D.双链克隆后测序
答 案：
1.A B 在Tm值允许的范围内，选择偏高的退火温度可以减少引物和模板的非特异性结合，提高PCR反应的特异性；退火时间一般选择30秒－1分钟，足以使引物和模板结合完全 2.A B C D 隔离不同的操作区, 分装试剂，减少重复取样所致的误差, 严格实验操作污染, 设立实验对照 3.A B
4.A B C D E
5.B C DA PCR的引物设计长度一般为15～30个核苷酸，过长会提高相应的退火温度，并
‘
使延伸温度>TaqDNA聚合酶的最适温度，影响产物的生成。 引物的3端碱基是延伸的起点，必须与模板严格配对结合
6. A C D E 原位PCR无需从组织细胞中分离模板 7.B DB Mg浓度过低会降低TaqDNA酶的活性，Mg浓度过高又会使酶催化非特异性扩增增强。引物浓度一般为0.1-0.5μmol/L 8. A B C D 9. A B C D E
10. ABCD PCR反应的模板可以是DNA,也可以是RNA(先逆转录生成cDNA, 后行PCR反应), 大多数用途的PCR对DNA模板的要求并不严格(大量的实验数据表明存在一定量的蛋白质或者SDS对实验过程影响不大),并且模板用量很低但依然要达到一定的水平.对于PCR的标本处理最基本的就是出去杂质.
11.AD 反应体系中应该还包括RNA酶抑制剂, 当逆转录反应于42℃进行后,应该将反应混合物加热再95℃5分钟,灭活逆转录酶,然后取2μl反应产物行以DNA为模板的PCR反应 12. BD PCR的扩增过程遵循酶的催化动力学原理,在PCR的反应初期, 目的DNA片断呈指数扩增, 随着目的DNA产物的积累,酶的催化反应趋于饱和,出现平台期.并且到达平台期所需的PCR循环数目取决于样品中模板的拷贝数,PCR扩增效率,DNA聚合酶的种类和活性,以及非特异产物的竞争等因素.
2+
13.BCDE Mg过低,会显著降低酶的活性, 过高又使酶催化非特异性扩增增强, Taq DNA酶
2+2+
的活性与反应体系中的游离Mg有关, 而Mg又和引物,模板,dNTP分子中的磷酸基团结合从
2+2+
而使游离Mg浓度下降,所以Mg的总量应该高于dNTP的量.
14.ABCE PCR反应中,应该使四种dNTP等摩尔浓度配制,以减少错配误差和提高使用效率 15. ABE TaqDNA酶没有3-5的外切酶活性因而没有校正功能.并且TaqDNA酶体外扩增DNA的忠实性是所有已知忠实性的DNA聚合酶中最低的. 16. BCD 引物的浓度一般是0.1-0.5μmol/l
17. BCD 变性温度过高时间过长, TaqDNA酶容易失活, dNTP破坏增加,对PCR反应产生不利影响
18. ABC 在Tm值的允许范围内,选择偏高的退火温度可以减少引物与模板之间的非特异结合,提高PCR反应的特异性,退火时间一般为30秒至1分钟. 19.ACD 延伸时间过长易发生非特异性扩增
20. ABCD 理论上20-25次循环后PCR产物累积达最大值,但是实际上每次PCR产物得率达不到100%, 所以一般设定为25-30次 21.ABCDE 22. ABCDE 23.ABCDE
24. ABCDE 25.ABCDE
26.ACD RNA的体外扩增不需经过变性,复性; 并且进入循环相的是反义RNA.
