2）卡宝品红染液（最好在使用前两周配制出来，效果会更好）： 储存液：3g碱性品红溶于100ml70%酒精中。（此溶液可放置几个月） 染液：5%苯酚 90ml
储存液 10ml 福尔马林 10ml 冰醋酸 10ml
将上述几种物质混匀，静置24小时，过滤，即可使用。
四 实验步骤
1 刮取口腔粘膜上皮细胞
受检者用清水漱口数次，用洁净牙签从口腔两侧刮取粘膜，原位刮2～3次，第一次舍去，第2，3次分别涂于干净载玻片（载玻片要非常干净，这样材料才能粘的比较牢，这一点在用口腔粘膜上皮细胞制备X染色质小体时尤其重要）上。 2 固定
不要让玻片上的材料干燥，迅速滴固定液1滴于载玻片上，固定20min。如果让材料在空气中干燥，会使细胞变形。 3 冲洗
固定结束后，蒸馏水洗2～3min，注意一定使用小水流，以免将细胞冲洗掉。 4 解离
冲洗完后，用盐酸37℃水浴（或室温条件）解离20min，晾干。盐酸解离的目的是水解核中的RNA，除去可着色的富RNA小体，防止它们与富DNA性染色质混淆。如果过度水解，会破坏DNA，而水解不够则不能除去紧邻核仁的富RNA小体。 5 染色
在晒干的载玻片上滴加1～2滴卡宝品红染液，染色20～30min（勿干），
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细水洗去染液，晾干。 6）镜检观察X染色质。 五 结果辨析
在光学显微镜下可见到X染色质为一紧密结构，轮廓清晰染色较深的小体（如下图）。一般说来，在动物细胞中，X染色质可以处于三种不同的位置，如可以处在靠近核仁位置、也可以靠近核膜边缘，或者自由的处于核区内。但对于每一特定的物种来说，这种位置是相对恒定的，如人类X染色质往往紧贴核膜内缘，约1μm大小。
处于核膜内缘的X染色质在进行压片时，也有可能被压在核的中央。在这种情况下，X染色质很可能与细胞核中其他着色的物质相混。为了保险起见，在进行X染色质计数时，我们通常只计数靠近核膜边缘的浓染小体。
图1 X染色质示意图
六 [作业与思考]
1 我们是否可以用X染色质的制备方法把“先生”和“女士”分开呢？ 2 是否在所有的正常女性细胞中都能看到X染色质？ 4 X染色质的制备中，盐酸解离的目的是什么？ 5 在下表中填入相应的内容
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编号 X小体数 表型 性别
性染色体配比
核 型
1 2 3 4 5 6 7 8
0 0 1 1 2 2 3 3
正常男性 不正常女性 不正常男性 正常女性 不正常男性 不正常女性 不正常男性 不正常女性
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实验七 微核检测技术
【目的要求】
1、掌握人体外周血淋巴细胞微核检测技术(有丝分裂阻断法微核检测技术)。
2、熟悉微核的形态特征。
3、了解微核检测的实际意义和应用范围。
【实验原理】
微核是游离于细胞质中的核物质小体。其大小一般是主核的1/3～1/4。微核是染色体畸变的一种特殊表现形式，是由细胞分裂后期滞留的染色体断片或整条染色体在子代细胞分裂间期的细胞质中形成的游离团块物。由于染色体受化学诱变剂和辐射损伤而断裂成一些无着丝粒的染色体断片或受到纺锤体的毒物作用，纺锤体受到损伤，当细胞进入分裂后期时，不受纺锤丝牵引而滞留在赤道板附近，在末期以后，单独形成一个或几个规则的次核，包含在子细胞的胞质内，由于比主核小得多，故称微核。微核同主核一样，是由DNA物质所组成。现已证实，微核率同外界作用因子的剂量呈线性正比关系。因此，微核检测技术已广泛应用在辐射防护、损伤，化学诱变剂研究和新药、保健食品的毒理实验中。
微核的形成需要经过一次细胞分裂。有丝分裂阻断法微核检测技术是利用一定浓度的细胞松弛素B阻断淋巴细胞细胞质的分裂而不影响细胞核的分裂，故在淋巴细胞培养过程中加入细胞松弛素B，使经过一次分裂的淋巴细胞呈双核，选择这部分细胞进行微核计数而提高了实验的敏感性。同时也成为检测致突变、致癌、致畸物质对机体遗传效应的一种重要手段。
【实验准备】
1、试剂：已配好的营养液(20％小牛血清+80％RPMI—1640+PHA)、100μg／mL浓度的细胞松弛素B、0.075moL／L KCl、甲醇—冰醋酸固定液(3:1)、Gierma染液、香柏油、二甲苯。
2、器材：超净工作台、光学显微镜(附照相设备)、隔水式恒温培养箱、离心机、冰箱、高压蒸汽消毒锅、鼓风干燥箱、无菌正压滤器、分析天平(感量1／10毫克)、架盘天平、链霉素培养瓶及瓶塞、肝素小瓶及瓶塞(取血用)、10mL吸管、直头小吸管、5mL刻度离心管、2mL或5mL一次性注射器、量筒、烧杯、搪瓷盆、搪瓷盘、试管架、片盘、片盒、止血带、棉签、大吸球、小
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吸头、pH试纸、废液缸、解剖剪刀、镊子、记号笔、4C预冷的载玻片、酒精灯、火柴、染色缸或染色玻璃板和擦镜纸等。
【实验材料】
肝素抗凝的正常人静脉血。
【实验内容、方法】 一、血培养
1、取静脉血0.5mL～lmL注入两个含5mL培养液的培养瓶中，置370C温箱培养。为了增加微核率便于实验观察，在血培养前正常人静脉血可经60Co照射。
2、细胞培养至40～42小时，培养瓶中加入100μg／mL的细胞松弛素B 0.3mL/瓶(终浓度：6μg/mL)，继续培养30小时。即培养至70～72小时收获细胞。
二、制片
1、将培养物移至5mL离心管，以1000r／min离心10分钟，弃上清液，留底物，加入3mL预温(370C)的0.075mol／L KCl和2mL固定液(甲醇:冰醋酸=3:1)混匀。
2、混匀后，以1000r／min离心10分钟，弃上清液，加4Ll固定液吹匀，室温固定10分钟，离心。再重复一次。
3、弃上清液，留底物，加0.5mL固定液，吹打均匀，滴片，空气干燥。 4、Giemsa染液扣染20分钟，自来水冲片，空气干燥，显微镜观察。 三、微核观察、分析及计数
首先用低倍镜观察选择染色和细胞分散好的区域，换高倍镜或油镜观察计数。一般情况下，计数1000个胞浆完整的双核淋巴细胞(每瓶计数500个)，经60Co照射过的淋巴细胞微核率明显高于未照射过的细胞。所计数的微核要求与主核完全脱离，多呈圆形，边缘光滑，着色与主核一致，小于主核的1/3。一个细胞中，不论出现几个微核，均按一个细胞计数。
【注意事项】
在微核标本的制备过程中，动作要轻，离心速度要准确，以免细胞破碎，微核丢失。
【作业与思考】
1、随机观察500～1000个细胞并计算微核细胞率。 2、简单叙述微核的形成机理及微核检测的实用价值。
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