三角瓶中,加精胶液50ml、酸性饱和氯化钠溶液100ml和高岭土10.00g,塞紧瓶口,充分摇振2-3分钟后过滤,吸取25ml滤液于白大瓷皿中,加入靛红溶液25ml、水750ml,用0.02N高锰酸钾溶液滴定,终点掌握由蓝色变为绿色,最后转变为淡黄色为止,消耗的高锰酸钾溶液量为B ml。因1ml 1N高锰酸钾溶液能氧化58.2g茶多酚,再由A减去B值计算,因氧化茶酚而消耗的高锰酸钾量。
4、福林酚氧化法
称量茶叶磨碎试样0.2g(精确到0.1mg)于10ml离心管中,加入在70℃中预热过的70%的甲醇溶液5ml,用玻璃棒充分搅拌均匀湿润,立刻移入70℃水浴中,浸提10min(隔5min搅拌一次),浸提后冷却至室温,转入离心机在3500r/min转速下离心10min,将上清液转移至10ml的容量瓶,残渣再用5ml的70%甲醇溶液提取一次,重复以上操作。合并提取液定容至10ml,摇匀,过0.45μl膜,待用(提取液在4℃下可至多保存24h)。同时制备浓度分别为10,20,30,40,50μg/ml没食子酸工作液。然后分别用移液管移取水(空白对照用)、没食子酸工作液及测试液各1ml分别加入刻度试管中,在各个试管中加入5.0ml福林酚(Folin-Ciocalteu)试剂,反应3-8min内,加入4.0ml 7.5%Na2CO3溶液,加水定容至刻度、摇匀。室温下放置60min。用10cm比色皿、在波长765nm处测定分光光度值。对应标准曲线上没食子酸浓度即为茶多酚浓度,依此计算出茶多酚含量。 我们选用的是可见分光光度计。
3.草酸,苹果酸的测定
抗氧化剂,保护维生素C以酚酞为指示剂,用氢氧化钠标准溶液进行滴定,高效液相色谱法。 我们选用液相色谱法。
三·准备实验用品 我们检测的是柚子茶。 1.pH测定
烧杯 酸度计 缓冲液 磁力棒 PH试纸
2.茶多酚测定
仪器:分析天平、721可见分光光度计、 锥形瓶、烧杯
试剂:酒石酸亚铁溶液、PH为7.5的磷酸缓冲液(磷酸氢二钠溶液和磷酸氢二钾溶液)蒸馏水。
3.草酸,苹果酸的测定
注射器 针头滤器 液相小瓶 安捷伦1200液相色谱仪 VWD检测器 0.5%磷酸二氢胺溶液 1ml柚子茶
四·测柚子茶中PH值
1.用PH值试纸确定饮料的PH值,选择与饮料PH值接近 的缓冲溶液
2.将清洗干净的玻璃-甘汞电极对进入选定的PH标准缓冲溶液中按下测定按钮,转动定位调节旋钮,使仪器显示的PH值稳定在该标准溶液的PH值
3.松开按钮取出电极,用蒸馏水冲洗,用滤纸吸取电极上的水 4.将电极进入待测水样中,按下测量按钮,读取PH值记录
PH值 =3.85 缓冲液值4.0
通过PH值的测定柚子茶呈酸性
五·测柚子茶中茶多酚含量
配制pH 值为7. 5 的磷酸盐缓冲液和酒石酸铁溶液
将机器预热,然后取出四根比色管,第一根管先加入5ml柚子茶、4ml蒸馏水、5ml酒石酸铁溶液,并用PH值为7.5的磷酸盐缓冲液加至刻度线;第二根作为空白对照不加入饮料,第三根管与第一根重复不加酒石酸铁溶液,第四根管为空白对照不加入饮料和酒石酸铁溶液。
将机器的波长调为540,分别倒入比色皿中,分别测出A1和A2两个吸光度值,并记录
波长 A1 A2 540nm 0.870 0.057
(A1?A2)?1.957?2?KP?*1000L(0.420?0.039)*1.957*2*1?*10005?298.2468六·测柚子茶中草酸,苹果酸含量
1.用针头过滤注射器吸取加多宝1ml,逐滴滴慢速加于液相小瓶中。 2.将加好溶液的液相小瓶放入液相色谱仪中,标好名字,序号与样品名称。
3.按下开始键,等待十分钟即可得出数据。 峰面积/a 含量/mg/ml 草酸: 210.6 0.2 苹果酸: 610.4 2.5
4500400035003000250020001500100050000 123456系列1线性 (系列1)y = 803.86x2R = 0.9958
14001200100080060040020000 系列1线性 (系列1)y = 247.82x2R = 0.3867
七·实验结论
柚子茶中的PH值,茶多酚,草酸,苹果酸含量符合国家标准。
123456八·实训总结
通过一周的实训学习,在实际操作中我逐步适应酸度计,721型分光光度计,安捷伦1200液相色谱仪的操作,基本掌握了测量饮料中PH值,茶多酚,草酸,苹果酸含量的方法。提高了标准溶液的配置,浓度标定及基本计算能力。培养了收集,整理分析相关信息和查阅资料的能力。进一步认识和理解了专业课所学的理论知识。为以后工作打下了坚实的基础。