公猪采精
5、猪人工授精实验室操作规范
人工授精实验室工作和人工授精操作一样，工作人员必须经过培训，并具有严格按照操作规程操作的素质，确保精子不受到危害，并能良好地进行保存。确保从实验室送出的每一份精液输精的可靠性和安全性。
人工授精实验室是进行稀释液的配制、采精用品的准备、精液品质检查、精液的稀释与保存、输精前准备等工作的场所，为了生产出优质的符合输精要求的精液，一定把好质量关，保证从实验室送出的每一袋精液的活力不低于0.6，72小时内活力不受影响。
1.实验室要求整洁、干净、卫生，每周彻底清洁一次；
2.非实验室工作人员在正常情况下不准进入实验室，采精员也不准进入实验室，如采精员同时兼任实验室工作，则每次进入实验室时要更换衣、鞋和洗手；
3.实验室工作人员每次进入实验室要更换衣、鞋，洗手，一般情况下实验室应有外间作为缓冲间，并在此更换衣、鞋；
4.各种电器设备应按其要求选择适当插座，除冰箱、精液保存用的恒温冰箱外，一般电器要求人走电断，干燥箱无人值守时，设定温度不应高于80℃，连续通电时间在3个小时以内；要求接地的电器均应安装接地线；
5.物品、器皿的清洗、消毒方法：所有接触用于输精的精液的器皿（除一次性用品外）应用对皮肤无危害性的易洗涤的清洁剂清洗，并用自来水冲净，再用蒸馏水冲洗三至四遍，空干水分。玻璃用品干燥温度为80～150℃。多次性输精器使用后，立即用清水冲洗，不得使用热水和任何洗涤剂，冲洗后，再用蒸馏水冲洗，最后用75%的乙醇冲洗，然后放入消毒柜中80～100℃消毒1小时。
6.稀释液的配制、精液检查、稀释、分装应按照人工授精操作规程进行。 7.所有接触精液的用品必须是干燥的，因为水分（低渗液）可杀死精子。 8.实验室仪器设备应保持清洁卫生：实验室内使用的仪器设备，如显微镜、干燥箱、水浴锅、17℃冰箱、37℃恒温板、电子天平等，必须保持清洁卫生，显微镜头每2周应用蒸馏水浸泡擦洗一遍，保持清洁。恒温冰箱内部应每月用软布擦拭一遍，以防滋生霉菌。
9.作为采精室与实验室之间的传递口的窗只有在传递物品时才能开启使用，并尽量缩短开启时间。
10．实验室地板、实验台保持干净清洁，每天清洁一至二次。
11.下班离开实验室前一定要检查电源、水龙头、窗是否关闭好，做到万无一失方可离开实验室，确保安全。
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6、公猪精液的质量评估
采精后应立即检查精液，没有必要每次对精子进行形态检查，但应对新公猪的最初几次射精进行形态检查。以后每个月检测一次形态。如果感觉这些工作专业性太强，可将精液样品送到相关的科研部 门进行精子形态检查。精液的常规检查包括精液的量、气味、色泽、活力和密度。
（1）精液的容量
通常一头公猪的射精量为150～250毫升，但范围可在50～500毫升之间。一般建议用电子秤称量精液的重量，由于猪的精液的比重为1.03接近于1，所以，1克精液的体积约等于1毫升。 将烧杯放入一张食品袋放在电子秤上取出食品袋后，放入装精液的袋子，显示置零 读数即精的克数
（2）气味
正常、纯净的精液只有一点腥膻味。气味异常的精液包括：（1）精液臊味
很大，精液可能受包皮液污染；（2）精液有臭味，则可能混有脓液。气味异常的精液必须废弃。
（3）色泽
猪的精液呈浅灰白色到浓乳白色（见右图），而公猪刚射出的浓份精液则呈奶油色（略偏黄）。异常精液有血精（呈红色）、脓精（呈绿色），均应废弃。
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（4）活力
活力是精液中前进运动的精子所占总精子数的百分比。
对精子活力评定，通常只能作估测，所以需要有一定经验的技术人员进行评定。显微镜载物台应在活力检查前预热到37～39℃，并把载玻片、盖玻片一起预热。用取样器取10或15ul精液（注意取样器的吸咀是一次性的，并用消毒纸巾擦净，再取样，以防污染精液），注在预热后的载玻片中间。并盖上盖玻片。盖盖玻片的方法是，先将盖玻片放在精液滴的左侧与载玻片形成一个角度，呈一个锐角，并向右移动盖玻片，盖玻片与精液接触时，再将盖玻片放下，这样可避免产生气泡，影响检查结果。盖上盖玻片可以在显微镜视野里看到一薄层的精子，视野清晰，避免因不同层精子的活力不同而使判断出现人为误差。
