《天然药物化学实验讲义》(8)

2019-03-04 12:35

95%乙醇10ml溶解再供试验用。

2.鉴别试验:

(1)三氯化铁冰醋酸反应(Keller-Kiliani反应):取醇提液或经处理后的CHCl3或醇液1ml,水浴上蒸干,残渣溶于冰醋酸2ml中,加入1tCl3乙醇液1滴,混合均匀,倾入干燥小试管中,再沿管壁缓慢加入等体积浓硫酸,静置,二液交界处显棕色(苷元),渐变为浅绿,兰色,最后上面醋酸层全呈兰色或兰绿色(?-去氧糖)。

(2)碱性3.5-二硝基苯甲酸反应(Kedde反应):取1ml醇浸提液,加入碱性3.5-二硝苯甲酸试剂3~4滴,产和红色或红紫色反应。

(3)亚硝酰铁氰化钠反应(Legal反应):取1ml醇浸提液或经处理后的CHCl3或醇液在水浴上蒸干,用1ml吡淀溶解残渣,加入0.3%亚硝酰铁氰化钠溶液4~5滴,混匀,再加入NaOH饱和乙醇液1—2滴,是否呈现红色(若结果不明显可另一取一份供试液如上操作,最后加NaOH饱和乙醇液0—5ml,观察二液交界面有无红色)。

(4)碱性苦味酸(Baljet反应)

取样品醇液1ml,加入碱性苦味酸试剂(苦味酸饱和水液与5%NaOH水液等量混合)数滴,呈现橙或橙红色。

(五)皂苷的鉴别 1.检品溶液的制备:

1)取皂角碎块1g于大试管(或小烧杯)中,加蒸馏水15ml,于30~90°水浴上浸渍15分钟后过滤,滤液供鉴别用。

2)取薯蓣碎块0.5g加上法同样制备得薯蓣水浸液。

3)取薯蓣碎块0.5g于大试管或小锥形瓶中加95%乙醇10ml于水浴上温浸15分钟,滤液供鉴别。

2.鉴别试验:

(1)溶血试验:取滤纸片一小块,于小心处滴加皂角浸液一滴,待干后于同处再滴加一滴,如是反复操作至滴加数滴,干燥后无喷雾血球试液(取牛血、羊血或兔血一份,用玻棒或棉签搅和,除去凝集的血蛋白,加pH7.4磷酸盐缓冲液一份稀释即得),数分钟后观察

在红色的背底中是否出现无红色的黄色(或透明)斑点(中心处皂解浸液原点)。(本反应亦可在试管中进行,血球试液中草药浸液中的皂苷溶解后,血球液由浑浊变为澄明。此外还可在载玻片上进行,并在显微镜下观察血球破裂溶解前后的状况)。

(2)泡沫试验:薯蓣浸液,皂角浸液各2ml,分别置于试管中。用力振摇一分钟后放置,在10分钟内观察二管是否都有持久性泡沫产生?

(3)醋酐浓硫酸试验(Liebermann-Burchard反应),皂角浸液5ml,于蒸发皿中在水浴上蒸干,加入1ml醋酐使其溶解,滴于干燥比色盘中,从边沿缓缓滴加浓硫酸1滴,观察颜色变化。

另取薯蓣浸液5ml,置于蒸发皿中,在水浴上蒸干,加入1ml醋酐溶液,并倾入比色盘中,(试管)沿管壁加入几滴浓硫酸,观察界面间是否有紫红色环产生?

(4)氯仿—浓硫酸试验(Salkowski反应):取薯蓣醇浸液2ml,在水浴上蒸干,有氯仿1ml溶解,转入干燥小试管中,沿壁小心加浓硫酸1ml,氯仿层显红或兰色,硫酸层有绿色荧光,示含甾体皂苷。

(六)香豆精苷的鉴别 1.检品溶液的制备:

取秦皮2克,加入乙醇20ml,在水浴上回流10分钟,趁热过滤,滤液供鉴别用。 2.鉴别试验:

(1)内酯化合物的开环与闭环反应:取2ml乙醇浸出液,加1—2ml 1% NaOH,于沸水浴中煮沸3分钟,冷却后加新配制的重氮化试剂1~2滴,显红色。

(2)肟异羟酯酸铁试验:取香豆素少许,加酒精1ml溶解加6滴盐酸羟胺的饱和乙醇液混匀后加入6滴KOH的饱和乙醇液,使其显强碱性再转入试管中加热10分钟左右(有气泡产生),冷却加5%盐酸使呈弱酸性(Ph6左右),倾入比色盘或蒸发皿中,沿器壁滴10tCl3溶液,约半分钟后紫色出现或加深(后消失)。(此反应试酯、内酯、香豆精及其苷类。但用中草药浸液试验反应结果不太明显)。

