A520nm 0 0.025 0.304 0.978 0.028 0.349 混匀 1.727 0.866 >2.0 >2.0 0.014 0.030 0.223 七、实验结果与分析
1、蛋白质含量标准曲线 由表2可得：
编号 标准蛋白质含（mg/L） A500nm 0 0.136 0.260 0.372 0.493 0.580 1 0 2 15.38 3 30.77 4 46.15 5 61.54 6 76.92 由此得蛋白质含量标准曲线：
（1）在做标准曲线和样品曲线时，均应在加入乙试剂后要迅速混匀（加一管混匀一管），使还原反应产生在磷钼酸-磷钨酸试剂被破坏之前,以防出现错误的实验结果。
（2）因为参照液蛋白质含量为0，所以标准曲线趋势线须过原点，即截距为零。所得R平方数为0.9944，较接近1，说明实验较为成功。
（3）蛋白质标准曲线的微小偏差可能来自于加入试剂后的局部未混匀以及添加试剂时的微小损失等。 2、样品Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、 Ⅳ溶液的最终蔗糖酶蛋白含量 将表2中的数据带入上述蛋白质含量标准曲线，可计算得：
编号 稀释酶液蛋白质含量（mg） 1 0 2 0.135 3 0.074 4 0.092 5 0.085 1.7 6 0.169 0.845 7 0.529 1.058 8 0.042 9 0.544 10 1.167 11 0.062 12 0.188 13 0.521 稀释酶液蛋白质量平均含量（mg/mL） 原酶液蛋白质平均含量（mg/mL） 0 2.7 0.37 0.184 0.84 2.72 2.334 1.24 4.09 1.042 0 27.12 12.01 9.82 6.37 由表中数据可知，从样品I到样品IV，样品中蛋白质含量呈减少趋势，这说明，随着离心，乙醇沉淀，离子交换柱层析等纯化步骤的进行，杂蛋白在逐步被分离，蔗糖酶的含量在逐渐增多，即蔗糖酶的纯度在逐渐增高。 3、葡萄糖标准曲线 由表3处理可得 编号 还原糖（mg） A520 0 0.128 0.069 0.137 0.440 0.643 0.815 1 0 2 0.20 3 0.30 4 0.40 5 0.50 6 0.60 7 0.70 由此得葡萄糖标准曲线
（1）葡萄糖浓度-吸光值标准曲线的R平方为0.9953，跟1比较接近，说明我们在测定葡萄糖浓度-吸光值标准曲线的时候操作基本正确，没有出现较大的误差。微小误差的产生可能是在试剂转移或者反应时间方面有误差。
（2）尽管1号试管本身也有一定值的吸光度，但是因为将1号试管作为参照，所以将其吸光度视为0.为保证理论的正确性，使趋势线经过原点。 4、各步提取液酶活力测定
将表4数据代入上述葡萄糖标准曲线可得 编号 稀释酶液葡萄糖含量（mg） 稀释酶液葡萄糖含量（umol） 蔗糖酶原液酶活力单位(u/mL) 5、蔗糖酶各步纯化样品的纯度比较 体 积(ml) 蛋白浓度(mg/ml) 样品1 样品2 样品3 样品4 29.8 26.8 15.2 9.7 27.12 12.01 9.82 6.37 808.176 321.868 149.264 61.789 总蛋白(mg) 活 (u/ml) 114.186 83.074 225.523 3.160 3402.743 2226.383 3427.955 30.652 4.210 6.917 22.966 0.496 力总活力（u） 比活力u/mg 0 0 1 0 2 0.019 0.105 41.999 3 0.237 1.316 131.600 4 0.761 4.224 168.960 5 0.022 0.122 24.402 6 0.272 1.510 75.500 7 1.345 7.466 149.320 8 0.674 3.741 374.100 9 >1.557 >8.642 >21 10 >1.557 >8.642 >86. 11 0.011 0.061 3.050 12 0.023 0.128 1.600 13 0.174 0.966 4.830 6.05 42 总体蛋白质呈下降趋势，活力应呈上升趋势。因为杂质蛋白被除去，蔗糖酶纯度提高。我组实验总体上符合该趋势说明大致实验操作准确无误。但是在样品Ⅳ时，出现活力及比活力大幅度下降这一不正常现象。本次试验我们组用的是另外组的样品，参照他们之前得出的色谱图和试验情况，分析造成这一现象的原因可能为：
另外一组的同学在做实验之前，不小心将保存样品4的离心管打翻，造成了大量样品的损失，后来为了保证样品量足够，对其进行了稀释，使其浓度下降，从而导致蔗糖酶活力、比活力等的下降，并且由于未记录稀释倍数，故无法计算原有样品的酶活力，造成样品4活力显著低于前三个样品。
八、讨论、心得
①由于一开始做出结果颜色过深，活性过大，我们组稀释倍数较大。
②酶活力测定时，要控制好反应时间，各管的酶反应时间一定要一致，否则会影响整体结果；加各反应试剂的体积一定要准确且不能加错，否则将无法得到理想结果。
③本实验结果不是很理想，因为本次实验的结果与前面两次实验的操作密切相关，所以可能是因为前面两次实验中的操作不当。如可能是第一步时碾压不够，得出的样品一量较少，以及分离时操作不当，使得样品二含量也较少，还有离子交换柱制备时可能存在问题，使一部分蔗糖酶没能够分离出来，还有本次实验中可能实验时间控制的不够准确，造成结果的偏差。
④缺乏小组成员之间的沟通。我们在做实验之前并不知道另一小组的同学把样品打翻了，如果知道的话就应该用我们组的样品。所以在实验前和实验过程中能够好好沟通，就不会造成实验结果的不正常现象。 ⑤在实验中应注意：1）酶活力测定时，要控制好反应时间，各管的酶反应时间一定要一致，否则会影响整体结果；2）加各反应试剂的体积一定要准确，否则也会影响最终结果。3）加入Folin-酚乙试剂后，要迅速混匀（加一管混匀一管），使还原反应产生在磷钼酸-磷钨酸试剂被破坏之前。 ⑥使用分光光度计时应注意波长的设置，以免发生测完之后发现波长设置错误的问题。
⑦本实验的主要操作是各种溶液的取用以及酶液的稀释，每管各种溶液的取用量都不同，且不同组的稀释倍数不同，因此取用时应特别注意，防止取错溶液或取量不对，还要注意不要加错试管等。如果在配制出现加错等情况，应重新配置。
⑧本实验结果分析中，制作标准曲线时，采用了图像过原点的趋势线，以保证理论上的正确性。 ⑨本实验步骤较繁琐，三个人应该明确分工，有条不紊，这样才可以做到高效的完成实验。