3.何谓反相离子对色谱？影响其保留值的因素主要有哪些？离子对试剂的链长和有机溶剂的比例如何影响保留值？
答：反向离子对色谱是将与被分析离子带相反电荷的离子(配对离子或反离子)加到流动相中，与溶质离子结合形成弱极性离子对，此离子对在流动相中不易离解而迅速转移到键合相中，进而在固定相和流动相间进行分配，最终实现分离的一种反向色谱模式。
如三聚氰胺的分离，三聚氰胺是弱碱性有机物，在溶液中主要以阳离子存在，在以水-甲醇或水-乙腈为流动相的反相柱（C18）上保留时间比较短，由于杂质的影响还会出现严重的拖尾现象。若在流动相中加入庚烷磺酸钠试剂，则可以与样品中的阳离子形成离子对，使其成为电中性分子，这样样品的保留时间会增大，分离效果会得到提高。
影响因素：
1)介质：反相过程常用的介质上以水为主体的缓冲溶液，其中pH值影响最大，PH则更加阴离子的保留增加，阳离子则相反。另外，缓冲液中离子类型和浓度也是重要选择性参数。 2)对离子浓度：增加反离子的浓度可增加保留，但这种关系并非是线性的
3)有机改性剂：以水为主体的流动相中通常增加极性有机溶剂，如甲醇，乙腈等做改进剂，有机溶剂的加入改善了缔和分子在两相中的分配
4)温度：它影响容量因子和离子化平衡的PK值
离子对试剂的链长越短，其稳定性就越差。链长不同，形成离子对的能力不同。 有机溶剂的加入会影响原有缓冲溶液的PH值，另外对肽的离子化程度和缔和分子在两相中的分配起改善作用。比例，影响离子对的强度。
5. 理论塔板数和有效理论塔板数的计算公式？两者的区别？
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''tt?()2?16(R)2?5.54(R)2?WbW12'tR 两者的区别：由于在色谱柱中存在着死体积（在组分的保留时间中包括了死时间），因此，从分
配平衡理论计算出来的理论塔板数n并不能完全反映柱效，利用扣除死体积（或扣除死时间）后的调整保留体积（时间）计算的有效理论塔板数neff能更真实地反映柱效。
6、速率理论方程H—塔板高度;A—涡流扩散项，指固定相填充不均匀引起的扩散;B--纵向分子扩散项，分子沿色谱柱轴向扩散引起的色谱谱带展宽;C--传质阻力项，指组分在流动相和固定相之间传质的阻力，由于溶质分子与固定相、流动相分子间相互作用，阻碍溶质分子快速传递实现分布平衡，导致有限传质速率的分子间作用力称为传质阻力，固定相传质阻力+流动相传质阻力; u——流动相流动的线速度.
7、B = 2 r Dm，其中Dm表示什么？在GC还是HPLC中可以忽略B？为什么？
Dm—组分在流动相中的扩散系数。HPLC中可以忽略，纵向分子扩散显著存在于GC中.由于组分在液相中的扩散系数只有气体中的1/105，因此在液相色谱中B可以忽略。(该扩散是由浓度梯度造成的。组分从柱入口加入，其浓度分布的构型呈“塞子”状。。随着流动相向前推进，由于存在浓度梯度，“塞子”必然自发地向前和向后扩散，造成谱带展宽)
8、在UPLC超高效液相色谱（Ultra Performance LC?）中，为什么高流速仍能得到很高的柱效？
BH?A??Cuu从van Deemter曲线可以看出，u对纵向扩散项（B/u）和传质阻力项(Cu)的影响不一致，H先随u的增加而降低，达到最小值后随着u的增加而增加。由于UPLC系统采用1.7μm颗粒，即颗粒度非
常小，理论塔板高达不会随着线性流速的增加而明显增加，柱长可以比用5μm颗粒时缩短3倍而保持柱效不变，而且使分离在高3倍的流速下进行，结果使分离过程快了多倍而分离度保持不变。
H?A?B?Cuu，其中H,A,B,及u各表示什么意思？
9、 何为反相离子抑制色谱的分离模式？举例说明。
