不规则抗体筛选操作规程
一.试剂和仪器
1.抗人球蛋白（IgG,C3b/C3d） 多特异检测试剂卡或抗人球蛋白 (IgG)单特异检测试剂卡。
2.上:海血液生物医药有限公同3%抗筛试剂红细胞悬液 3.离心机和孵育器 二.标本收集与处理 1.血清或血浆都可以使用。
2.如果在直接抗人球蛋白实验中加入了血浆标本，因为钙离子的 失活，补体依赖的抗体可能无法检测出来，所以建议使用血清标本。 操作步骤
1.取出试剂卡，平衡至室温:使用前离心确保无气泡和断层。 2.观察卡的反应液面高度,确保试剂液面高于凝胶平面3cm左右， 否则请勿使用；撕开试剂卡上的锡纸，撕开后的微柱请子1小时内进 行下面操作。
3.分别向反应柱内加入50 ul患者血清或血浆。注意，加样时， 吸头请勿触及微柱管壁。
4.再分别向反应柱内加入10u1 3%红细胞悬液Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ(抗筛红 细胞)。
5.观察柱中的反应物各组分是否混匀，必要时轻弹儿下微柱充分， 使反应物混匀。
6.在孵育仓中37℃孵育15分钟。
7.用离心机离心5分钟，离心必须在加样后30分钟内进行。 8.从微柱正反两面判读并记录结果。 四.结果判读
阳性结果（＋）红细胞凝集为阳性结果。 阴性结果(-):无溶血及红细胞未凝集为阴性结果。
溶血会导致玻璃珠上:方呈粉红色或红色。如果发现溶血现象，则应 先将血清或血浆置于56C水济30min以灭活补体，然后再重复试验， 观察红细胞凝集现象。
4 +反应:红细胞在柱中玻璃珠上:面凝集，并形成一个环形带。 3+反应:发生凝集的大部分红细胞停留在玻璃珠的上半部分。 2 +反应:发生凝集的红细胞分布于整个玻璃珠床，柱的底部有少 量细胞。
1+反应:大部分凝集的红细胞停留在玻璃珠床的下半部分，柱的 底部有少量红细胞。
阴性反应:所有红细胞均穿过玻璃珠床，在柱的底部形成一个平整 的红细胞聚集带。 五.注意事项
1.试剂卡应保存在2-25C，请勿冷冻保存:请勿将试剂卡放入自 动除霜的冰柜中，也不变放在离热源很近或阳光直射的地方。如果试 剂卡放在冰箱中，使用前应先恢复至室温。
2.卡中液体试剂的陈结或蒸发都有可能影响未凝集红细胞通过玻璃 珠到达微柱底部:另外细菌污染也有可能引起假阳性结果。
3.红细胞悬液的配制请参阅说明书要求。 4.微柱中加入样本或试剂时，请注意以下几点
1)加样枪的位置:加样枪枪头应与微柱管壁保持大约45度角，并 避免直接接触。
2)操作之前请羊细阅读试剂使用说明书，加样量要准确。 5.反应结果应双面判读。
6.质控管:用于阴性质控，即用微柱中的试剂进行平行试验，正常情 况下未发生凝朱反应的红细胞在微柱中能够顺利通过玻璃珠之间 的间際到达底部，香则说明这张卡或红细胞本身有质量问题。 如质控管是阳性结果，提示试验结果应进--步分析。
7.如果试剂卡出现以下结果后，请按要求处理，必变时经销商联系: 1)正常情况下，微柱中的液面应高于玻璃珠水平面3cm左右，当 微柱中试剂液面等于或低于玻璃珠水平面时，请不要使用此卡。 2)由于运输原因，导致试剂盒倒路时间过长，可能会在试剂或微 柱中出现气泡。操作人员取卡时如果发现有气泡，可将卡垂直向 上，用手轻弹，把气泡弹出，如果气泡过大不能弹出，可用离心 机离心一次，即可将气泡清除。
3）如果试剂卡有明显损坏（微柱裂开或锡纸裂开等），试剂中有明 显的颗粒物质，请不要使用。