高效液相色谱法测定注射用培美曲塞二钠的含量
Determination of Pemetrexed Disodium for Injection by HPLC
作者：
（单位：，海南 邮编）
【摘要】目的：用高效液相色谱法测定注射用培美曲塞二钠的含量。方法：采用C18柱，以乙腈-乙酸缓冲液（每1L水中加入1.7ml冰乙酸，用50%氢氧化钠溶液调节pH值至5.3±0.1）（11：89）为流动相，流速：1ml/min，柱温：30℃ ，紫外检测波长:285 nm。结果：培美曲塞二钠在10.01～200.2μg/ml范围内，浓度与峰面积线性关系良好 (r=0.9997)。培美曲塞二钠的平均回收率为100.0％，变异系数（RSD）为0.33％。结论：本法简便、准确、专属性强、重现性好，可用于培美曲塞二钠的质量控制。
[关键词] 培美曲塞二钠；高效液相色谱法；含量测定
【Abstract】Objective: T0 established a high performance liquid chromatography for determination of Pemetrexed Disodium for Injection。Method：A mobile phase was acetonitrile-Acetic acid buffer (adding 1.7ml acetic acid to 1L water, with 50% sodium hydroxide solution to adjust pH value of 5.3 ± 0.1) (58:42),a flow rate of 1mL/min,and column temperature at 30℃，UV detection at 285 nm。Result: The linear range was 10.01～200.2μg/ml The average recovery of Pemetrexed Disodium was 100.0％ with RSD of 0.33%。Conclusion：The method is simple,sensitive and accurate for allyguaiacol and can be used for controlling the quality of Pemetrexed Disodium for Injection。
【Key words】Pemetrexed Disodium；HPLC；determination
前言
培美曲塞二钠(pemetrexed disodium)是一种作用于叶酸代谢过程多靶点的抗肿瘤新药。临床前及临床研究证实其有明确的抗多种实体肿瘤活性，包括肺癌、乳腺癌、胰腺癌、卵巢癌等，对恶性胸膜问皮瘤(MPM)的治疗尤为有效[1][2]，其注射剂商品名为力比泰(Alimta)，于2004年2月经美国FDA批准联合顺铂治疗MPM。2005年l2月该药在中国上市，批准的适应证为MPM[3]。培美曲塞二钠质量标准目前在国内外均没有收录到药典中，并且国内对培美曲塞二钠含量测定的相关文献报道也很少，为了有效控制产品质量、确保临床用药安全，我们参照了进口注册
质量标准，建立了高效液相色谱法测定注射用培美曲塞二钠含量为药物原料和制剂测定提供分析手段是必须的。 1、 实验部分： 1.1 仪器和试剂 1.1.1 仪器
仪器：SPD-10AVP（岛津公司）
色谱工作站：LCsolution Lite工作站（岛津公司） 1.1.2 试剂及色谱条件
培美曲塞二钠对照品（厂家：南京亚东启天药业有限公司；批号：20081223）；三批样品（批号：091001、091002、091003）；乙腈(色谱纯)；冰醋酸（分析纯）、氢氧化钠（分析纯）；纯化水 (本公司自制)。
色谱柱：COSMOSIL 5C18-AR-Ⅱ（5μm，4.6×250mm），流动相：乙腈-乙酸缓冲液（每1L水中加入1.7ml冰乙酸，用50%氢氧化钠溶液调节pH值至5.3±0.1）（11：89），柱温：30℃，流速：1.0ml/min为色谱条件进行试验。 1.2溶液的配制
供试品溶液的配制：取装量差异项下的内容物，混合均匀，精密称取适量，加水制成每1ml中含0.1mg的溶液，作为供试品溶液。
