文库片段 25μL
Total 130μL 放入PCR仪中，按以下循环进行： 95℃ 5min 95℃ 15s
58℃ 15s 8个循环 70℃ 1min 4℃ hold
6.2 扩增产物纯化
1）体系中加入195μL Agencourt AMpure XP Reagent 2）上下震荡5次，瞬时离心后室温放置5min
3）将离心管放置于DynaMag-2磁力架3min，至溶液澄清，小心去除上清，离心管保持放置在磁力架上
4）离心管放置于磁力架上不移动，配置新的500μL 70%乙醇，加入，30s后，盖上盖子颠倒混匀2次，放回磁力架至溶液澄清后，小心除去上清 5）重复第四步
6）瞬时离心后，放置于磁力架上，用20μL墙头小心吸去多余的液体 7）将离心管留在磁力架上，室温风干不超过5min
8）取下离心管，加入20μL Low TE缓冲液，盖上盖子，上下颠倒混匀5次，旋窝震荡10s，充分混合
9）瞬时离心后，将离心管放于磁力架上至少1min，溶液澄清后，将上清移入一支新的1.5mL EP管中（不可吸到磁珠）
10）将转移的离心管放置到磁力架上至少1min，将上清液小心转移到一支新的1.5mL离心管中
7.Agilent Test & Qubit Qualify
片段大小在200bp左右，片段浓度不低于1μL/mL
8.Ion OneTouch
在Ion OneTouch仪上使用Ion OneTouch 200 Template Kit完成文库片段与微珠的连接、乳液PCR、微珠富集以及芯片上样等操作，完成测序芯片的准备。 9.上机测序
使用Ion PGM进行测序。