? 3、低倍镜的使用:对好光后,将准备观察的标本片放置在载物台上,使材料对准载物台上的通光孔,用弹夹固定(注意要盖玻片向上,不要放反)。转动大调节轮使载物台缓缓上升,同时自侧面密切注意标本片与接物镜之间的距离,到标本片距物镜约0.5~1厘米时,即可停止转动。然后用左眼向目镜内观察(右眼要同时睁开)。同时逆时针转动大调节轮使载物台徐徐下降,当降到焦距时,在镜内可看到标本的物像,若物像不够清楚,可用小调节轮稍加调节即可。
? 若旋转大调节轮太快,载物台下降过低致使超过焦距物像不能显现时,千万不要在眼睛观察接目镜的同时,旋转大调节轮使载物台上升,以防标本片碰到物镜,遇此情况应照上法重新操作;可用字母标本片练习低倍镜的使用,并注意镜内所呈物像是正像还是倒像?
? 4、高倍镜的使用:使用高倍镜时必须先用低倍镜找到所要观察的结构,调节清晰,并将要放大观察的部分移至视野的中央,再直接转动转换器,调换高倍接物镜。此时需注意两点,第一是要认准高倍接物镜镜头,不要将油镜头错当做高倍镜镜头。第二是调换高倍接物镜时不要转动调节轮升降载物台,否则焦距不对将影响高倍镜的使用。
? 当调换好高倍接物镜以后,镜头距标本片很近,因此观察操作时要特别小心,这时只需要用小调节轮稍微调整焦距即可看到放大了的清楚的物像。注意在使用高倍镜时切勿转动大调节轮,以免压碎标本片及损伤镜头。若高倍镜下找不到物像时,必须重新用低倍镜找到后再按上述方法操作字母装片反复练习低倍镜及高倍镜的使用。
? 5、用后整理:观察完毕后,将物镜转离通光孔。取下标本片、升高载物台,还原聚光器等,然后将显微镜按原位轻轻放入箱内、上锁。 (三)显微镜的保护法
? 1、使用显微镜前,必须认真检查,若发现有损坏或丢失零件应立即报告指导教师。
? 2、取、放显微镜时应谨慎小心,做到按要求轻拿轻放,不要碰撞。 ? 3、未经指导教师许可,不得随意拆卸镜头或取下显微镜的任何附件。 ? 4、必须保持显微镜的清洁,光学镜片要用擦镜纸擦拭、机械部分可用纱布擦净。如镜头沾有污物或油垢、可用擦镜纸沾少许二甲苯擦净,不可用手指、废纸、手绢、抹布等擦拭。 (四)细胞后含物的观察:
? 1、淀粉粒临时装片的制备与观察
? 制做临时装片,需预先备好洁净的载玻片及盖玻片,用前要擦拭干净,具体擦法如下:
? 用左手拇指与食指拿住载玻片的两短边,用右手拇指、食指将干净纱布夹于载玻片的两面,沿玻片长边往返擦拭,擦时两指用力要均匀直至擦干净为止。用同样
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方法擦盖玻片,由于盖玻片极薄,擦时用力要轻而均匀,以免玻片破碎。
? 取擦拭干净的载玻片,在中央加一滴水,然后用镊子从切成小块的马铃薯块茎
上刮取白浆,放在水滴中搅一搅,按正规操作盖上盖玻片,先于低倍镜下观察,可见淀粉粒大多呈卵椭圆形,将形状清楚的淀粉粒移到视野中央,换过高倍镜仔细观察淀粉粒的结构。在卵圆形淀粉粒较小的一端有脐点。围绕脐点可见明暗相间的纹理即为层纹。马铃薯的淀粉粒除了单粒外,还可以看到少数复粒和半复粒。选择典型清楚的淀粉粒绘图。
? 2、草酸钙结晶——于示教镜下观察几种草酸钙结晶
? 簇晶:在大黄粉末临时装片中,为大型簇状结晶,由许多三菱形结晶的基部接合而成。
? 针晶:于半夏块茎横切片中可见在许多大型的粘液细胞内含有针晶束。 ? 方晶:观察黄柏皮横切片,在染成粉红色的纤维束周围有许多菱形或方形的透明结晶。
? 砂晶:观察地骨皮横切片,在一些薄壁细胞中有许多灰色的细小三角形或不规则砂粒形的结晶即为砂晶。 四、实验报告
? 绘马铃薯淀粉粒图,并注明各部。
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实验二 植物的组织
一、目的要求
(一)掌握保护组织、机械组织、输导组织的特征及在植物体内的存在部位。 (二)认识几种常见的分泌组织。 (三)学会徒手切片的制作方法。 二、仪器用品、 实验材料 ? ①新鲜藿香茎
? ②南瓜茎纵切片(每人一片) ? 桔皮横切片(一片示教) ? 川芎根茎横切片(一片示教)
南瓜茎横切片(一片示教) ? 黄柏粉末(每室一份)
何首乌粉末,50%水合氯醛,稀甘油、蒸馏水、酒精灯。 5%氢氧化钾溶液 关木通茎,党参根 三、实验内容与方法
(一)保护组织:藿香茎横切临时装片的制作与观察