用100倍或400倍的显微镜来检测精子的活力，即判断视野中前进运动精子所占的比例。
活力5级评分方法是：
整个视野中有明显的大的运动波 很好 5分 出现一些运动波和精子成群运动 好 4分 出现成群运动 较好 3分
无成群运动，部分呈前进运动 一般 2分 只有蠕动 差 1分
无精子活动 0分
注：运动波是指精子成群运动时，推动液体运动形成的云雾状翻滚现象。 取精液滴在预温后的载玻片上 盖上盖玻片后，观察精液运动精子运动活泼可状况 形成运动波 对稀释保存的精液，在进行精子活力评估时，一般采用十级制评分。即估测
视野中前进运动精子的百分率，因为，稀释后的精液，精子的运动较容易看清，可根据前进运动精子和非前进运动精子的大致比例，来进行估计。例如，有70%的精子呈前进运动，则活力为0.7，以此类推。
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不论是原精液还是稀释保存的精液，如果在检查中精子的活力很差，应仔细检查每个环节，进行第二次检查，应注意吸咀、载玻片和盖玻片必须洁净，对精子无毒害，载玻片温度适宜。如果第二次检查仍很差，则精液必须废弃。
（5）精子的浓度（或密度）
精子的浓度是指单位体积精液所含的总精子数（通常为亿/ml）。 （1）血球计数板法浓度测定
精子的浓度可用血球计数板法进行测定：轻轻摇动精液，用微量移液器（取样器）取精液100微升，擦去外部精液，加入一次性试管中，用移液管吸取3%氯化钠溶液3.9毫升(即3900微升)加入精液中，混合均匀，原精液被稀释了40倍。
将血球计数板放在载物台上，加盖盖玻片，用取样器吸取25微升稀释后精液加入计数板与盖玻片之间的计算室中使计算室充满（见图）。放在显微镜下找到计算室，计数计算室内的总精子数，为了减少计数的工作量，可选择有代表性的五个中方格，如四角一中心，或斜对角线的五个方格（见图用红色框标记的中方格）计数精子。
为了避免计数精子时重复，应以精子的头数为准，对在格线上的精子，可依照数上不数下，数左不数右的原则，计数五个中方格中的总精子数。为计算室的一个中方格，在计数量，在右侧线和下端上的精子（为了识别，标记为白色）是不应进行计数的精子。
五个中方格总精子计数完后得出的结果，依下列公式进行计算原精子密度（此公式已被简化）：
精子密度（亿个/毫升）=五个中方格总精子数×0.02
血球计数板法是其它光学测定方法的基础，因为光学的度数是根据光学仪器的原理得出的，与精子密度并没有直接关系，必须有已知的密度值才能获得对照表。
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计数室的五个中方格 一 个中方格的精子（白色为不计数精子）
（2）分光光度计或精子密度计法
这种方法是采用光学仪器，根据精子浓度越高，透光率越低的原理进行精子浓度测定的。在440纳米可见光下，用加柠檬酸钠溶液的比色杯，按100%透过率作空白对照，然后在另一比色杯中加入等量的柠檬酸钠溶液，再加定量精液，混合均匀后，放入样本池，读出透光率读数。最后查精子密度查对表，查出精子浓度读数。有时提供的对照表是指稀释后精液的精子浓度，需根据稀释倍数，换算出原精液精子浓度。精子密度查对表是用先用血球计数板测出诺干个精液标准样本的精子浓度值，然后将其稀释成不同浓度梯度的样本，每个样本的精子浓度均可计算出，测出其透光率，然后制成透光率和精子浓度查对表。
（3）精子密度杯法
由郑州牧业工程高等专科学校张长兴老师发明的精子密度杯，可以很方便地进行猪精子密度的测定，而且设备简单，价格低廉。
将10毫升生理盐水加入精子密度杯，根据采集到精液的色泽，初步判断精子浓度的高低，可选择添加原精液0.5毫升、1毫升、2毫升任一个添加量，加入生理盐水中，对初学者来说，可不必选择原精液添加量，只需固定地添加1毫升量即可，只是测定值的精确度略低。用拇指压紧杯口，上下翻转4～5次， 然后在自然光或较强的光照下，将密度杯与眼呈水平，从上向下观察其读数值，再根据实际添加量，查对照表的相应的列，就可以查到原精液的精子浓度值。
（6）精子的形态观察（畸形率）
精子的形态观察主要是观察精子的畸形率，猪的精子畸形率不能超过20%，否则就必须废弃。
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