制方法：将称好的琼脂，加热熔化；另称量酵母粉、NH4Cl、KCl、MgSO4?7H2O和K2HPO4，溶于少量热水后加入混匀；用5 mol/L NaOH调节pH；然后加水定容至1000 ml。分装三角瓶后，112℃灭菌30 min。 6 基础培养基（CM）
主要用于细菌糖或醇的利用和分解试验。加入3.0~5.0g的琼脂粉，可以配成半固体培养基。培养基成分：
NH4NO3 MgSO4?7H2O (NH4)2SO4 KH2PO4 K2HPO4 NaCl 蒸馏水 pH
1.0 g 0.5 g 0.5 g 0.5 g 1.5 g 0.5 g 1000 ml 7.0~7.2
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配制方法：先称取所有药品，溶于少量热水，调节pH后加入3ml 1%溴百里酚蓝水溶液，待呈绿色，再加入糖、醇至终浓度为0.1~0.2%，使之溶解，然后加水定容至1000ml。分装试管后，121℃灭菌20min。 7 蛋白胨水培养基
主要用于细菌的糖或醇的发酵试验，也可用于细菌的硝酸盐还原试验。培养基成分：
蛋白胨 NaCl 蒸馏水 pH
10.0 g 5.0 g 1000 ml 7.2~7.4
配制方法：先称取蛋白胨和NaCl，溶于少量热水，调节pH后加入溴甲酚紫（1.6%水溶液），待呈紫色，再加入糖、醇或KNO3至终浓度为0.1~0.2%，使之溶解，然后加水定容至1000ml。分装试管后，最后将杜氏小管倒置放入试管中（观察试验中是否有产气）。121℃灭菌20min。
8 马铃薯葡萄糖琼脂培养基（PDA）
主要用于真菌的分离、培养和保存，以及细菌对真菌的拮抗测定。也可用蔗糖代替葡萄糖，这样配制的培养基也称为PSA。不加琼脂粉，即配成PDA培养液。培养基成分：
马铃薯
葡萄糖（或蔗糖） 琼脂 蒸馏水 pH
200g 20.0g 16.0~18.0g 1000ml 自然
配制方法：将马铃薯洗净去皮，称量，切成小块，放入锅中，加蒸馏水1000ml，煮沸30min；稍冷后，用四层纱布滤去马铃薯残渣；将滤液放回锅中，加入称好的琼脂，加热熔化；然后加入葡萄糖或蔗糖，充分溶解后，补加蒸馏水，定容至1000ml。分装试管或三角瓶后，121℃灭菌20min。
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附录II 试剂与溶液的配制
1 常用缓冲液
（1）0.2 mol/L磷酸盐缓冲液
pH 5.8 5.9 6.0 6.1 6.2 6.3 6.4 6.5 6.6 6.7 6.8 6.9
0.2 mol/L Na2HPO4/ml
8.0 10.0 12.3 15.0 18.5 22.5 26.5 31.5 37.5 43.5 49.5 55.0
0.2 mol/L NaH2PO4/ml
92.0 90.0 87.7 85.0 81.5 77.5 73.5 68.5 62.5 56.5 51.0 45.0
pH 7.0 7.1 7.2 7.3 7.4 7.5 7.6 7.7 7.8 7.9 8.0
0.2 mol/L Na2HPO4/ml
61.0 67.0 72.0 77.0 81.0 84.0 87.0 89.5 91.5 93.0 94.7
0.2 mol/L NaH2PO4/ml
39.0 33.0 28.0 23.0 19.0 16.0 13.0 10.5 8.5 7.0 5.3
注：Na2HPO4·2H2O分子量＝178.05，0.2 mol/L溶液含35.61 g/L；Na2HPO4·12H2O分子量＝358.22，0.2 mol/L溶液含71.64 g/L；NaH2PO4·H2O分子量＝138.01，0.2 mol/L溶液含27.6 g/L；NaH2PO4·2H2O分子量＝156.03，0.2 mol/L溶液含31.21 g/L。
（2）0.1 mol/L Tris-HCl缓冲液
pH 7.1 7.2 7.3 7.4 7.5 7.6 7.7 7.8 7.9 8.0
X/ml 45.7 44.7 43.4 42.0 40.3 38.5 36.6 34.5 32.0 29.2
pH 8.1 8.2 8.3 8.4 8.5 8.6 8.7 8.8 8.9
X/ml 26.2 22.9 19.9 17.2 14.7 12.4 10.3 8.5 7.0
注：三羟甲基氨基甲烷（Tris）分子量＝121.14，0.1mol/L溶液为12.114 g/L。50ml 0.1 mol/L三羟甲基氨基甲烷（Tris）溶液于X ml 0.1 mol/L盐酸混匀后，加水稀释至100 ml。Tris溶液可以从
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空气中吸收二氧化碳，使用时注意将瓶盖严。
（3）0.2 mol/L硼酸-硼砂缓冲液
pH 7.4 7.6 7.8 8.0
0.05 mol/L 硼砂/ml 1.0 1.5 2.0 3.0
0.2 mol/L 硼酸/ml 9.0 8.5 8.0 7.0
pH 8.2 8.4 8.7 9.0
0.05 mol/L 硼砂/ml 3.5 4.5 6.0 8.0
0.2 mol/L 硼酸/ml 6.5 5.5 4.0 2.0
注：硼砂Na2B4O7·10H2O分子量＝381.43，0.05 mol/L（=0.2 mol/L硼酸根）溶液为19.07 g/L；硼酸H3BO3分子量＝61.84，0.2 mol/L溶液为12.37 g/L。硼砂易失去结晶水，必须在带塞的瓶中保存。
（4）0.1 mol/L柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液
pH 3.0 3.2 3.4 3.6 3.8 4.0 4.2 4.4 4.6 4.8
0.1 mol/L 柠檬酸/ml 18.6 17.2 16.0 14.9 14.0 13.1 12.3 11.4 10.3 9.2
0.1 mol/L 柠檬酸钠/ml
1.4 2.8 4.0 5.1 6.0 6.9 7.7 8.6 9.7 10.8
pH 5.0 5.2 5.4 5.6 5.8 6.0 6.2 6.4 6.6
0.1 mol/L 柠檬酸/ml
8.2 7.3 6.4 5.5 4.7 3.8 2.8 2.0 104
0.1 mol/L 柠檬酸钠/ml
11.8 12.7 13.6 14.5 15.3 16.2 17.2 18.0 18.6
注：柠檬酸C6H8O7·H2O分子量＝210.14，0.1 mol/L溶液含21.01 g/L；柠檬酸钠Na3C6H5O7·2H2O分子量＝294.12，0.1 mol/L溶液含29.41 g/L。
（5）0.2 mol/L乙酸-乙酸钠缓冲液
pH 3.6 3.8 4.0 4.2 4.4 4.6
0.2 mol/L NaAc/ml 0.75 1.20 1.80 2.65 3.70 4.90
0.2 mol/L HAC/ml 9.25 8.80 8.20 7.35 6.30 5.10
pH 4.8 5.0 5.2 5.4 5.6 5.8
0.2 mol/L NaAc/ml 5.90 7.00 7.90 8.60 9.10 9.40
0.2 mol/L HAC/ml 4.10 3.00 2.10 1.40 0.90 0.60
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