? 取藿香嫩茎切成2~3厘米一段,将横切面削平,沾上一点水,以防止新鲜材料变干,并增加润滑,使组织不易切碎。用左手拇指和食指夹住材料,下端用中指托住,右手拿刀片,使刀刃向内并与材料的断面平行。自材料的左前方向右后方反复拉移刀片,即可将材料切成很薄的片。反复切时,要随时在断面上沾水。将切下的薄片放入盛有清水的培养皿中,选取最薄的一片,按正规操作制成的临时装片。先在低倍镜下观察,可见茎呈现四方形,四角具有突出的棱脊。茎最外为一层表皮,表皮外具有许多毛茸状附属物,尤其在四角处更多。选取清楚的一角,换高倍观察非腺毛,腺毛及腺鳞的特征。 (二)机械组织 ? 1、厚角组织
? 取上述藿香茎徒手切片进行观察,在四个棱脊处表皮下均可见厚角组织。细胞呈多角形,每一细胞角隅处壁显著增厚。 ? 2、厚壁组织(示教)
? 石细胞及纤维——黄柏皮粉末示教
? 在示教镜下观察石细胞及纤维,比较其结构有何异同? (三)输导组织:导管与筛管
? 取南瓜茎纵切片于低倍镜下,首先自一侧逐渐向内观察切片的整体情况。其中
染成粉红色的带有环状或网状花纹的部分即木质部中的导管。在木质部两侧即为韧
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皮部,分清各部后,可观察下列结构:
? 导管:细胞壁加厚部分呈环状、螺旋状或网纹状。注意你所观察的切片中有几种类型的导管。
? 筛管:位于导管的两侧,由长筒形细胞上下相连而成,细胞间的横隔壁上有许多小孔即筛孔。此横隔壁即筛板。
? 在示教镜下观察南瓜茎横切片中的筛板,与纵切片中的筛板比较。 (四)分泌组织
? 1、桔皮横切片——示溶生分泌腔(示教)
? 于示教显微镜下观察,可见在外果皮部分有许多大型类圆形、椭园形的腔,即为溶生分泌腔。有何特征?
? 2、川芎根茎横切片——示裂生分泌腔(示教)
? 在示教显微镜下,在切片的外侧(韧皮部)部位,可见类圆形的腔,即“裂生分泌腔”,注意这种分泌腔与桔皮所见分泌腔有何不同? (五)显微制片法:
1、粉末制片法:一般需用过5~6号筛的粉末,用水或稀甘油、50%水合氯醛液装片。
取何首乌粉末少许,置载玻片上,摊平,加水1~2滴,用解剖针托着盖玻片使其轻轻盖下,以滤纸片吸去溢出的液体与材料,揩干后即可置显微镜下观察。注意何首乌粉末中草酸钙簇晶较多而大(视野稍暗一些易观察);淀粉粒很多,单粒类球形、脐点星状、点状或三叉状,复粒由2~9分粒组成。
透化法:取何首乌粉末少许,放在载玻片的中央偏右一些,滴加水合氯醛液2滴,用解剖针调和均匀,在酒精灯上用小火微微加热透化(要使载玻片保持平稳,慢慢移动,且勿使液体沸),在加热过程中,要随时添加水合氯醛液,千万勿蒸干,加热到粉末微透明为止,带载玻片微冷却后再加水合氯醛溶液少许,用解剖针将粉末搅匀,加上盖玻片即可镜检,透化后的粉末片与用水装的片比较有何不同。
2、组织解离法:为了更好的观察单个细胞,特别是石细胞、纤维、导管、管胞等的形状,可将它们从组织中解离出来,成为单个的状态,办法是用化学试剂处理,使组织各细胞间的胞间层溶解,从而使细胞分离,组织解离方法可按药材的性质选用不同的试剂。常用以下方法:
(1)氢氧化钾法:药材内薄壁组织占大部分,木化组织少或分散存在时可选用此法。取少量材料(党参)切成像火柴杆粗细的小条置试管中,加5%氢氧化钾溶液2~5ml,在沸腾水浴中加热,至用玻璃棒压挤材料能离散为止(一般约30分钟左右即可),倾去碱液,材料用水洗涤后,去少许,在载玻片上用解剖针挑开,用稀甘油制成临时装片即可观察。
(2)硝铬酸法:薄壁组织少、木化组织较多或集成较大的群束,要将成群的纤维和石细胞分开可用此法。将材料(关木通)放在小烧杯中,加20%硝酸与20%铬酸
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的等量混合液适量浸没材料,于室温放置,随时检查至用玻璃棒压材料能离散为止,解离时间视材料的坚硬程度和木化程度而定,一般约需30~60分钟,必要时也可水浴加热,以加速解离,至合乎要求为止,可洗去酸液,取材散开,制成临时装片观察。 四、实验报告
绘藿香茎横切1/4表皮及其附属物,并注明各部。
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