2.3 方法检出限
2.3.1 用较低的浓度（BHA、BHT和TBHQ分别为0.01mg/ml）进样7次，峰面积记录于下表
表1 BHA、BHT和TBHQ检出限峰面积记录表
实验次数 BHA峰面积 BHT峰面积 TBHQ峰面积
1 3942 6881 4417
2 3957 6914 4309
3 3951 6909 4331
4 3897 6890 4308
5 3990 7013 4410
6 3954 6877 4391
7 3992 6859 4387
由上表计算相应的峰面积标准偏差可得：BHA、BHT和TBHQ的标准偏差分别为：S1=39.94，S2=47.25，S3=43.86；
根据检出限计算公式
DL?3?S （2.3.1） a其中DL为仪器的检出限；S为对应的峰面积的标准偏差；a为对应的标准曲线的斜率；可计算得BHA、BHT和TBHQ对应的最低检出浓度为0.3ug/ml，0.3ug/ml，0.3ug/ml；而本方法取样2.0g，最后定容5.0ml，因此，BHA、BHT和TBHQ的样品检出浓度分别为：0.75mg/kg，0.75mg/kg和0.75mg/kg 2.4 样品测定回收率
称取阴性样品2.0g并分别加入100uL和500uL浓度为1.0mg/ml的BHA、BHT以及TBHA混合标准溶液，混合均匀后，按照1.2.1方法测定，根据公式1.4.1计算结果列于下表所示：
表2 样品回收率测定结果记录表
峰面积 8364
BHA
43448 10311
BHT
51176 7541
TBHQ
43908
0.0969
0.4844
0.500
96.9%
0.0937 0.0198
0.4686 0.0991
0.500 0.100
93.7% 99.1%
0.0959 0.0185
0.4797 0.0924
0.500 0.100
95.9% 92.4%
实测浓度值mg/ml
0.0193
实测含量mg 0.0967
理论添加量mg
0.100
回收率 96.7%
由上表得出结论：方法的回收率在92%以上，而且明显发现BHA和TBHQ的回收率较高，而BHT回收率略低，是因为BHT在甲醇和乙醇中的溶解度略低于BHA和TBHQ，可以通过增加甲醇提取的次数提高回收率。 2.5 与国标方法的显著性差异
对一不含BHA和BHT的阴性样品添加一定量的BHA和BHT制成稳定的阳性样品分别用本方法和GB/T 5009.30-2003 第一法进行测定，其峰面积和结果统计如下：
表3 本方法和国标方法比对结果
最终定容体积V
称样量m（g）
峰面积S
（ml） 2.0 2.0 2.0 2.0 5.0 5.0 5.0 5.0
39633 38144 29133 28804 15643 15299 12443 12159
待测液含量c（mg/ml） 0.0876 0.0844 0.0531 0.0525 0.0352 0.0345 0.0244 0.0219
样品中的含量(mg/kg) 82.5 84.0 50.0 52.3 84.2 84.6 53.5 53.7
2.125
BHA
国标 方法
BHT
2.009 2.093
BHA
直接提取法
BHT
2.037 2.037 2.093 2.009 2.125
根据上表可知：国标方法检测结果：BHA为83.2mg/kg；BHT为51.2mg/kg；
直接提取法检测结果：BHA为84.4mg/kg；BHT为53.6mg/kg； 两种方法平均值相对偏差BHA为1.42%，BHT为4.20%；
根据显著性实验计算公式：
[7]
t?n1?n2 （2.5.1） ?22s1（n1-1）?s2（n2-1）n1?n2（n1-1）?（n2-1）x1-x2式中：x1和x2分别指国标方法和直接提取法计算结果的平均值； s1和s2分别指国标方法和直接提取法计算结果的标准偏差； n1和n2分别指国标方法和直接提取法测定次数；
计算得BHA t=2.11，BHT t=3.04，
一般情况下，取置信度P=0.95情况下，总自由度f=n1+n2-2=2，查表可得ta，f=4.30； 当t 本方法采用甲醇直接提取，冷藏后过滤除去残留油脂，再氮吹近干，乙醇定容；步骤简单，试剂消耗量很少，分析时间大大缩短，成本降低，上机液中几乎不含有脂肪，不会减短色谱柱的分析寿命；并且回收率可达到92%以上，方法的平行性也非常好（同一样品双平行相对偏差均小于5%）；BHA、BHT和TBHQ的分离度均能达到1.5以上即按照色谱理论已经完全分离，三种物质在0.01mg/ml—— 0.2mg/ml范围内线性相关系数达到0.999；并且经过氮吹浓缩后再定容，适合分析含量相对较少的样品， 会大大的降低方法的检出限，三种物质的检出限均可达到0.75mg/kg；对BHA和BHT的检测与国标GB/T 5009.30-2003 第一法做了显著性差异实验，结果证明本方法与国标方法不存在显著性差异； 参考文献: [1] GB/T 5009.30-2003 食品中叔丁基羟基茴香醚(BHA)与2，6—二叔丁基对甲酚(BHT)的测定 薄层 色谱法. 北京：中国标准出版社 [2] GB/T 5009.30-2003 食品中叔丁基羟基茴香醚(BHA)与2，6—二叔丁基对甲酚(BHT)的测定 比色 法. 北京：中国标准出版社 [3] GB/T 5009.30-2003 食品中叔丁基羟基茴香醚(BHA)与2，6—二叔丁基对甲酚(BHT)的测定 气相 色谱法 北京：中国标准出版社 [4] 穆同娜，许华等.GB/T 23373-2009 食品中抗氧化剂丁基羟基茴香醚(BHA)、二丁基羟基甲苯 (BHT)与特丁基对苯二酚(TBHQ)的测定 北京：中国标准出版社 [5] 王绮，温轶；反相高效液相色潽法测定油脂中抗氧化剂特丁基对苯二酚[J]；理化检验.化学分册;2 006年03期 [6] 林春晓，付斌等；气相色潽法测定食用油脂中BHA、BHT样品前处理方法研究[J]；中国热带医 学. 2005年04期 [7] 关于计量资料中的t检验[J]；中国现代医生. 2011年12期