免疫组化标准操作规程
一、 实验目的：
蛋白物质的定性、定位检测。
二、 实验原理：
基于利用放射性核素和其他标记物（荧光素，酶，重金属离子等）作为示踪剂，通过免疫亲和（抗原-抗体特异性结合）和核酸杂交（碱基配对特异性连接）途径，在组织切片或细胞涂片上，原位显示生物大分子的动态变化而建立的一门染色技术。
三、 实验准备
材料：
移液器（P1ml，P200，Gilson）
吸头（10 ul ，100 ul ，1000 ul ，Axygen） 6cm、10cm培养皿（corning） EP管（1.5mL） 试剂：
胎牛血清(10099-141 Invitrogen) 1mol/L的TBS缓冲液
0.01 mol/L柠檬酸盐缓冲液（CB，pH6.0，1000ml）：柠檬酸三钠 3g，柠檬酸 0.4g 3% H2O2溶液 仪器：
通风橱，医用微波炉；
四、 操作流程
1）脱蜡前，应将组织芯片在60℃恒温箱中烘烤30分钟。 2）组织芯片置于二甲苯中浸泡15分钟； 3）更换二甲苯后再浸泡15分钟；
4）二甲苯：乙醇=1:1混液中浸泡10分钟； 5）无水乙醇中浸泡10分钟； 6）95%乙醇中浸泡10分钟； 7）85%乙醇中浸泡10分钟； 8）75%乙醇中浸泡10分钟； 9）蒸馏水中浸泡10分钟；
10）用蒸馏水或PBS配置新鲜的3%H2O2，室温封闭10分钟；
11）抗原修复 在微波炉里高火加热0.01M柠檬酸钠缓冲溶液（pH6.0）至沸腾后将组织芯片放入，低火维持20分钟；
12）自然冷却至室温后，置入蒸馏水中浸泡10分钟； 13）10%血清（TBS配制）封闭30分钟；
14）吸弃血清，勿洗加入对应的一抗孵育过夜； 15）回收一抗，TBS洗2遍，每次5分钟； 16）加入二抗，室温孵育60分钟；
17）TBS洗4遍，每次5分钟；
18）加入DAB染色，直到显浅黄色为止，放入蒸馏水中终止反应； 19）用苏木精30秒，清水漂洗7-8遍； 20）脱水封片75%乙醇中，浸置5分钟； 21）85%乙醇中浸泡5分钟； 22）95%乙醇中浸泡5分钟； 23）无水乙醇中浸泡5分钟；
24）二甲苯：乙醇=1:1混液中浸泡5分钟； 25）二甲苯后再浸泡5分钟；
26）更换二甲苯后再浸泡5分钟；
27）取出后，滴加30ul中性树胶，用盖玻片封片 28）晾干，观察结果。
五、 注意事项
1） 标记的时候使用铅笔，避免标记被有机溶剂清除
2） 柠檬酸钠溶液煮的时候注意火候的把握，煮开后，过几秒开小火维持 3） 抗体类型注意区别