对照品溶液的配制：取培美曲塞二钠对照品适量，加水制成每1ml中含0.1mg的溶液，作为对照品溶液。
试验方法：取装量差异项下的内容物适量，精密称定，加水溶解并定量稀释制成每1ml中约含0.1mg的溶液，精密量取10μl注入液相色谱仪，记录色谱图；另取培美曲塞二钠对照品适量，同法测定。按外标法以峰面积计算供试品中C20H21N5O6的含量。 2、实验结果
2.1、系统适应性试验
精密称取本品内容物（批号：091001）21.3mg，置100ml量瓶中，加水溶解
并稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液；按本制剂处方配比，另精密称取空白辅料适量，同法配制，作为空白辅料溶液。
精密量取供试品溶液、空白辅料溶液和空白溶剂各10μl注入液相色谱仪，记录色谱图。由记录的色谱图得：空白辅料无色谱峰，溶剂峰对主峰无干扰；培美曲塞二钠峰保留时间为7.0916分钟，分离度为12.737，理论塔板数为6056.4，拖尾因子为1.134，初步判定该色谱条件满足本品含量测定要求。
mV0.4检测器 A:285nm 0.30.20.10.0-0.1-0.2-0.30.01.02.03.04.05.06.07.08.0min
（空白溶剂）
mV检测器 A:285nm 0.250.00-0.250.01.02.03.04.05.06.07.08.0min（空白辅料）
mV检测器 A:285nm 75502500.01.02.03.04.05.06.07.08.09.010.011.0min
（供试品溶液）
2.2 专属性试验
分别将样品和辅料经酸、碱、氧化、高温、光照等条件破坏，考察药物的降解途径及主峰与相邻峰的分离情况。
未破坏试验 精密称取样品（批号：091001）45.3mg和空白辅料23.2mg，分别置200ml量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，摇匀，分别精密量取10μl注入液相色谱仪检测，记录色谱图。
强碱破坏试验 精密称取样品（批号：091001）44.7mg和空白辅料23.6mg，分别置200ml量瓶中，各加0.5mol/L的氢氧化钠溶液5ml使溶解，于70℃水浴加热90分钟，放冷至室温，分别加入0.5mol/L的盐酸溶液5ml中和，再用水稀释至刻度，摇匀，分别精密量取10μl注入液相色谱仪检测，记录色谱图。
强酸破坏试验 精密称取样品（批号：091001）45.7mg和空白辅料23.7mg，分别置200ml量瓶中，各加0.5mol/L的盐酸溶液5ml使溶解，于70℃水浴加热90分钟，放冷至室温，分别加入0.5mol/L的氢氧化钠溶液5ml中和，再加水稀释至刻度，摇匀，分别精密量取10μl注入液相色谱仪检测，记录色谱图。
氧化破坏试验 精密称取样品（批号：091001）45.2mg和空白辅料22.9mg，分别置200ml量瓶中，各加30%过氧化氢溶液5ml使溶解，室温下放置60分钟，加水稀释至刻度，摇匀，分别精密量取10μl注入液相色谱仪检测，记录色谱图。
高温破坏试验 精密称取样品（批号：091001）45.3mg和空白辅料23.5mg，
分别置200ml量瓶中，各加水适量使溶解，于 100℃水浴4小时，放冷至室温，加水稀释至刻度，摇匀，分别精密量取10μl注入液相色谱仪检测，记录色谱图。
强光破坏试验 精密称取样品（批号：091001）45.7mg和空白辅料23.4mg，分别置200ml量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，摇匀，于照度4500lx的光照箱中放置6小时，取出，摇匀，分别精密量取10μl注入液相色谱仪检测，记录色谱图。
由记录的图谱可得：本品在碱、氧化和光照条件下略有破坏，在酸、高温条件下性质较稳定；各破坏试验下主峰均能与相邻峰实现分离，专属性好。
mV75检测器 A:285nm 502500.01.02.03.04.05.06.07.08.0min
（未破坏试验）
mV检测器 A:285nm 75502500.01.02.03.04.05.06.07.08.09.010.011.0min
（碱破坏试验）