苄嘧磺隆对野慈姑的生测检验
一 综述;
1 野慈姑
１．１ 形态特征野慈姑又叫驴耳菜，属泽泻科，为多年生杂草。它主茎直立，株高４０～７０ｃｍ，根生叶，簇生，幼苗鞘叶条形弯曲，１～６叶呈条状，７～８叶呈舌状（披针叶），第９叶以上为狭窄剑型叶，两侧叶耳长，叶尖和耳部均为尖长，叶柄粗长有棱，茎部膨大成鞘状，第６片剑型叶茎部中间抽花茎，圆锥花序，花轮生，每轮３朵，白色，单性，雄花在上部，雌花在下部，地下有须根和球茎，球茎呈卵圆形，有鳞片，野慈姑一般产生２～３个花茎分枝，个别多的能达到４个花茎分枝，可结５～８轮花朵，其中３轮花朵（９朵）均已成熟野慈姑由球茎和种子越冬，翌年繁殖。球茎一般在４月下旬至５月上旬发青5月中旬开始生根、出苗，6月中下旬开始开花，７月上旬为盛花期，8-9月成熟。种子一般在５月底至６月上旬出苗日种子开始发叶，，一直延迟到６月底。有少量种子可延迟到７月中旬出苗日仍有慈姑种子出苗）。凡是７月５日出苗的野慈姑到９月２日都能长出舌状叶，并且都能在新根尖端处生长球茎，野慈姑结球期一般在８月中旬至９月上旬，野慈姑种子生长在舌状叶片以上的植株，均能结球，一般结球数量１～３个，多则５个以上，种子
苗结球小、数量少，球茎生长的野慈姑结球大、数量多分布危害黑龙江水田大部分都有野慈姑分布。调查野慈姑植株，茎部第１轮３朵花，每朵花产生的种子量５１０～６９６粒，花朵小种子量就少，花朵大种子量就多。每轮３朵花可产生种子１５３０～２０８８粒，球茎野慈姑成株共轮生，７～８节位花朵，按有效产生３轮花节位９朵花，１株野慈姑产种子量大约在５０００～６０００粒，每个球茎野慈姑植株可分２株花茎，共计１８ 朵有效花，共产生种子量在１００００～１２５００粒。水田野 慈姑球茎分布大致如下：轻田块球茎分布每平方米５个以内，较重田块球茎分布１０个左右，严重田块球茎分布２０～６０个。野慈姑生长迅速，枝叶繁茂，强烈抑制了水稻的生长，一般公顷减产７５０～１５００ｋｇ稻谷，严重减产可达５０％。２．２ 杂草防效调调查杂草防效，对稗草、野慈姑防效达９０％以上的有处４、１０、１１、１２、１３，其中处理２、１０防效最高，均为９５．７％。第２次杂草防效在7月５日调查，对稗草、野慈姑、雨久花防效达９５％以上的有处理２、３、１０、１１、 １２、１３、１４，与杂草鲜重防效都达９９％以上处理基本一致。２．３ 水稻产量分析处理１～１４的水稻产量分别为９５２９．５、９９７９．５、９８５５．０、９６７９．５、 ９４２９．０、７８３７．５、９３７９．５、８７７９．５、 ９２２９．５、９６５５．５、９７０５．０、９７０５．０、 ８９０４．０、８１０４．５ｋｇ，表明所有药剂处理产量均明
显高于空白对照，其中处理２产量最高，其次为处理３，再次为处理１１、１２，处理２、３、１１、１２分别比常规药剂处理增产４．７％、３.４％ ,１．８％、１．８％。
二 苄嘧磺隆 ( bensulfuron- methyl ) , 又称苄磺隆 商品名为；农得时 ( Londax) ,
化学名称: 中文为2- { [ ( 4,6 - 二甲氧基嘧啶- 2- 基)氨基羰基氨基 ] 磺酰基甲基 } 苯甲酸甲酯; 分子式:
。分子量: 410.40 。化学结构式:
苄嘧磺隆是 20 世纪 80 年代中期美国杜邦公司（
) 开发的
