学科分类 年 级
生物工程 2012级
学校代码 学 号
10661 201230254
遵义医学院 学士学位论文
高糖高脂联合链脲佐菌素诱导2型糖尿
论文题目 专业名称 学 生 指导教师 论文完成单位
病 生物工程 王丹 邵敏
遵义医学院生物化学教研室
2016年3月
高糖高脂联合链脲佐菌素诱导2型糖尿病
高糖高脂联合链脲佐菌素诱导2型糖尿病
专 业： 学 生： 指导教师：
[摘要] 目的：利用高脂高糖联合链脲佐菌素（STZ）诱导SD大鼠构建2型糖尿病模型，为下一步研究相关药物对糖尿病疗效打下一定的基础。 方法：按照SOD、GSH-Px、GST及MDA试剂盒配制反应试剂，通过分光光度计进行测定，并按公式计算其值。 方法：将30只大鼠于动物房常规、室温控制25-27℃适应性喂养5天后并观察有无异常，随机分组：空白对照组（n=8只），始终喂以SPF级普通大鼠饲料；2型糖尿病组（n=20只），高脂高糖饲料喂养一个月之后。一个月后两组中所有的大鼠12小时禁食不禁水，配置链脲佐菌素注射液：在无菌环境下将柠檬酸柠檬酸钠缓冲液进行过滤除菌，将0.5g链脲佐菌素溶于25ml的柠檬酸柠檬酸钠缓冲液中混匀即为20mg/ml的STZ溶液（现配先用，避光）。Ⅱ型糖尿病模形组大鼠进行腹腔注射小剂量链脲佐菌素(STZ，37mg／kg)，空白对照组大鼠腹腔注射等体积柠檬酸柠檬酸钠缓冲液。72 小时、3周后检测空腹血糖，选择FBG≥16.7 mmol／L为Ⅱ型糖尿病模型的合格标准并进行大鼠血清胰岛素检测、口服糖耐量实验、胰腺组织形态学检测。 结论：20只用于造模的SD大鼠，有14只大鼠的血糖值FBG≥16.7mmol/L，成模率为70％
[关键词]：高糖高脂饮食；SD大鼠；链脲佐菌素；2型糖尿病
生物工程 王丹 邵敏
年级： 学号： 职称：
2012级 201230254
High glucose and lipid United streptozotocin-induced type 2
diabetes
Major and Speciality： Bioengineering Grade ： 2012 Name of graduate： Wang Dan Number： 201230254 Name of Supervisor： Shao Min Title ： professor
[Abstract] Objective： high fat, sugar combined with streptozotocin (STZ) induced by SD rat model of type 2 diabetes constructed for further research on
diabetes-related drugs efficacy and lay a foundation. Methods: According to SOD, GSH-Px, GST and MDA preparation kit reagents, measured by a spectrophotometer, according to a formula to calculate its value. Results: The 30 rats in conventional animal room, temperature control 25-27 ℃ 5 days adaptive feeding and observe any abnormal, random groups: control group (n = 8 rats), always fed with SPF Class A common rat feed; type 2 diabetes (n = 20 rats), high fat and high sugar diet for a month after. A month later the two groups in all rats fasted 12 hours water, configure streptozotocin injection: Under sterile environment citrate sodium citrate buffer
sterilized by filtration, 0.5g of streptozotocin streptozotocin dissolved in 25ml of citric acid sodium citrate buffer mix is 20mg / STZ ml solution (now with the first use,
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高糖高脂联合链脲佐菌素诱导2型糖尿病
dark). Ⅱ diabetes die shape rats intraperitoneal injection of a small dose of
