实验二 芦丁酸水解制备槲皮素
OHHOOOHOROHOR=R=gluOHrha芦丁槲皮素
芦丁及槲皮素的结构
实验目的：
1.掌握芦丁酸水解的操作方法与原理 2.熟悉槲皮素的重结晶方法 3.掌握槲皮素与糖的薄层鉴定方法 实验原理：
根据芦丁苷在酸性条件下水解，生产苷元和糖 实验步骤： 一、芦丁的酸水解
称取精制芦丁约2 g，研细，加H2SO4150 ml，投入500 ml锥形瓶中，放沸石，直火沸腾后，保持2小时，放冷后抽滤，滤液保留作糖份的鉴定，水洗沉淀后，粗品用95%乙醇大约20 ml回流溶解，趁热过滤，放置，加水至50%左右浓度，得黄色针晶。 二、糖的鉴定
1．薄层层析鉴定：取水解母液20 ml，于水溶上加热，同时于搅拌下加BaCO3细粉中和至中性，滤BaCO3后，滤液在水浴上浓缩至2~3 ml，得样品液，以葡萄糖和鼠李糖标准品作对照。
展开剂：正丁醇一醋酸一水（BAW）（4：1：5）上层，上行展开。 显色剂：苯胺一邻苯甲酸试液，喷后105 ℃烘10分钟。显棕红色斑点。 三、芦丁和槲皮素的薄层层析鉴定
吸附剂：青岛硅胶GF254（10~400）以0.4 %CMC-Na水液制板，105 ℃活化1小时。 展开剂：（1）CHCL3-MeOH-HCOOH（15：5：1）
（2）CHCl3-丁酮-HCOOH（5：3：1）
显色剂：1% FeCl3和1% K3[Fe（CN）6]水溶液，应用时等体积混和。 四、讨论 为什么加入稀硫酸进行酸水解？
芦丁酸水解流程图
实验三 大黄中游离总蒽醌的分离与鉴定
一、实验原理
大黄中有多种游离蒽醌及其苷类，总含量约为2~5%，主要有大黄酸、大黄素、大黄酚、芦荟大黄素、大黄素甲醚以及它们的葡萄糖苷类。从大黄中提取分离游离蒽醌时，先用20%硫酸加热使苷类水解，保留滤饼，滤饼用乙醚加热回流提取总蒽醌苷元（游离蒽醌），提取液作TLC鉴别。
二实验目的
掌握从大黄中提取和分离游离蒽醌的方法。 三、实验步骤
1、酸水解：取大黄10克，粉碎，加20%硫酸水溶液100 mL，水浴上加热3~4小时，抽滤，滤饼水洗后自然干燥。
2、总蒽醌苷元的提取：取干燥的滤饼，放入100 mL圆底烧瓶中，加入乙醚50 mL，回流提取3~4小时，得乙醚提取液。
3、总蒽醌苷元的鉴定：石油醚（60~90℃）：乙酸乙酯或石油醚：丙酮作展开剂，直立展开，观察斑点，并与标准品对照，检查大黄中游离蒽醌类成分。
四、实验结果
在可见光下可看到4个班点，Rf值最大的黄色班点为大黄酚和大黄素甲醚的混合物，其余3个斑点依Rf值大小分别为大黄素（橙色斑点）、芦荟大黄素（黄色斑点）、大黄酸（黄色斑点）。
实验四 柱色谱实验技术
一、目的要求
1. 掌握柱色谱的分离原理
2.