一种新型磺酰脲类除草剂, 具有高效、广谱、低毒及低用量等优点, 是目前广泛用于稻田杂 草防治的主要除草剂之一。苄嘧磺隆在使用的同时, 其降解物是否对环境有不良影响已成 为科学工作者日益关注的问题。 本文仅 就当前国内外对苄嘧磺隆降解研究的现状和研究动向进 行分析。
2.1 苄嘧磺隆的理化性质及其应用
苄嘧磺隆原药有效成分含量大于96% ,为白色略带浅黄色无臭固体, 熔点185～188℃, 蒸气压为 1.7 ×10-3Pa(20℃) 。
20℃时在各种溶剂中的溶解度: 二氯甲烷11720 mg/L ,乙腈5 380mg/L ,乙酸乙酯1660mg/L,丙酮1380mg/L,甲醇990 mg/L。2 5℃时在磷酸盐缓冲液中的溶解度随pH变化而不同: pH5时为 2 . 9mg/L,pH6时为12mg/L , pH7时为120 mg/L , pH8时为1200 mg /L 。在微碱性溶液中稳定,酸性水溶液中缓慢降解,在醋酸乙酯二氯甲烷乙腈和丙酮中稳定,在甲醇中可能分解。
苄嘧磺隆属低毒除草剂,原药大鼠急性经口 LD50> 5 000 mg/ k g,兔急性经皮 LD50> 2 000 mg / kg , 大鼠急性吸入 LC 50> 7 .5 mg/L 。鲤鱼(48h) LC 50> 1000 mg /k g , 水蚤(48 h) LC 50> 100mg/kg 。苄嘧磺隆适用于水稻插秧田和直播田防除阔叶杂草 。如鸭舌草、眼子草、节节菜、陌上菜、 矮慈姑 等及莎草科杂草如牛毛草、异型莎草、水莎草、碎米莎草、萤蔺等。对禾本科杂草防效差, 高剂量下对稗草有 一定的抑制作用。苄嘧磺 隆使用方法灵活, 可用药肥、药土、药砂、喷雾、浇灌等方法, 用量 20～ 30g/hm2,可与丁草胺、杀草丹、优克稗、禾大壮、甲磺隆、乙草胺等剂混用, 是我国水稻田中使用面广、时间长、量大的一种除 草剂。
三 抗苄嘧磺隆慈姑ALS基因突变位点
东北地区属于施用稻田化学除草比较早的地区之一,使 用磺酰脲类除草剂已有20余年。研究结果证实,延边地区 稻田发生抗苄嘧磺隆的雨久花、慈姑、扁秆藨草,过去对SU 除草剂极为敏感的慈姑、雨久花大发生,其靶标酶)))新型
乙酰乳酸合成酶(ALS)对苄嘧磺隆、吡嘧磺隆的抗性系数增 到几十倍。本试验通过测定感、抗性生态型慈姑ALS基 因部分片段的碱基序列,了解抗性ALS基因突变位点。 3.1 供试植物
抗药性慈姑(Sagittaria sagittrifoliaL. var.longilobaT. ) 材料采自多年连续使用苄嘧磺隆、吡嘧磺隆的延边地区稻 田,敏感性材料采自野池塘
3.2 慈姑ALS基因特异兼并引物设计与合成
通过美国生物技术信息中心(NCBI)登录的x51514(拟 南芥)等10种植物的ALS氨基酸序列信息分析,利用Primer
primier5. 0程序设计了1对特异简并引物,其上游引物Ap1:
TC(A/C)ATGGA(G/A)AT(C/T)CA(C/T)CA(C/G)GC;下 游引物Ap2:CC(C/A/G/T)GT(C/G/A)AC(A/T/G)CG(A/ G)TC(A/G)TC(A/G)AA。
1. 3 慈姑总RNA提取、RT-PCR扩增、ALS基因片段克隆 及测序
利用Trizol一步法制备总RNA。参照TaKaRa反转录试 剂盒说明书,以Oligo dT为引物,以提取的总RNA为模板,经