表4:在化合物或参照物与人肝细胞培养72小时后,mRNA表达水平的变化
Enzyme Isoform Donor 1 1A2 2B6 3A4 Omeprazole Phenobarbital Rifampicin 22.71 17.22 11.79 Fold of Change* Donor 2 11.04 4.42 12.24 Donor 3 8.26 10.44 18.87 Mean 14.01 10.69 14.30 RSD 0.55 0.60 0.28 *Fold of Change = 2-ΔΔCT N/A: Not Acquired.
3.3在化合物或参照物与人肝细胞培养72小时后,人肝细胞的存活率
在化合物或参照物与人肝细胞培养72小时后,通过CytoTox-Glo?试剂盒检测细胞内特异性酶的释放来表征细胞膜的完整性,进而检测细胞的存活率。试验结果见表5。
表5:在化合物或参照物与人肝细胞培养72小时后,人肝细胞的存活率
Sample Name DMSO only Omeprazole Phenobarbital Rifampicin Concentration (μM) - 25 750 25 Donor 1 88.43 91.38 91.06 92.52 Cell Viability (%) Donor 2 92.93 90.08 92.06 89.26
Donor 3 88.64 94.99 87.57 93.63 Mean 90.00 92.15 90.23 91.80 RSD 0.03 0.03 0.03 0.02 6/7
4. 结论:
4.1 在参照物与人肝细胞培养72小时后,CYP1A2的参照物Omeprazole,CYP2B6的参照物Phenobarbital和CYP3A4的参照物Rifampicin,在酶活和mRNA的水平上均表现出明显的增加。在CYP1A2方面,Omeprazole提高了17倍的酶活及14倍的mRNA的表达水平。在CYP3A4方面,Rifampicin提高了8倍的酶活及14倍的mRNA的表达水平。在CYP2B6方面,Phenobarbital提高了48倍的酶活及10倍的mRNA的表达水平。
4.2 HS-25在3个测试浓度下,在CYP1A2,CYP2B6,及CYP3A4方面,并未表现出对酶活或mRNA表达的提高的作用
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