掌握常压硅胶色谱柱的装柱、上样操作
3. 掌握色谱技术中洗脱剂选择的原则 二、柱层析原理
层析技术的应用与发展，对于植物各类化学成分的分离鉴定工作起到重大的推动作用。层析过程是基于样品组分在互不相溶的两“相”溶剂之间的分配系数之差（分配层析），组分对吸附剂吸附能力不同（吸附层析），分子的大小（排阻层析）而分离。通常又将一般的以流动相为气体的称为气相层析，流动相为液体的称为液相层析。
吸附层析法（Adsorption Chromatography）——吸附剂、溶剂与被分离物性质的关系：液一固吸附层析是运用较多的一种方法，特别适用于很多中等分子量的样品（分子量小于1，000的低挥发性样品）的分离，尤其是脂溶性成分。一般不适用于高分子量样品如蛋白质、多糖或离子型亲水性化合物等的分离。吸附层析的分离效果，决定于吸附剂、溶剂和被分离化合物的性质这三个因素。常用的吸附剂有硅胶、氧化铝、活性炭、硅酸镁、聚酰胺、硅藻土等，其中硅胶最常用。 三、层析条件的选择
取少量待分离样品，用易溶的溶剂溶解，作为薄层层析点样用，用点样用毛细管蘸取少许样品，分别点在几块薄层层析硅胶板上，为避免混淆，可以在硅胶板的上端分别写上所用展开剂体系及比例；选取若干种展开剂体系，置于可以密封的广口瓶中（配制展开剂时以几种溶剂体积之和5 ml左右，不超过点样位置高度为宜），然后将点有样品的硅胶板轻轻放在广口瓶中展开，待溶剂展开至硅胶板的上端时，取出硅胶板，让溶剂自然挥干或用电吹风吹干；将展开后的硅胶板放在紫外灯下观察，比较不同展开剂体系的分离效果，并用铅笔将紫外灯下可见的点标出，然后在硅胶板上喷上显色剂，显色剂的种类根据待分离物质的性质来
选择，加热，观察显色情况，并比较各种不同展开剂的效果，结合紫外灯下的观察结果，从中选取一种分离效果较好的体系作为柱层析洗脱体系的参考。
1．层析缸 2．薄层板 3．原点 4．展开剂 5．前沿 6.7．斑点
1 2 3 4
5 6 7 3
注：点样时，样品量要适宜，浓度过低，难以观察，浓度过高，拖尾现象严重。如下图所示。
Rf 0.5
0.3
0.1
0.1 四、装柱
2 50 300
?g
根据所需分离物质的量，选取一支大小合适的层析柱，洗净、晾干，底端塞少许脱脂棉，以防硅胶随溶剂流出（自带砂芯的层析柱不用塞脱脂棉），用铁架台固定，保持垂直；称取相当于所需分离样品量的50~150倍的硅胶（200~300目），加入适当体积的洗脱剂（洗脱剂体系与薄层层析的结果大体一致），搅拌均匀，不能带有气泡，一边搅拌一边缓缓注入层析柱中，让硅胶自由沉降，也可以用其他辅助手段如轻轻敲打、加压或减压的方法加速沉降，
在装柱过程中难免会带入一些气泡，轻轻敲打的方式有助于气泡的排除；当轻敲层析柱1 min 左右，硅胶不再下沉，说明层析柱已经装实，移去上层多余的溶剂，关闭活塞，这时就可以上样了。注意：没有装实的层析柱在层析过程中会继续沉降，直接影响层析效果。 五、上样
将样品用少量所采用的洗脱剂溶解，用滴管轻轻加在硅胶上，这时应该将下端的活塞稍稍打开，以保证溶剂流动，否则容易造成硅胶断层或带入气泡，待上端的溶剂几乎流干时，再补充少量，重复三次，然后加入大量溶剂，使液面约高于样品4 cm，用一个带孔，孔里插了一根滴管的橡皮塞塞住柱的顶端，洗脱剂用一根聚四氟乙烯的导管引入橡皮塞的滴管中，使整个体系成为一个密闭体系，这样可以减少溶剂的挥发，也可以通过调节盛洗脱剂瓶子的高度使体系增加一定的压力；调节活塞，20滴/分左右为宜。用25 ml三角瓶接收，每瓶接收15~20 ml，妥善放置。 六、检测
依次用毛细管点在同一张薄层层析用硅胶板上，采用所选取的展开剂体系展开，紫外灯下观察后显色，判断柱层析效果。