答：在反相色谱法中，通过调节流动相的pH值，抑制样品组分的解离，增加它在固定相中的溶解度，以达到分离有机弱酸、弱碱的目的，这种技术称为离子抑制色谱法。
以葡萄酒中酚类物质的测定为例，由于酚类物质均有弱酸性，极性较强，在水和甲醇中有较大溶解度。因此，在甲醇/水为流动相并且pH=7时，多数组份保留时间很短，无法完全分离。若采用离子抑制色谱法可较好的分离。
样品处理：将25mL红葡萄酒样品通过聚酰胺柱（259mm×17mmid,用5ｇPolgamid-6(Serva)装填，并先用pH2.5的酸性水平衡），以100ｍL蒸馏水淋洗，再用150mL30％的甲醇（酸化至PH2.5）洗脱，洗脱液真空浓缩至5ｍL左右，并用15％甲醇定容至10ｍL。 色谱柱：ODS柱（125mm×4mmiD） 流动相：体积比为85:15的水－甲醇（用HClO3调PH2.5）流速为1ｍL/min；检测波长为280nm。 10.液相色谱分析鸡精中的肌苷酸和鸟苷酸含量
采用反相高效液相色谱，按分子极性大小，使鸡精中各种组分同时得到分离，利用紫外检测器测定肌苷酸钠和鸟苷酸钠组分含量。 1).标准溶液系列配制
分别准确称取肌苷酸钠和鸟苷酸钠标准品20mg左右于100ml容量瓶中，用超纯水溶解定容摇匀后，即得0.2mg/ｍＬ左右的标准溶液，再以此逐级稀释成0.1mg/mＬ, 0.05mg/mＬ, 0.01mg/mＬ, 0.005mg/mＬ, 0.001mg/mＬ的标准溶液系列，均经0.45μm微孔膜过滤，滤液供进样用。 2).样品处理
准确称取200mg左右鸡精至10ml容量瓶中用3ml水溶解，然后用无水乙醇定容至刻度，充分摇匀，静置，过滤后取3ml滤液用N2吹至0.5ml以下，再用水定容至3ml，摇匀后用0.45um有机相微孔膜过滤，滤液再用 C18固相萃取小柱处理去除色素等弱极性杂质，处理后的样液上机测定。
3).色谱条件 色谱柱：Diamosil C18, 4.6mmid×250mm，5um流动相：甲醇：0.05％H3PO4溶液 5：95 检测：254nm，DAD柱温：30℃流速：1.0ml/min进样体积：5μL 4).上机测定 4.1标准曲线制作
将不同浓度的系列标准品分别上机进样分析，以峰面积为横坐标（x），浓度为纵坐标（y）作线性回归，得到肌苷酸钠和鸟苷酸钠的标准曲线方程、相关系数及线性范围。 4.2样品测定
将三个平行样品溶液分别进样，每个样均重复进样3次取其峰面积平均值代入标准曲线方程或单点校正计算含量。
11.请简述分析果汁中葡萄糖、果糖及蔗糖的色谱条件与样品处理方法，并说明样品处理的主要步骤的目的
答：色谱条件：色谱柱：Sugarpak1,6.5mmid×300mm
流动相：纯水 检测器灵酸敏度：4 柱温：85℃ 流速：0.4ml/min 进样体积：10μL
样品处理方法：(1)准确量取3ml果汁至10ml容量瓶中用无水乙醇定容至刻度，目的是提取果汁中的葡萄糖、果糖及蔗糖，沉淀蛋白质和大分子糖。(2)离心，取上清液在热水浴条件下用氮气将乙醇吹去，用水定容至刻度。除去乙醇，以防HPLC分析时影响糖的分离。(3)用0.45um有机相微孔膜过滤，滤液颜色若较深，再用Sep-Pak C18固相萃取小柱处理去除色素等杂质。目的是除去蛋白质和大分子糖沉淀，消除色度对分析的影响。(4)处理后的样液上机测定
12、HPLC测定茶多酚中儿茶素含量（实验2）所使用的是什么色谱分离模式？流动相中为何要加酸？对于普通硅胶基质键合
相C18柱，pH最低不能小于多少？
离子抑制色谱法，选用Zorbax SBC18色谱柱，以甲醇－水－三氟醋酸（或醋酸）为流动相。
在流动相中加入酸，目的是改变流动相的pH值，抑制溶质电离，使溶质在色谱过程中以中性分子保留。 对于普通硅胶基质键合相C18柱，pH最低不能小于2。