【实验报告第三部分（结果与讨论）：①结果（定量实验包括计算）：应把所得的实验结果（如观察现象）和数据进行整理、归纳、分析、对比，尽量用图表的形式概括实验的结果；②讨论：不应是实验结果的重述，而是以结果为基础的逻辑推论。③结论：简单扼要，说明本次实验所获得的结果。（包括思考题）。评分（满分45分）：1、结果:
γ球蛋白 清蛋白1 清蛋白2 血清 ↓ ↓ ↓ ↓
XX】
将3条经染色的纤维醋酸薄膜并列，使点样线位于同一水平，以正常血清蛋白谱作为对照，可以看到明显的三条带，从左到右分别是γ球蛋白，清蛋白1、清蛋白2. 2、讨论：?对电泳图谱的分析：各种蛋白条带比较清晰可见，证明收集到了蛋白质。 ?通过与标准血清蛋白条带作对比，可以看到球蛋白与清蛋白1的条带比较单纯，所含杂质较少；而清蛋白2的条带上可以看到有两条带，可以说明当时纯化时没有清理干净，还含有少量其他蛋白。
?通过对比，球蛋白的条带颜色最浅，清蛋白的条带颜色较深。说明血清中γ
球蛋白的含量很少。这也要求了在实验中分离提纯γ球蛋白时需要十分小心谨慎，仔细观察现象。而在清蛋白提纯时由于含有其他αβ球蛋白干扰，在纯化时需要分清时间，在确定将其他αβ球蛋白洗脱后，再接清蛋白液，减少杂质的干扰。
④在电泳图谱上可以看到蛋白质条带并不平整且不居中，说明当时点样时效果不好，原因点样不均匀，薄膜未完全浸透，温度过高使薄膜局部干燥，电泳时薄膜未方正，电流方向与薄膜方向不平衡，缓冲液变质。
3、结论：通过这次具体的血清清蛋白、γ-球蛋白的分离、提纯，结果得到了γ球蛋白和清蛋白的条带，试验是成功的。而且通过这次试验，掌握了盐析法分离蛋白质的原理和基本方法、凝胶层析法分离蛋白质的原理和基本方法、离子交换层析法分离蛋白质的原理和基本方法、醋酸纤维素薄膜电泳法的原理和基本方法，了解了柱层析技术。 思考题：
1.硫酸铵盐析一步,为什么是0.8ml血清加0.8ml饱和硫酸铵?
答：调节盐的浓度可使不同的蛋白质沉淀从而达到分离的目的。血清清蛋白和球蛋白在半饱和硫酸铵中清蛋白不沉淀，球蛋白沉淀。所以是0.8ml血清加0.8ml饱和硫酸铵溶液，将饱和硫酸铵溶液稀释为半饱和硫酸铵溶液，就可以分离两种蛋白了。 2.为什么实验中DEAE纤维素柱分离γ-球蛋白后不用再生,可直接用于纯化清蛋白? 答：DEAE纤维素为阴离子交换剂，在pH 6.5的条件下带有正电荷，能吸附带负电荷的α-球蛋白和β-球蛋白（pl分别为4.9、5.06和5.12），而γ-球蛋白（pl7.3）在此条件下带正电荷，不被吸附故直接从层析柱流出，此时收集的流出液即为纯化的γ-球蛋白，而清蛋白也是带负电会被吸附。
3.应用醋酸纤维素薄膜电泳鉴定分离纯化后的血清清蛋白和γ-球蛋白的纯度,根据什么来确定它是清蛋白还是γ-球蛋白?判定它们纯度的依据是什么?
答：蛋白质用醋酸纤维素薄膜电泳可分为五个区带，γ-球蛋白的等电点约为7.3，在
pH8.6的巴比妥缓冲液中，带的负电荷最少，因此在电场中比其它蛋白质移动速度慢。而清蛋白等其它蛋白质的等电点均小于7.3（pl分别为4.9、5.06和5.12），因此在电场中比γ-球蛋白移动速度快，其中清蛋白等电点为4.88带负电荷最多，速度最快，且清蛋白在血清中含量最多。所以最接近点样线的是γ-球蛋白，最远离点样线的最粗的线是清蛋白。而关于纯度的判定：在一定范围内，蛋白质的含量与结合的染料量成正比，故可以将蛋白质区带剪下，进行比色测定。而简单的看法可以直接与血清的那条区带对比，若球蛋白与清蛋白的区带都只有一条，则相对较纯，若有多条，则不纯，含杂质。