检查酚类、芳香胺类及还原性物质。
溶液I:1%铁氰化钾溶液。溶液Ⅱ:2%三氯化铁溶液。临用前等体积混合。喷洒后酚性成分呈蓝色斑点,再喷20%盐酸,能使颜色加深。纸色谱可用稀盐酸洗去喷洒液。
(5)重氮化(Pauly)试剂 检查酚羟基对位无取代基化合物。
溶液I:0.35g对硝基苯胺溶于5ml盐酸中,加水稀释至50ml。溶液Ⅱ:5g亚硝酸钠溶于70ml水中。取1m1样品的乙醇溶液,加入1m13%碳酸钠溶液,在沸水浴中加热3min,再在冰水浴中冷却后,加入1~2滴溶液Ⅰ与Ⅱ的混合液(临用时,在冰水浴中等量混合),显红色为阳性反应。作色谱显色剂用,将溶液I与Ⅱ各l0ml混合,再加20ml 1%碳酸钠溶液(均临用时在冰水浴中混合),喷洒后,显黄、红、紫等色斑点为阳性反应。 (6)牢固蓝B盐试剂 检查酚类化合物。
溶液I:新配的0.5%牢固蓝B盐的溶液。溶液Ⅱ:0.5%氢氧化钠溶液。先喷溶液I,再喷溶液Ⅱ,呈棕、紫、或绿色者为阳性反应。能偶合的芳香胺类有干扰。 3.黄酮类鉴定试剂 (1)盐酸-镁粉试剂
检查黄酮(醇)、二氢黄酮(醇)类化合物。
取lml样品的乙醇溶液,加入数毫克镁粉,滴加数滴盐酸,必要时水浴上微热,显红-紫色为阳性反应。 (2)Shinoda试剂
采用含2%锌粉(W/W)-硅胶薄层板,展层后喷20%盐酸溶液,黄酮(醇)类呈红紫色。
(3)三氯化铝试剂
检查具有邻二酚羟基或3-羟基、4-酮基或5-羟基、4-酮基的黄酮类化合物。 1%三氯化铝乙醇溶液或5%三氯化铝乙醇溶液。喷洒前、后将薄层板置日光下和紫外光灯下观察,呈黄色或黄绿色荧光为阳性反应。也可在滤纸上和试管中进行。
(4)中性醋酸铅或碱式醋酸铅试剂 检查具邻二酚羟基或酚羟基的黄酮化合物。
饱和中性醋酸铅或碱式醋酸铅溶液。取1ml样品的乙醇溶液,加1~2滴试剂,产生黄色沉淀。 (5)锆-柠檬酸试剂
检查具3-羟基或5-羟基的黄酮类化合物。
溶液I:2%二氯氧锆甲醇溶液。溶液Ⅱ:2%柠檬酸甲醇溶液。取1mg样品,用甲醇溶解,加入溶液I lml,呈鲜黄色示有3-羟基或5-羟基;再加入溶液Ⅱ1m1,黄色不褪,示有3-羟基;黄色褪去,加水稀释后变为无色,示无3-羟基,但有5-羟基。也可在滤纸上进行,得到的锆盐络合物多呈黄绿色,并具荧光。 (6)氨性氯化锶试剂
检查具有邻二酚羟基结构的黄酮类化合物。
溶液I:1%氯化锶甲醇溶液。溶液Ⅱ:氨蒸气饱和的甲醇溶液。取1mg样品的甲醇溶液,加入3滴溶液I,再加3滴溶液Ⅱ,产生绿-棕-黑色沉淀为阳性反应。
(7)醋酸镁试剂
检查黄酮类、二氢黄酮类化合物,及羟基蒽醌类衍生物。
1%醋酸镁甲醇溶液。在滤纸或薄层板上,点1滴样品醇溶液,挥去醇后,点l滴试剂于样品斑点边缘,加热干燥,于紫外灯下观察,黄酮类显黄色荧光,二氢黄酮类呈天蓝色荧光。显橙红色为大黄素型蒽醌,显紫色为茜草型蒽醌。 (8)硼氢化钾试剂 检查二氢黄酮类化合物。
2%四氢硼钾的甲醇溶液。取样品1~2mg溶于甲醇中,加等量试剂lml后,加数滴盐酸,呈红-紫红色为阳性反应。薄层色谱上喷试剂,5min后放人盐酸蒸气槽内呈色。
4.醌类化合物鉴定试剂 (1)Borntrager试剂 检查羟基蒽醌衍生物。
2%氢氧化钠或2%碳酸钠溶液(或甲醇溶液)。取lml样品的乙醇溶液,加lml试剂,呈红色为阳性反应。在薄层色谱上喷洒试剂,显橙黄或红色斑点。黄酮类化合物遇碱也能反应生成黄、橙、红色等。 (2)菲格尔(Feigl)试剂 检查醌类衍生物。
溶液I:25%碳酸钠溶液。溶液Ⅱ:4%甲醛的苯溶液。溶液Ⅲ:5%邻二硝基苯的苯溶液,取1滴样品的苯溶液,加入上述3种试液各1滴,混匀,置水浴上加热l~4min,呈显著的紫色为阳性反应。 (3)硼氢化钠-二甲基甲酰胺试剂 检查蒽醌及其衍生物。
20g硼氢化钠溶于100ml二甲基甲酰胺中。作色谱显色剂用。喷洒试剂后,于紫外光灯下观察,显强的黄、绿或蓝色荧光为阳性反应。 (4)硼酸试剂
检查羟基蒽醌类化合物。
1%硼酸溶液。作色谱显色剂用,喷洒后,置紫外光灯下观察,呈黄、橙、红色荧光为阳性反应。
(5)对亚硝基二甲基苯胺试剂 检查蒽酮类衍生物。
