第二组细胞计数结果 计数室 1 2 3 4 5 6 7 8 细胞总数/个 187 217 234 197 150 166 178 187
两组细胞计数总计 总数 平均值 细胞总数/个 3319 274
根据上表可得：
细胞总数/ml = 274×10 ×10/9=3.04×10个/ml
细胞活力＝(细胞总数 - 蓝色细胞数)/细胞总数X100% = 89.545%
六、结果分析：
观察表格中的数据可得，本次实验我们小组所复苏细胞的细胞存活率为89.545%，细胞总数为3.04×10个/ml。总体而言每个计数室细胞总数相差不大，说明细胞悬液中的细胞分散良好，整体而言细胞悬液较为均匀，提高了计数的准确性。实验时可能因镜检时间过长、因镜检而导致的细胞死亡数增多，导致得到的存活率偏小。
七、思考题
1、细胞计数应注意的问题？
6
4
6
死细胞数/个 21 26 27 21 16 18 20 22 死细胞数/个 347 22 细胞计数时要求悬浮中细胞数目在50×10^4个/ml左右，如果细胞数目很少要进行离心再悬浮于少量培养液中。
细胞压格计上线不计下，计左不计右，如有少量两个以上细胞按一个细胞计数。镜下计数，有时偶尔有两个以上细胞组成的细胞团，应按单个细胞计算。如果细胞团占10%以上，说明消化不充分，细胞数少于200个/10平方毫米或多于500个/10平方毫米时，均说明稀释不当，需重新置备细胞悬液，再重新记数。
在加样时要摇匀样品取悬液，从盖玻片边缘滴加细胞悬液，连续2~3次，直至充满计数板和盖玻片间的空隙。操作时注意盖片下不能有气泡，否则要重新计数。染色时间不宜过长，以免对细胞造成严重损伤。
2、检测细胞的死活还有哪些方法？ (1)染色法
①亚甲基蓝溶液染色：亚甲基蓝为活体染色剂，可以让活细胞染色,死细胞不能染色。活细胞被染为深蓝色的部分是（细胞核）亚甲基蓝可以结合核酸，使细胞核呈蓝色。
②中性红染色：中性红是液泡系的专有染料，也是一种低毒性染料，可以使活细胞液泡着红色，而细胞质和细胞核不被着色；死细胞的液泡不被着色或浅染，染料弥散于整个细胞中，细胞核和细胞质被染成红色。
(2)仪器分析法：可采用微电极技术（利用死活细胞膜两侧电位的差异）、全自动分析细胞记数仪和流式细胞仪等，可对细胞的死活进行精确的批量检测。流式细胞仪法用来判断细胞死活的常用荧光探针有二大类：一类是能透过活的细胞膜进入细胞内而发出荧光的物质，例如FDA可被活细胞持留而发出黄绿色荧光，若细胞有损伤则会从细胞中流失，观察不到荧光。另一类是不能透过活细胞膜，但能对固定的细胞及膜有破损的细胞的核进行染色。
【参考文献】
[1] 桑建利, 谭信. 细胞生物学实验指导. 北京:科学出版社, 2010.
[2] 北京师范大学生命科学学院.细胞生物学实验.北京:北京师范大学生命科学学院,2015.9.