streptozotocin (STZ, 37mg / kg), the control group rats were injected volume of citric acid sodium citrate buffer. 72 hours, three weeks after the fasting blood glucose, select FBG≥16.7 mmol / L type Ⅱ diabetes model eligibility criteria and detection of serum insulin, oral glucose tolerance test, morphological examination of pancreatic tissue.Results: 20 SD rats were used for modeling, there are 14 blood glucose level in rats FBG≥16.7mmol / L, molded 70%
[Key words]：high-sugar high-fat diet; SD rats; streptozotocin; type 2 diabetes
前 言
随着医学发展和时代进步，相对的，中国逐渐变成慢性病大国。慢性病全称慢性非传染性疾病，是对一类起病隐匿，病程长且病情迁延不愈缺乏确切的传染性生物病因证据，病因复杂，且有些尚未完全被确认的疾病的概括性总称。中国目前每3个成人中就有一个胖子或者准胖子，现在全国有3亿慢性病患者，15年后将有5亿慢性病患者，形势相当逼人。慢性病的危害主要造成心、脑、肾等重要器官的损害，影响劳动能力和生活质量，且医疗费用极其昂贵，增加了社会和家庭的经济负担。研究慢性疾病的发病机制、控制预防和治疗具有重要意义。
糖尿病（diabetes mellitus,DM)是继肿瘤和心血管疾病后最常见的慢性病之一，是一组常见的代谢内分泌病，分原发性及继发性两类，其基本病例生理为绝对或者相对胰岛素分泌不足所引起的代谢紊乱，临床上出现“三多一少”，即多饮、多食、多尿和体重减轻。糖尿病患者一生可分为三个阶段：未发生、轻度、轻度和重度糖尿病阶段[1]。随着人们生活水平提高，人口老龄化以及肥胖发生率增加，糖尿病发病率呈上升趋势。在我国，9240万成年人患有糖尿病，1.482亿成年人处于糖尿病前期[2]。糖尿病的相关研究越来越受到人们重视，建立相应的动物模型是研究糖尿病预防、诊断、治疗的重要手段之一，目前制备糖尿病大鼠模型的方法主要有自发性动物模型[3]、转基因动物模型[4]、和实验性动物模型[5]
。目前国内外最常用的是实验性动物模型，其方法主要有手术切除胰腺、手术植入硅
胶片刺激胰腺神经，化学药物诱导、手术及药物联合制作糖尿病模型、特殊膳食诱导、破坏饱食中枢[6]。这些方法各有优缺点，故根据不同综合情况选择不同方法。国内外研究一致表明[7]，制备2型糖尿病大鼠可通过高脂饮食诱导大鼠胰岛素抵抗后，再注射低剂量链脲佐菌素(streptozocin,STZ)损伤胰岛素功能，引起血糖升高，可以模拟2型糖尿病的发病过程。
链脲佐菌素(streptozocin,STZ)是一种氨基酸葡萄糖—亚硝基脲，是一种DNA烷基化试剂，对大鼠的胰岛β细胞的毒性作用有高度选择性，其导致胰岛受损引起血糖升高，血糖升高与STZ剂量相关[8]。有研究表明低剂量STZ诱导鼠类β细胞系INS-1凋亡，高剂量导致坏死[9]，因此可以采取一次大剂量，多次小剂量，或者高糖高脂饮食后一次小剂量三种方法进行腹腔或静脉注射[10]。链脲佐菌素造模成功率高，稳定而迅速，不受饲料成分、营养状态影响，引起的糖尿病高血糖反应较缓和[11]。建立2型糖尿病则以高糖高脂饲料饲养4-8周后联合小剂量STZ25mg/kg一次性腹腔注射最佳[12]。
本文将采用高糖高脂饮食和普通饲料分别喂养模型组和对照组大鼠联合小剂量腹腔注射链脲佐菌素诱导建立2型糖尿病大鼠模型为下一步药物治疗研究做一定基础。
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高糖高脂联合链脲佐菌素诱导2型糖尿病
材料与方法
1 实验材料 1.1 实验动物
雄性SPF级SD大鼠，8周龄，体重：180-220g,购自广东省医学实验动物中心 1.2 药品与试剂
链脲佐菌素 Sigma公司高糖
多聚甲醛 上海博谷生物科技有限公司
1.3 实验仪器 高脂饲料原料 广东省医学实验动物中心
血糖仪及血糖试纸 德国罗氏诊断公司
大鼠胰岛素酶联检测试剂盒 南京建成有限公司
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低速离心机 安徽中科中佳科技有限公司 2 实验方法 2.1 大鼠饲养
雄性SPF级SD大鼠30只，8周龄，体重：180-220g,实验动物房常规饲养，室温控制在25-27℃，40％-60％湿度，适应性喂养5天并观察，记录大鼠毛色、精神状态、体重、大小便等无异常后，随机分组：空白对照组(n=8只)和Ⅱ型糖尿病模型组(n=20只)。空白对照组始终喂SPF级普通大鼠饲料，Ⅱ型糖尿病大鼠模形组喂养高糖高脂饲料一个月。 2.2 链脲佐菌素的注射
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