27.AB RNA-PCR技术的特异性很强,由于只有4-6次循环, 错配率减低了很多. 并且因为反应没有热变性,所以双链DNA不能作为模板扩增, 所以不必防止DNA的污染
28.ABD RNA-PCR中,循环相和非循环相处于同一反应体系,产物的扩增以10的指数递增,所以只需要4-6次循环即达到所需量. 29. ABCD
单 选：
1． 决定基因表达空间特异性的因素是（C）
A．器官分布 B．个体差异 C．细胞分布 D．发育时间 E．生命周期 2．目前认为基因表达调控的主要环节是（B） A．基因活化 B．转录起始 C．转录后加工 D．翻译起始 E．翻译后加工
3．一个操纵子通常言有（B）
A．一个启动序列和一个编码基因 B．一个启动序列和数个编码基因 C．数个启动序列和一个编码基因 D．数个启动序列和数个编码基因 E．两个启动序列和数个编码基因答案
4．有利于基因的蛋白质产物分泌的元件是 【b 】 Ａ 核糖体 Ｂ 信号肽 Ｃ 终止子
Ｄ 亲水性氨基酸 Ｅ 多聚腺苷酸
5．包涵体是一种 【 a】
Ａ 受体细胞中难溶于水的蛋白颗粒 Ｂ 大肠杆菌的亚细胞结构
Ｃ 噬菌体或病毒 DNA 的体外包装颗粒 Ｄ 用于转化动物细胞的脂质体 Ｅ 外源基因表达产物的混合物
7、操纵子的基因表达调节系统属于（b） A?复制水平调节 B?转录水平调节 C?翻译水平调节 D?逆转录水平调节 E?翻译后水平调节 单 选：
1、基因治疗的载体采用下列哪种载体比较合适？（ ） ①逆转录病毒 ②Ti质粒 ③噬菌体 ④质粒pBR322
2、采用原核细胞表达系统的优点之一是可以与下面什么过程直接相连（ ） ①发酵工程 ②转基因动物 ③转基因植物 ④基因治疗
3、以mRNA为模板合成cDNA时，所用的工具酶是（ ） ①DNA聚合酶I ②DNA连接酶 ③逆转录酶 ④核酸酶 4、YAC是（ ）
①酵母人工染色体 ②人工Y染色体 ③细菌人工染色体 ④粘粒
5、用Sanger双脱氧法进行DNA测序时，凝胶上读出的序列是（ ） ①模板链的 ②模板链的互补链的 ③mRNA的 ④cDNA的 6、同位素标记探针是指在探针上连接（ ） 32
①P ②生物素 ③荧光素 ④酶
7、Southern杂交时，探针与膜上的什么成分杂交？（ ） ①DNA ②RNA ③蛋白质 ④染色体
8、同一种限制性核酸内切酶分别切割目的基因DNA与载体DNA时，酶切片段不能互相连接的是（ ）
①目的基因与目的基因之间 ②载体DNA与载体DNA之间 ③目的基因与载体DNA之间 ④目的基因与mRNA之间
9、pBR322是一种什么样的载体？（ ） ①粘粒 ②质粒
③噬菌体 ④人工微小染色体 10、PCR引物成对存在，位于目的基因的（ ） ①5'端 ②3'端 ③C端 ④N端 答 案：
1. ① 2. ① 3. ③ 4. ① 5. ② 6. ① 7. ① 8. ④ 9. ② 10. ① 单 选：
1、构建CDNA文库时，选用下列哪种载体较好？（ ） ①质粒 ②SV40病毒
③Ti质粒 ④YAC（酵母人工染色体） 2、Northern杂交时，探针与膜上的什么成分杂交？（ ） ①DNA ②RNA ③蛋白质 ④染色体
3、以mRNA为模板合成CDNA时，所用的工具酶是（ ） ①DNA聚合酶I ②DNA连接酶 ③逆转录酶 ④核酸酶 4、BAC是（ ）
①酵母人工染色体 ②人工Y染色体 ③细菌人工染色体 ④粘粒
5、用酶促合成法进行DNA测序时，凝胶上读出的序列是（ ） ①模板链的 ②模板链的互补链的
第2页 共6页 ③mRNA的 ④cDNA的
6、同位素标记探针是指在探针上连接（ ） 32
①P ②生物素 ③荧光素 ④酶
7、同一种限制性核酸内切酶分别切割目的基因DNA与载体DNA时，酶切片段不能互相连接的是（ ）
①目的基因与目的基因之间 ②载体DNA与载体DNA之间 ③目的基因与载体DNA之间 ④目的基因与mRNA之间
8、下列基因中，哪个不能作为基因工程载体的报告基因？（ ） ①lacZ ②GFP
③Ampr
④ori 9、M13噬菌体是（ ）
①双链噬菌体 ②单链噬菌体 ③质粒 ④粘粒 10、常规PCR反应所用到的酶是（ ） ①核酸酶 ②逆转录酶 ③DNA连接酶 ④Taq酶 答 案：
1. ① 2. ② 3. ③ 4. ③ 5. ② 6. ① 7. ④ 8. ④
② 10. ④ 9.