(七)氰苷的鉴别

取苦杏仁4~5粒,研碎,置50ml锥形瓶中加入3ml。

5%硫酸溶液,充分混合,塞好,进行以下(1)、(2)反应。

(1)苦味酸钠试验:取滤纸条先滴加饱和苦味酸液侵润,稍干后,再滴加10%碳酸钠1~2滴润湿,干后,悬于上述锥形瓶中,在水浴上加热10分钟,滤纸渐变为橙色或砖红色。

(2)取滤纸条先滴加3~4滴愈创木树酯醇溶液润湿,干后,再滴加1%硫酸钠液3~4滴润湿后,悬于同一锥形瓶中,放置,滤纸条渐变为鲜兰色(放置过入色渐褪)。

(3)亚铁氰化铁反应(普鲁士兰反应):另取苦仁一粒研碎,放入试管中,加水1~2滴润湿(切勿过量),立即用已被10%NaOH试剂1滴湿润的滤纸条悬于管口置50℃水浴上约10分钟,将滤纸取出,于滤纸上加10tSO4液1滴,加10%HCl1~2滴及1tCl3,试液1滴即显兰色。

四、挥发油的定性鉴别 1.外观性状:

(1)取各种挥发油(松节油、薄荷油、丁香油、陈皮油及桂皮油)观察其色泽,是否有特殊香气,及辛辣烧灼味感。

(2)挥发性:取滤纸屑一小块,滴加薄荷油一滴,放置2小时或微热后观察滤纸上有无清晰的油迹(与菜油作对照实验)。

(3)pH检查:(检游离酸或酚类)。

取样品一滴加乙醇5滴,以预先用蒸馏水湿润的广泛pH试纸进行检查,如显酸性,示有游离的酸或酚类化合物,剩下的样品乙醇液供下面(7)(8)试验用。

(4)FeCl3反应(检酚类):

取样品一滴,溶于1ml乙醇中,加入1%得FeCL3醇液1~2滴,如显蓝紫或绿色,示有酚类。

(5)苯肼试验(检酮、醛类)

取2,4—二硝苯肼试液0.5~1ml,加1滴样品的无醛醇溶液,用力振摇,如有酮醛化合物,应析出黄一橙红色沉淀,如无反应,可放置15min后再观察之。

(6)荧光素试验法:

将样品乙醇液滴在滤纸上,喷酒0.05%荧光素水溶液,然后趁湿将纸片暴露在

5%Br2/Col4蒸汽中,含有双键的萜类(如挥发油)呈黄色;背景很快转变为浅红色。

(7)香荚醛——浓硫酸试验:

取挥发油乙醇液一滴于滤纸上,滴以新配制的0.5%香荚醛的浓硫酸乙酸液,呈黄色、棕色、红色或兰色反应。

五、鞣质类化合物的鉴别 1.检品溶液的制备:

取五倍子(含可水解鞣质),儿茶(含缩合鞣质),没食子酸(鞣质水解产生伪鞣质)少量(约0.1克)分别置大试管中,加蒸馏水约10ml,加热煮沸,过滤,滤液作以下试验:

2.鞣质的一般反应(鞣质与伪鞣技的区别鉴定)

(1)感观试验:取制备的鞣质和伪鞣质溶液,尝其味,并以石蕊试纸检查溶液是否呈酸性反应。

(2)三氯化铁反应:取制备的鞣质溶液(五倍子溶液或儿茶溶液)及伪鞣溶液(食子酸溶液)各1~2ml ,分别加入三氯化铁试液,鞣质产生绿色或兰黑色反应或沉淀;伪鞣质产生兰色反应。

(3)沉淀蛋白反应:取鞣技溶液及伪鞣质溶液各1~2ml,分别入明胶溶液数滴,鞣技立刻产生沉淀反应。

(4)生物碱反应:取鞣质溶液及伪鞣质溶液各1~2ml,分别滴加0.1%咖啡碱水溶液,鞣质液产生沉淀反应,伪鞣质不产生沉淀反应。

3.可水解鞣和缩合鞣质的区别鉴定

(1)鞣红反应:取五倍子浸液(含可水解鞣质),儿茶浸液(含缩合鞣质)各2ml,分别加盐酸0.5ml,加热煮沸30分钟左右放冷。可水解鞣质不发生沉淀,缩合鞣质有红色沉淀产生。

(2)三氯化铁反应:取五倍子浸液及儿茶浸流各1~2ml,分别加入三氯化铁试液数滴,可水解鞣质显兰色或黑兰色反应,缩合鞣质显黑绿色反应。

(3)溴水反应:取五倍子浸液用儿浸液各1~2ml,分别加入溴水数滴,可水解鞋帽质不产生沉淀反应,缩合鞣质产生沉淀。

(4)石灰水反应:取五倍子浸液及儿茶浸液各1~2ml,分别加入新制石灰水数滴,可水解鞣质显青灰色沉淀,缩合鞣质显棕色沉淀。

(5)醋酸溶液中与醋酸铅反应:取五倍子浸液及儿茶浸液各1~2ml,分别加醋酸液数滴,摇匀后再分别滴加醋酸铅溶液数滴,可水解鞣质产生絮状沉淀,缩合鞣质无沉淀产生。


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