0.1%对亚硝基二甲基苯胺的吡啶溶液。取1m1样品的乙醇溶液,置水浴上蒸干,残渣用吡啶溶解,再滴试剂数滴,显紫色或绿色为阳性反应。 (6)活性次甲基试剂 检查苯醌及萘醌类衍生物。
lg活性次甲基试剂(例如丙二酸酯、乙酰乙酸酯等)溶于30ml氨与乙醇的等体积混合溶液中。取5ml样品的乙醇溶液,加入3ml试剂,显蓝、紫或红色为阳性反应,萘醌分子中具羟基,可使反应减慢或不起反应。 5.内酯、香豆素类鉴定试剂 (1)开环-闭环试剂 检查内酯环。
溶液I:1%氢氧化钠溶液。溶液Ⅱ:2%盐酸溶液。取lml样品的乙醇溶液,加2ml溶液I,置沸水浴上加热3~4min,溶液比未加热时澄清。再加溶液Ⅱ酸化(pH2),放置,溶液又变为混浊。酚性化合物和有机酸有干扰,但可用下法予以区别,取样品乙醇溶液数毫升,置水浴上蒸干溶剂,用乙酸乙酯溶解后置分液漏斗内,用5%氢氧化钠溶液萃取酚性及有机酸成分,乙酸乙酯溶液用水洗至中性后按上法检测。 (2)异羟肟酸铁试剂 检查内酯环。
溶液I:7%盐酸羟胺甲醇溶液(新鲜配制)。溶液Ⅱ:10%氢氧化钾甲醇溶液。溶液Ⅲ:1%三氯化铁甲醇溶液。取1m1样品的甲醇溶液,加入溶液I、Ⅱ各5滴,置沸水浴上加热3min~4min,冷却后,用稀盐酸调至pH3~4,再加入溶液Ⅲ1滴~2滴,显橙红或紫红色为阳性反应。作色谱显色用,将溶液I,Ⅱ等量混合,喷洒后空气中干燥10min,再喷溶于1%盐酸中的三氯化铁溶液,显橙红或紫红色斑点。
(3)稀氢氧化钠溶液 将检样点于滤纸片或薄层上,试样边缘点上碱液,晾干,置紫外灯光下观察,多数羟基香豆素有强的荧光。
配合酚类鉴定试剂的检查,以确定游离酚羟基的存在及取代位置。 6,强心甙鉴定试剂
(1)碱性3,5-二硝基苯甲酸(Kedde)试剂 检查强心甙的 、 -不饱和内酯环。
2%3,5-二硝基苯甲酸甲醇溶液与5%氢氧化钾溶液,用前按1∶l混合。取1m1样品的甲醇溶液,加入3~4滴试剂,显紫红色为阳性反应,几分钟后褪色。也适用于薄层色谱。
(2)碱性苦味酸(Baljet)试剂 检查强心甙的 、 -不饱和内酯环。
9ml 1%苦味酸乙醇溶液与1ml l0%氢氧化钠溶液用前配制混合。用1m1样品的乙醇溶液,加入1滴试剂,放置15min左右,显橙红色或红色为阳性反应。 (3)碱性亚硝酰铁氰化钠(Legal)试剂
检查不饱和内酯、甲基酮或活性亚甲基(常用于强心甙)。
溶液I:0.5%亚硝酰铁氰化钠乙醇溶液。溶液Ⅱ:10%氢氧化钠溶液。取1 m1样品的甲醇溶液,置水浴上蒸干,冷却后加lml吡啶溶解残渣,加入4~5滴溶
液I和1~2滴溶液Ⅱ,溶液显红色并逐渐消失为阳性反应。用于薄层色谱检查,将1g亚硝酰铁氰化钠溶于10%氢氧化钠-乙醇(1∶1)的溶液中,喷洒后,显红色或紫色斑点。 (4)磷酸-溴试剂 检查强心甙。
溶液I:10%磷酸乙醇溶液。溶液Ⅱ:溴化钾饱和溶液-溴酸钾饱和溶液-25%盐酸溶液(1:l:1)。用于薄层色谱检查,取溶液I喷洒后,125℃加热12min,紫外光灯下观察。再将薄层板烤热,趁热喷溶液Ⅱ,不同的强心苷显示不同的颜色斑点。
(5)醋苷-硫酸(Liebermann-Burchard)试剂 检查甾体、甾体皂苷、三萜类及强心苷。
取0.1~0.2mg样品,置于白瓷反应板上,加入0.3ml醋酐,使样品溶解,沿边缘滴入硫酸,出现红-紫-蓝-绿色,最后褪色为甾体皂甙,三萜皂甙只能呈黄-红-紫等。
(6)三氯醋酸—氯胺T试剂
检查洋地黄毒甙元衍生物和2,6-去氧糖苷。
25%三氯醋酸乙醇(氯仿)溶液4ml与3%氯胺T溶液1ml混匀。喷洒后,100℃加热数分钟,于紫外光灯下观察。洋地黄毒甙元的苷类显黄色荧光,羟基洋地黄毒苷元的甙类显亮蓝色荧光,异羟基洋地黄毒苷元的苷类呈灰蓝色荧光。洋地黄毒糖的苷(2,6-去氧糖苷)在可见光下呈暗蓝色。
强心苷的鉴定应由苷元(甾体母核和不饱和五元内酯)和2-去氧糖两部分共同证实。
7、甾体、三萜及其苷的鉴定试剂 (1)三氯化锑试剂 检查甾体、萜类、皂苷。
25g三氯化锑溶于75ml氯仿中。喷后100℃加热5min,不同的皂苷元在可见光或紫外光灯下显不同颜色。 (2)三氯醋酸试剂 检查皂甙。