兽医内科学实验
实验一 牛病临床诊断和治疗技术
（3学时）
1、目的要求：本实验的目的要求学生掌握：1、兽用注射器的使用。2、掌握常见的动物注射技术，灌药方法，和穿刺技术。
2、方法：先由教师讲解兽用注射器的构造、各部名称和用途，并进行动物注射技术，灌药方法，和穿刺技术的演示，然后学生分组操作，教师现场指导。
3、内容：应用兽医院的病例或牧场的实验动物现场演示和分组操作。 实验仪器、材料：实验动物（牛、羊），动物保定器具，不同规格动物用注射器，消毒剂，注射药物。
(1)掌握各种动物注射技术，包括肌肉注射技术、皮下注射技术、静脉注射技术、腹腔注射和部分穴位注射。
(2)灌药方法，包括（1）胃管投药法（2）口腔灌药法 (3)穿刺技术，包括瘤胃穿刺、瓣胃穿刺
实验二 个体兽医学特征和群体兽医学特征及临床病案讨论
（3学时）
1、目的要求：通过观看临床病例幻灯片和录像资料，了解个体兽医学特征和群体兽医学特征。
2、方法：临床病例影像教学，观看临床病例幻灯片和录像资料。 3、内容：
（1）观看并记录牛创伤性网胃心包炎现场诊疗录像资料（个体兽医学特征）
A. 牛创伤性网胃心包炎临床诊断方法
a. 一般的临床检查：问诊，视诊，听诊，叩诊 b. 特殊的临床检查：金属探测仪的检查，X光检查等。 B. 牛创伤性网胃心包炎的临床症状
a. 一般临床症状，如食欲，反刍，体况，生产性能和行为的变化。 b. 特殊临床症状，如心音的变化，心区叩诊界的变化，颌下和胸前水
肿，颈静脉扩张
c. 行为学变化，如上下坡运动行为变化，站立姿势的变化，起立和卧下行为变化等。
（2）观看并记录规模化蛋鸡场蛋鸡群体现场疾病诊疗录像资料（群体兽医学特征）
A. 规模化蛋鸡场的地理位置与环境； B. 蛋鸡的品种；
C. 饲养模式：育雏模式，育成模式，产蛋模式； D. 供料、供水系统：人工供料系统，自动供料系统； E. 饲料配制； F. 饲料的品质； G. 消毒程序
H. 发病鸡群发病情况调查，先前药物治疗效果分析； I. 现场病鸡的临床症状，病鸡解剖病理变化； J. 初步诊断结果，进一步诊断方案
实验三、动物亚硝酸盐中毒的复制和解救
（3学时）
1、目的要求：本实验目的是让学生掌握临床病例的诊断和治疗，为综合性实验。要求学生应用兽医临床诊断技术对实际的病例进行临床诊断和实施治疗；或人工造病（动物中毒病），包括染毒、临床症状、诊断和治疗，分析中毒的机理和特效解毒药的药理作用。
2、方法：在教师的指导下人工造病（动物中毒病），包括染毒、临床症状、诊断和治疗，分析中毒的机理和特效解毒药的药理作用，或根据兽医院门诊动物病例或住院的动物病例，进行疾病的系统性诊断、治疗和疗效观察。
3、内容：兔亚硝酸盐中毒的人工造病、临床观察与治疗以及亚硝酸盐的定性检验和定量检验，或根据兽医院门诊动物病例或住院的动物病例，进行疾病的系统性诊断、治疗和疗效观察。
4、实验仪器、材料：可见分光光度计、半自动生化分析仪，实验动物（兔）；或兽医院门诊动物病例或住院的动物病例，动物保定器具，诊断设备，不同规格
动物用注射器，消毒剂，治疗药物等。
5、实验试剂：对氨基苯磺酸溶液、α—萘胺溶液格林氏粉、 0.1％联苯胺冰醋酸溶液、二苯胺浓硫酸溶液、醋酸钠缓冲液、1%亚甲蓝（美兰）、亚硝酸钠标准液、VC注射液、10%葡萄糖注射液、生理盐水等。
实验四、亚硝酸盐的定性和定量分析
（3学时）
1、目的要求：了解饲料中亚硝酸的提取方法；熟悉定性分析及结果判定、定量检测及检测原理；掌握动物亚硝酸盐中毒的机理、特效解毒药及解毒原理。 2、方法：同学事先预习，准备相关试剂，自己独立操作。 3、内容
3.1可疑饲料中亚硝酸盐的提取 3.2 亚硝酸盐提取液的定性分析 3.3 亚硝酸盐提取液的定量检测
3.4 实验动物亚硝酸盐中毒模型的复制与解救 一、实验原理:
1. 对氨基苯磺酸重氮法（格林氏法）原理 亚硝酸盐在酸性溶液中与对氨基苯磺酸作用生成重氮化合物，然后与α一萘胺偶合生成紫红色偶氮染料。 2. 联苯胺冰醋酸法原理 亚硝酸盐在酸性溶液中，将联苯胺重氮化生成黄色或红棕色颜料。
3. 二苯胺浓硫酸反应原理 由于亚硝酸盐有氧化作用（有浓硫酸存在），可使二苯胺氧化，其氧化产物呈兰色。
4. α-萘胺比色法原理 在微酸性条件下，亚硝酸盐与对氨基苯磺酸作用生成重氮化合物，再与α-萘胺偶合而生成紫黄色偶氮染料。颜色强度与亚硝酸盐含量成正比。
5. 亚硝酸盐的中毒机理 亚硝酸跟离子具有氧化作用，可使血中正常的氧合血红蛋白迅速地被氧化成高铁血红蛋白，从而丧失了血红蛋白正常的携氧功能，导致组织细胞缺氧而引起中毒。
6. 亚硝酸盐特效解毒药美兰（亚甲蓝）解毒机理 小剂量美兰在辅酶Ⅰ的作用下，转变为白色美兰，白色美兰可使高铁血红蛋白转变为二价铁血红蛋白，恢
复血红蛋白正常的携氧功能。 二、实验准备 1. 仪器设备
可见分光光度计、半自动生化分析仪 2. 实验材料 可疑饲料、家兔 3. 试剂
对氨基苯磺酸溶液、α—萘胺溶液格林氏粉、 0.1％联苯胺冰醋酸溶液、二苯胺浓硫酸溶液、醋酸钠缓冲液、1%亚甲蓝（美兰）、亚硝酸钠标准液、VC注射液、10%葡萄糖注射液、生理盐水等。 三、实验方法 1、亚硝酸盐的提取
精密称取5-10g样品置研钵中，加少许玻璃砂和少许70℃水，研成粥状，分次加70℃左右热水提取，将上清液转入100ml容量瓶中。最后定容至刻度。（如颜色深，可加少许活性炭脱色），过滤，即得亚硝酸盐的提取液，备用。 2、亚硝酸盐的定性检验
（1）对氨基苯磺酸重氮法（格林氏法）
取2ml滤液于小试管中，加对氨基苯磺酸溶液2～3滴。2～3分钟后，再加入α-萘胺溶液2-3滴。数分钟后，有亚硝酸盐存在时则出现紫红色，颜色的深浅表示亚硝酸盐含量的多少。如将试管在70℃水浴中加热数分钟，颜色更明显。粗略比例如下表。
溶 液 的 颜 色 刚刚呈现玫瑰红 淡玫瑰色 玫瑰色 鲜艳玫瑰色 深红色或橙黄色
）格林氏粉法
NO2 的含量（毫克/升）
小于0.01 0.01-0.1 0.1-0.2 0.2-0.5 大于0.5
–
（2
取滤液1-2 ml于小试管中，然后加入少许试粉，摇匀，如滤液变紫红色，表明检材中有亚硝酸盐存在。 （3）联苯胺冰醋酸法
取对氨基苯磺酸重氮法样品制备液2滴于滤纸或点滴板上，加联苯胺一冰醋酸液2滴，如出现棕红色则示有亚硝酸盐存在。 （4）二苯胺浓硫酸法
取滤液1-2滴于点滴板上，加1-2滴二苯胺浓硫酸溶液，立即出现兰色，证明有亚硝酸盐存在。 3、亚硝酸盐的定量检验
（1）吸取亚硝酸盐提取液10mL于25mL比色管中，加水至刻度。
（2）另取25mL比色管7支，依次加入0, 0.002, 0.005, 0.01, 0.015, 0.020, 0.025mg NO-2.，加水稀释至刻度。
（3）于标准管和样品管中分别加入0.05mL醋酸钠缓冲液，对氨基苯磺酸液1mL，α-萘胺溶液1mL，摇匀。放置10分钟后，以零管作参比，用1cm比色皿于波长525nm处测定吸光度，绘制工作曲线与之比较。 （4）.结果计算
亚硝酸盐含量（mg／kg）＝ A/M*10
式中：A—样品管中测得含量，μg；M—称取样品量，g 。 4.、实验动物亚硝酸盐中毒的复制和解救 （1）家兔称重。
（2）耳静脉注射4％亚硝酸盐。 （3）观察记录家兔的临床表现
（4）出现明显的临床症状时,静脉注射1%美兰（1-2mg/kg BW） 四、注意事项
1.亚硝酸盐在酸性条件下易分解，如送检不及时，夏天往往在死后第二天就不易检出。剩余饲料较易获得阳性结果。
2.格林氏反应十分灵敏，反应很强烈时可以证明亚硝酸盐中毒，反应微弱时，需用灵敏度较小的方法进行，一般要求两种以上方法都呈现阳性，才能证明亚硝酸盐中毒。同时需做空白对照，必要时可进行定量检验。