在该两种溶液中未引起光谱变化，测定两种溶液的吸收度差值（ΔA值），根据ΔA与被测物浓度C的线性关系进行定量测定。
应用条件：必须使被测物在两种溶液中以不同的化学形式存在，且两种化学形式的吸收光谱应有显著差异。根据被测物理化性质，可选择不同的处理方法，除酸、碱外，还可用缓冲液、氧化剂等。但应使被测物在一种溶液中以一种形式存在，光谱纯度不低于99%。
2、双波长法：主要用于二元混合物或浑浊样品的测定。 原理：在?测处：A测= A样＋A杂
在?参处：A参=A’样＋A’杂
⊿A = A测—A参 =（A样＋A杂）—（A’样＋A’杂） 因为：A杂= A’杂
所以： ⊿A= A样 —A’样，与干扰物无关。 应用条件：
?测——被测物吸收峰附近
?参——干扰物在?测处的等吸收点，即干扰物在此两波长处A值相等 3、导数光谱法
原理：如果干扰吸收随波长呈线性时，可用直线方程表示 A混=E测·C测·L＋a＋bλ，对上述公式求导：dA混/dλ=dE测/dλ·C测·L＋b，干扰物质的吸收由随波长呈线性变成了常数。
对于非线性干扰，可近似地用二次曲线表示A=E·C·L+t+uλ+wλ2，对上式求二阶导数，可使杂质干扰的二阶曲线t+uλ+wλ2变成常数w，从而消除干扰。 应用条件：根据干扰物质的吸收光谱图形，选择导数阶数
七、免疫分析的基本原理、基本条件是什么？常用免疫分析有哪几种？相互间区别在哪些方面？
免疫分析的基本原理是抗原-抗体的结合反应，当抗原遇到其相应的特异抗体时产生一系列的抗原-抗体反应，形成抗原-抗体结合物。
基本条件：特异性抗体、标记抗原、未标记抗原（即标准品）。
常用免疫分析有：放射免疫分析法,酶免疫分析法,化学发光免疫分析法,荧光免疫分析法。
区别：标记物不同，由此采用的方法也不同。
1、放射免疫分析是放射性同位素测定法与免疫反应基本原理相结合的一种同位素分析技术。该法具有灵敏度高、特异性强、标记物容易制备以及放射性强度容易检测等优点, 特别适合复杂样品中微量或痕量物质的分析。 2、酶免疫分析的基本原理是在抗体或抗原分子上连接酶分子, 进行免疫反应, 免疫复合物上的酶将特定的底物转化为特定的颜色, 用分光光度计测定, 由颜色的深浅确定待测物的量, 其催化底物可与核素一样起到信息放大作用, 具有很高的灵敏度, 检测下限可达到ng甚至pg水平, 有效期大大超过了125 I标记物, 而且能减少放射性废物。
3、化学发光免疫分析法：所需时间短、灵敏度高、线性范围宽、对环境无污染, 荧光免疫分析是以荧光物质作为标记物与待测药物结合, 所形成的荧光标记药物能与抗体发生免疫反应, 引起荧光强度发生变化的一种分析方法。
八、测定药物与蛋白质结合率的意义何在？测定时需注意什么问题？
药物血浆蛋白结合率一般是指在治疗量时药物结合的百分率，它是药物代谢动力学的重要参数之一，是新药临床评价不可缺少的指标。它影响药物在体内的分布、代谢与排泄，更重要的是它与药物的药理作用强度密切相关。血浆蛋白结合率高的药物，即使有高的血药浓度，而发挥作用的游离药物的浓度并不高，药理作用就不一定强。因此，若没有血浆蛋白结合方面的资料，就不可能评价血药浓度的真实意义。
影响药物血浆蛋白结合率的主要因素有：药物的化学结构，血浆蛋白含量高低，某些生理，病理因素，合并用药。物与血浆蛋白结合是疏松的和可逆的，按质量作用定律经常处于动态平衡状态。结合率可受药物浓度、并用其他药物以及病人的生理、病理而改变。因此，测定时需要注意以上问题。
九、简述生物利用度与生物等效性的概念和实验方法。
生物利用度（bioavailability，F）是指药物被机体吸收进入体循环的相对量和速率。
生物等效性（bioequivalency , BE ）是指一种药物的不同制剂在相同实验条件下，给予相同的剂量，其吸收速度与程度没有明显差别。 实验方法：
1、参数tm、Cm、AUC是三项基本参数。Tm用于评价吸收速度。Cm、AUC→F用
于评价程度，要测准AUC，需测定7t1/2。
2、实验安排：受试者应随机分组，经健康检查，进行交叉实验消除个体差异，数据才有可比性。
3、取样点间隔和数量： 预试验大概求出峰值，再设计取样时间
4、分析体液的选择：血液最常用，k尿液：取样容易，但不可能获得吸收瞬
时速度，且尿中常含大量代谢产物，所以药物主要以原形从尿排出者才适用。否则若线性代谢可测代谢物，另外还有唾液。
5、研究对象人体实验结果是最权威的资料，新药审批要求人，18-24例，但
也常用动物狗、猴、猪较接近人，家兔消化道生理与人相差大。
十、简述半衰期、表观分布容积、清除率、药-时曲线、AUC、稳态血药浓度、生物利用度的概念和含义。
消除半衰期:血药浓度下降一半所需时间，是决定给药间隔时间的重要参数之一。 表观分布容积（Vd）:是指血药浓度与体内药物量间的一个比值，Vd=A/C=体内药
量/血药浓度。可反映药物分布的广泛程度或药物与组织结合的程度。
清除率(Cl):即单位时间内多少容积血浆中的药物被消除干净。
药-时效曲线: 以横座标为给药后时间，纵坐标为药物效应，则药后产生的药效
随时间的变化的关系（时效关系）绘制出的曲线。
AUC:代表药物的生物利用度（药物活性成分从制剂释放吸收进入全身循环的
程度和速度）,AUC大则生物利用度高，反之则低。
稳态血药浓度:药物在连续恒速给药（如静脉输注）或分次恒量给药的过程中，
血药浓度会逐渐增高， 经4～5个半衰期可达稳定而有效的血药浓度，此时药物吸收速度与消除速度达到平衡，血药浓度相对稳定在一定水平，这时的血药浓度称为稳态血药浓度，也称坪值。
生物利用度：药物吸收速度与程度的一种量度。可药时曲线下面积AUC计算。