文件编码：VOI-HMH002-F版本号：006 / 10
5 6 7 8 9 10 平均数 批平均初始污染菌为（cfu/件） 总平均初始污染菌为（cfu/件） 2.3.3校正系数的测定
根据ISO11737-1中描述的初始污染菌的确定方法进行试验，测定校正因子，该因子取自对活菌计数的初始污染菌检测技术的验证。 测定依据：ISO11737-1:1995 试验方法：
1）标准菌株准备：取枯草杆菌黑色变种（ATCC9372），传代培养，制成100cfu/ml备用。
2）洗脱液准备：pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液：取磷酸二氢钾3.56g，磷酸氢二钠7.23g，氯化钠4.30g，蛋白胨1.0g，加水1000ml，微温溶解，分装，过滤，灭菌。
3）制备悬液稀释液，使0.1ml中含有100个芽孢。向随机抽取的10个产品上接种0.1mL该稀释悬液，并在层流下进行干燥。
4）用洗脱液对接种的产品进行洗脱，测定洗脱的芽孢数，并计算平均值。100除以平均芽孢数即为回收率的校正系数。 样品编号 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 芽孢数 文件编码：VOI-HMH002-F版本号：007 / 10
平均芽孢数： 校正系数：
2.3.4 产品释出物的检验 测定依据：ISO11737-1：1995 试验方法：
1)标准菌株准备：取枯草杆菌黑色变种（ATCC9372）,白色念珠菌（ATCC10231），传代培养，制成100cfu/ml备用。
2)产品处理：取灭菌产品以无菌操作转移到100mlSCDB培养基中，30～35℃培养24h。
3)接种：以无菌操作接种标准菌于上述产品SCDB培养基中，28～32℃培养出现阳性结果或是至少培养7天。用标准平板计数法进行微生物计数（CFU）。
结果： 微生物 枯草杆菌黑色变种 白色念 珠菌 10231 9372 ATCC 接种量（cfu） 产品＋SCDB＋标准菌 对照SCDB+标准菌 结论：。 2.4 建立验证剂量
根据初始污染菌的结果和ISO11137：2006方法1中的表5，建立合适的验证剂量。具体方法为：
a) 如果一批或更多批次平均初始污染菌等于或大于总平均初始污染菌的两
倍，则使用最高批次值；
b) 如果批次平均初始污染菌的每一个小于总平均初始污染菌的两倍，则使
用总平均初始污染菌。
根据初始污染菌的测定试验结果，得到该产品三批的批平均初始污染菌和总平均初始污染菌分别为（cfu/件）和（cfu/件），最高批次值为（cfu/件），因
文件编码：VOI-HMH002-F版本号：008 / 10
此选择（cfu/件）作为初始污染菌。
根据11737-1附录B.5.3校正过的初始污染菌可通过初始污染菌乘以校正系数求得，故产品的生物负载估计值为：（cfu/件）。
按照ISO11137 方法1中的表5查得该校正过的初始污染菌对应的验证剂量为kGy(SAL=10-2)，指定这个剂量作为灭菌剂量。如果平均初始菌在表5中没有给出，则用比实际计算的初始污染菌大些的，最接近表中数值的平均初始污染菌。 2.5 完成验证剂量试验 2.5.1概述
从批次产品中选择100件产品进行验证剂量试验，在浙江佳翔辐照技术有限公司进行辐照。采用2.4确定的灭菌剂量进行辐射处理，所照剂量用该公司放置的剂量计测定剂量，保证所测剂量落在规定剂量的±10%之内。最高剂量不能超过灭菌验证剂量的10%，如果计算的辐照样品的平均剂量少于验证剂量的90%，则验证剂量实验要重做。如果样品吸收剂量比验证剂量的90%少，并且实施无菌实验时，观察到的结果是可接受的（100个无菌试验的阳性个数不超过2个，则验证可以接受），则验证实验不需重做。 2.5.2辐照处理试验 2.5.2.1剂量计布放
应说明剂量计布放示意图，每一剂量计的测定数据，并通过数据判定所测计量是否在规定剂量的范围内。由于本公司辐照灭菌属委托加工，该部分实验报告可由委托加工公司出具。 2.5.2.2无菌检验
剂量计测定结果判定合格后，对经辐照处理的样品进行无菌检验。 试验依据：ISO11732:1998 试验方法：
1)样品测试接种均应按无菌操作法（在100级净化工作台内）进行。 2)无菌打开包装，用灭菌剪刀、镊子，将产品转移至SCDB培养基中。 3)将样品培养基放28－32℃温箱中培养14天。
文件编码：VOI-HMH002-F版本号：009 / 10
4)观察有无细菌生长。 结果：
无菌试验检验结果
试验样品 1 试验数量 培养基 50ml SCDB 温度（℃） 28-32 培养天数 阳性数 结论：经测试，试验产品阳性菌数为，经验证剂量辐照后的无菌检查结果为。 2.6建立灭菌剂量
如果实验使用整个产品，并且验证剂量是可以接受的，从表5中得到最接近平均初始污染菌的单元产品的灭菌剂量，该初始污染菌与单元产品的平均初始污染菌相等或者跟大，读出达到10-6SAL所需的辐照剂量，该剂量定为生物型无菌护创膜产品常规辐照灭菌的最低剂量，最高剂量通常按照最低剂量的两倍来制定。
3．辐射灭菌加工确认
该部分用于确认在建立的灭菌剂量下，####产品辐照灭菌过程的有效性，确定辐射灭菌过程运行参数在规定的范围内，保证产品的灭菌质量。
该部分应由委托加工公司出具的辐照加工确认报告，应遵守GB 11137-2006 《医疗器械保健产品灭菌——辐照灭菌》的相关规定。
文件编码：VOI-HMH002-F版本号：0010 / 10
4.验证总结报告书
验证名称 产品批号 留样日期 生物型无菌护创膜灭菌确认 规格 考察日期 考察时间点 报告人 验证过程及记录： 评价： 建议： 审核人（签字）： 审核日期： 批准人（签字）： 批准日期：