色谱柱，该柱应该装有与制备色谱柱相同的填料。利用这种初步的分析来获得正确分离条件的方法可以节约时间、样品和溶剂。 ③优化分析型液相色谱条件
应寻求较小的容量因子（K’）。容量因子表达了样品与柱填料的作用强弱。 一般将分辨率调至高于分析型LC分离所需的水平，这样可以与制备型LC分离过程中的过载相适应。在进行反相柱色谱分离时，在溶剂系统中增加水的含量可帮助达到该目的
④转换至制备型液相色谱系统 ⑤分离效果
⑥纯化物质的回收 ⑦所的物质的分析
制备加压液相色谱分离的关键部件是色谱柱。几种典型色谱柱的直径与上样的关系【3】见下表：
色谱柱的其他一些参数对于分离的成功也至关重要，影响分辨率（Rn）的主要参数是选择性（a）和容量因子（K’）
分辨率
? K’是容量因子表达了样品与柱填料的作用强弱
? a是选择性系数，描述两化合物分离的好坏程度，是化学因数。 ? N是理论塔板数，描述色谱峰德普带展宽程度。 2.1边缘切割和循环色谱分离
当对两个或多个相距很近的主要成分进行分离时，若色谱系统的选择性不足已将该混合物分开，此时可采用循环色谱分离。在确定最佳分析型分离条件后进行制备色谱分离，通过切割相应色谱峰的前部和后部可获得纯a和纯b。
2.2色谱柱的过载和中性切割 为了提高制备型分离能力，可使色谱柱超载，由于分离不是在先行条件下进行，最佳的分离条件无法再从分析型数据来预测。在利用“中性切割”技术进行分离时，需要避免主要谱峰前后两端微量组分的污染。
2.3柱转换
利用这类技术可使一根色谱柱的洗脱液流入另一根色谱柱。该技术具有以下有点：
1、分辨能力和选择性得到提高 2、样品可在运转中转化 3、微量的样品可得到富集
4、可以减少用于清洗色谱柱等所花时间
2.4分类【5】（根据压力的打下来区分） 快速色谱 （约2bar/30psi） 低压液相色谱 （＜5bar/75psi）
中压液相色谱 （5~20bar/75~300psi） 高压液相色谱 （＞20bar/300psi）
3.柱色谱
常规柱色谱法是靠重力驱动流动相经固定相的一种分离方法，分离时可将样品溶解在少量初始洗脱溶剂中，加到固定相顶端。当拟分离样品在洗脱剂中溶解度不佳时，可采用固体上样法，即先将样品溶解在一定溶剂中，然后加入2~5倍量的固定相。将该混合物在低温下用旋转蒸发仪蒸干，然后把所得的粉末加到色谱柱的上部。下面重点介绍干柱色谱和减压液相色谱。 干柱色谱【3】：
该方法是将干柱的吸附剂装入色谱柱中，将待分离的样品配成浓溶液或吸附于少量填料上，然后上样。当洗脱液依靠毛细作用于柱上留下，接近色谱柱底部时，停止洗脱，将吸附剂根据柱上各色谱带挖出或切开，用适当的溶剂洗出。
减压液相色谱：
减压液相色谱（VLC）方法起源于澳大利亚，VLC凭借真空的动力加速溶剂的流动，LVC类似于制备型薄层色谱，在完成一次展开、干燥后还可以再次对其进行展开。
实例应用： 柱色谱实验—大孔吸附树脂分离纯化中药栀子中的栀子苷单体【4】：
ⅰ主要仪器和试剂
主要仪器:色谱柱(3cm内径玻璃柱),比重计。
药材与试剂:栀子，D101型大孔吸附树脂，95%乙醇加水配至各种浓度。 ⅱ实验步骤：
制备栀子果实粗提物：取干燥栀子果实药材粗粉500 g,用10倍量50%乙醇回流提取2次,每次2 h,过滤,合并滤液, 60℃减压浓缩至稀浸膏,真空干燥得栀子果实粗提物,得率为26. 6%。该部分实验由教员提前做好。
取上述栀子果实粗提物,加水混悬后总体积为2 000 mL。加入到装有1 500 g经预处理过的1300大孔吸附树脂层析柱上,上样完毕后吸附2 h。用6 000 mL水洗脱(弃去)。再用8 000mL10%乙醇洗脱(弃去),最后用6 000 mL 20%乙醇洗脱, 20%乙醇洗脱流份减压浓缩后,真空干燥(60℃),得栀子苷棕色粉末6. 42 g,得率为1. 3%。采用高效液相色谱(HPLC)法对该粉末进行纯度检测(峰面积归一化法)测得栀子苷纯度为98. 9%。HPLC分析条件为色谱柱LichrospherC18(4. 6 mm×250 mm, 5μm);流动相为乙腈：1%醋酸水溶液=10：90;流速0. 9 mL/min;柱温25℃,检测波长238nm。在此条件下栀子苷的高效液相色谱图见图1,峰1为栀子苷。
ⅲ实验记录
记录洗脱流速,流分的颜色变化。
4. 制备气相色谱
气相色谱技术（GC）是一种分析工具【9】，制备量级的应用并不常见，而最小量制备的气相色谱是在一般分析型气相色谱的基础上加上设在柱输出端的样品收集系统而形成，这样的系统一般能处理毫克或毫克级的样品，制备分离时还需要