（2）基于克隆DNA序列检测法
Southern印迹杂交：根据毛细管作用的原理，使在电泳凝胶中分离的DNA片段转移并结合
在适当的滤膜上，然后通过与已标记的单链DNA探针的杂交作用以检测这些被转移的DNA
片段。
（3）基于外源基因产物检测法
如果目的基因产物能降解某些药物使菌株呈现出抗性标记，或者基因产物与某些药物作用是
显颜色反应，则可根据抗性或颜色直接筛选含目的基因的克隆子。
16. 试述PCR的原理和主要反应过程，并分析影响PCR扩增的影响因素。 PCR原理：变性温度下， DNA双链变性双螺旋解开成单链DNA，在退火温度中人工合成
的特异引物根据碱基互补配对原则与单链DNA特异结合，然后在DNA聚合酶的作用下，
在延伸温度下不同的脱氧核苷酸按照碱基互补配对原则在引物的引导下合成与模板DNA互
补的新链，实现DNA的扩增。 影响PCR扩增的影响因素： (1)Taq酶：常用1U/25μL
浓度低，扩增产物不够； 浓度高，非特异性扩增增加； 酶的活性；
(2)dNTP的浓度：常用100-200μmol/L，不能低于20μmol/L，特异性、保真性；
(3)模板：主要考虑纯度及使用量，对纯度要求不高，但含有酚、氯仿等杂质则难以成功。
使用量从几个ng到100ng.
(4)引物浓度：0.1-0.5μmol/L之间，过多则非特异扩增增加，形成引物二聚体；
(5)Mg2+浓度：常用 0.5-2.5mmol/L； 影响：酶的活性、引物-模板退火、特异性
(6)PCR反应程序设定：变性温度和时间、引物退火温度Tm与时间、引物延伸温度与时间和循环数
17. 分子杂交的类型主要有哪些？探针的标记方法和标记类型有哪些？常用的双链DNA的标记方法是哪两种，简述其标记过程？
探针的标记方法：切口平移法、随机引物合成法，末端标记法，PCR标记法，体外转录标记法。
探针按核酸分子分：DNA探针和RNA探针；
按标记物的不同：放射性标记探针和非放射性标记探针。 标记类型：按核酸分子的不同：可分为DNA探针和RNA探针 根据标记物的不同：可分放射性标记探针和非放射性标记探针； 双链DNA探针标记主要方法：切口平移法、随机引物合成法；
18. 简述Southern杂交一般过程及影响杂交的因素。
Southern杂交操作步骤:
(1) 用限制性内切酶酶切DNA, 经凝胶电泳分离各酶切片段； (2) 转膜：将DNA片段转移到硝酸纤维素滤膜或尼龙膜上； (3) 预杂交：封阻滤膜上非特异性位点；
(4) 杂交：让探针与同源DNA片段特异性结合； (5) 洗脱：去除非特异性结合的探针； (6) 自显影检查目的DNA所在的位置。 Southern杂交影响因子
1）、目的DNA在总DNA中所占的比例 2）、探针的大小和标记效率 3）、转移到滤膜上的DNA量 4）、探针与靶DNA的同源性