2011大连理工大学生物化学和生物化学实验考研模拟题及答案 - 图(5)

2019-01-12 12:22

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此法的缺点是在处理过程会产生大量的热,应采取相应降温措施,对超声波及热敏感的蛋白和核酸应慎用。②采用溶菌酶处理

(2)应选用阳离子交换剂:选择阴离子抑或阳离子交换剂,决定于被分离物质所带的电荷性质。如果被分离物质带正电荷,应选择阳离子交换剂;如带负电荷,应选择阴离子交换剂;如被分离物为两性离子,则一般应根据其在稳定pH范围内所带电荷的性质来选择交换剂的种类。

(3)纯度鉴定:将得到的蛋白进行聚丙烯酰胺电泳,纯的蛋白质得到单一的条带。 分子量:将得到的蛋白和一标准蛋白进行凝胶过滤,得到洗脱体积带入公式计算即可得到其相对分子质量。

(4)超滤、沉淀、透析 超滤比较温和,对蛋白质不会有修饰和改变,蛋白的种类一般不会有丢失。它的缺点是总样品的量可能会减少(被膜所吸附)。另外超滤对样品的要求比较高。沉淀法中,又以 TCA(三氯乙酸) 法最为普遍使用。使用 TCA 法时,一定要用冷的纯丙酮清洗蛋白沉淀两次,去处残留的 TCA 和其他沉淀下来的杂质。透析法只使用于量比较大的样品,量小时,操作困难。 透析法可以和超滤法联用。先把样品透析到一个比较干净的环境( 不含盐,甘油,去垢剂或其它杂质,比如碳酸氢氨溶液),然后再进行超滤。 (5)因为蛋白中含有二硫键,而在蛋白质变性过程中他被破坏,只有在添加还原剂的条件下才可以将二硫键恢复。

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