紫色, 甚至紫红色。 2.2加碘液还是加斐林试剂?
2.2.1淀粉酶对淀粉和蔗糖水解的作用
淀粉和蔗糖为非还原性糖, 它们在酶的作用下, 都能水解成还原性糖, 还原性糖能与斐林试剂发生氧化还原反应, 生成砖红色的氧化亚铜沉淀。淀粉酶具有专一性,只作用于淀粉水解,却不能催化蔗糖水解。那么可不可以使用淀粉遇碘变蓝这一特性来鉴定淀粉水解了而蔗糖没有水解?
此类实验中底物用淀粉和蔗糖做对照,不仅要证明淀粉酶能催化淀粉水解,还要证明淀粉酶不能催化蔗糖水解[2]。用碘液只能检验淀粉的存在, 从而证明淀粉酶能否催化淀粉水解, 但是却不能证明蔗糖是否被水解。用斐林试剂能够检验淀粉和蔗糖到底哪一个被水解, 亦或是都被水解, 进而证明淀粉酶是否只能催化特定的化学反应。所以此类实验只能用斐林试剂检测[4]。 2.2.2不同温度条件下淀粉酶的活性
由于实验探索在不同温度条件下淀粉酶催化淀粉的情况,实验前后应保持温度不变,要用碘液来检验淀粉的有无,不能用斐林试剂来检验是否生成了还原性糖( 麦芽糖和葡萄糖) ,因为用斐林试剂检验还原性糖要加热,从而改变了反应进程中温度的一致性。
2.2.3 PH值对淀粉酶活性的影响
实验证明酸性、中性、碱性条件下淀粉酶的活性的变化, 通过淀粉酶催化淀粉水解是否进行来证明。用碘液检验淀粉是否存在,若在淀粉存在的条件下,则水解反应没有进行, 则说明此条件下酶失去活性; 也可以用斐林试剂来检验是否生成了还原性糖,有还原性糖生成, 则进行了水解反应, 以此证明淀粉酶在此条件下具有活性。
2.3为什么斐林试剂必须现配现用而班氏试剂可以长期保存?
斐林试剂甲和斐林试剂乙可强烈产生Cu(OH)2,Cu(OH)2很容易沉淀析出,因此斐林试剂一般为现用现配;而班氏试剂是斐林溶液的改良试剂,它虽然与醛或醛(酮)糖反应也生成Cu2O砖红色沉淀,但是其配方中的柠檬酸钠-碳酸钠为一对缓冲物质,产生的OH-数量有限,与CuSO4溶液混合后产生的浓度相对较低,不易析出,因此该试剂可长期保存。
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2.4在使用双缩脲试剂时,为什么先加A液后加B液?为什么只能加入B液3至4滴?
双缩脲试剂A:氢氧化钠的质量分数为0.1 g/mL的水溶液;双缩脲试剂B:硫酸铜的质量分数为0.01 g/mL的水溶液。
先加入试剂A,制造碱性环境,只有在碱性环境下蛋白质中的肽键才容易于Cu2+发生颜色反应。同时,若加入过量的双缩脲试剂B液,硫酸铜在碱性溶液中生成大量的Cu(OH)2沉淀,遮蔽实验中产生的紫色,影响观察效果。 2.5为什么碱性染料要使用酸性物质配制?
龙胆紫和醋酸洋红都是碱性染料。而实验用的龙胆紫和醋酸洋红溶液,却都是用醋酸溶液配制的。其主要原因有两个:一是为了染色物能方便地进入细胞内,又不会发生细胞膨胀。因为水和酒精这两种溶剂进入细胞的速度是很快的,容易引起细胞膨胀破裂。第二是因为洋红这类碱性染色剂溶于碱性溶液时,能使细胞质和细胞核都染色,只是细胞核较浓些,溶于酸性溶液(如醋酸)时,对染色质有高度的亲合力,对细胞质着色很浅。在煮沸的45%醋酸中加洋红使之饱和,再加入微量的铁离子,配制成的醋酸洋红溶液就能将核或染色体染成红色。如果用1%龙胆紫溶液对根尖进行染色,细胞核内都被染成深紫色,显微镜下难以清晰地观察到有丝分裂各期细胞和染色体行为的变化。在1%龙胆紫溶液中滴加少量10%醋酸至溶液呈鲜亮的紫色为最佳。加入10%醋酸目的是加强对细胞核和染色体的选择性着色,以避免核内都被染成一片深紫色。用这种方法配制的染色剂可长久保存,溶液不易产生沉淀。
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参考文献:
[1] 赵玉柱. 斐林试剂与双缩脲试剂的比较[J]. 生物学通报. 2011(07) Chao Yu - chu. The Fehling reagent biuret reagents [J]. Biological Bulletin 2011 (07)
[2] 王升友. 斐林试剂与双缩脲试剂的使用释疑[J]. 中学生物学 , 2003,(03) Friends of Wang Sheng. The Fehling reagent Biuret reagent use doubts [J]. Secondary school biology, 2003, (03)
[3] 王玉龙. 斐林试剂和班氏糖鉴定试剂[J]. 中学生物教学 , 2005,(12) Settle. Fehling reagent and Ban's sugar identification reagents [J]. Biology teaching in secondary schools, 2005, (12)
[4] 刘向华. 用“碘液”还是“斐林试剂”[J]. 生物学教学 , 2010,(08) Liu Xianghua. \
[5] 刘勋. 高中生物实验中常用的反应剂和染色剂[J]. 实验教学与仪器 , 2006,(04) Liu Xun. The reaction agent commonly used in high school biology experiment and colorants [J]. Experimental teaching instrument, 2006, (04)
[6] 蒋鹏. 中学生物实验中常用染色剂简介[J]. 生物学教学 , 1995,(02) Jiang Peng commonly used in high school biology experiment stain Profile [J]. Biology teaching, 1995, (02)
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