五、消 化
实验29 消化道平滑肌的生理特性
【实验目的】 利用哺乳类动物离体小肠进行灌流，观察小肠平滑肌的一般生理特性以及内环境变化对收缩的影响。 【实验原理】 离体小肠如能置于相当于其内环境的灌流液中(哺乳类动物离体小肠采用台氏液)，仍能在一段时间内保持正常功能。可观察到小肠平滑肌的自律性收缩。当内环境变化时，这种收缩的形式和程度都会发生变化。 【实验动物】 家兔。 【器材和药品】 恒温平滑肌槽(或麦氏浴槽)、张力换能器、万能支架、螺旋夹、双凹夹、台氏液、无钙台氏液、O2球囊、肾上腺素(0.01%)、乙酰胆碱(0.01%)、阿托品、普萘洛尔、1mol/l NaOH、1mol/L HCl。 【操作步骤】
(1)准备恒温平滑肌槽：恒温平滑肌槽的主要部分是一个允许台氏液循环的一个带有侧管的玻璃管。该玻璃管置于恒温水浴中。水浴内温度恒定在38～39℃之间。用充满O2的球囊，经胶管缓慢地向浴槽底部通02。
(2)制备离体小肠标本：用木槌猛击兔头枕部，使其昏迷，打开腹腔，在胃与十二指肠交界处用线结扎，将与肠管相连的肠系膜沿肠缘剪去，在近胃侧剪断肠管，向下取出约20cm长的肠管。把离体肠管在4℃左右的台氏液中洗净，用注射器抽取台氏液冲洗肠腔，然后将肠管剪成2～3cm的小段，浸泡于4℃台氏液中备用。
(3)取一段制备好的肠段，两端用线结扎，一端系于浴槽内玻璃管的标本固定钩上，另一端系于张力换能器上，适当调节万能支架的高度，使肠段勿过紧或过松。注意勿与周围管壁接触。
(4)仪器调试：将张力换能器输入端插入生物信号记录分析系统。信号输入选肌张力，调节灵敏度，以能记出自动收缩曲线为好。 【观察项目】
(1)记录小肠平滑肌的自动收缩曲线。注意观察收缩的频率和收缩的幅度。 (2)在槽内加入0.01%肾上腺素1～2滴，观察小肠收缩有何变化。待作用出现后，立即用新鲜38℃台氏液冲洗，使小肠收缩恢复正常。
(3)加入0.01%乙酰胆碱1～2滴，作用出现后，迅速按上法冲洗。
(4)先加入0.01%阿托品2～4滴，2min后，再加入0.01%乙酰胆碱1～2滴，观察小肠活动情况，并与上一项进行比较。作用出现后立即进行冲洗。
(5)先加入普萘洛尔lmg，2min后，加0.01%肾上腺素1～2滴，观察小肠活动情况，并与第2项进行比较。迅速冲洗直至小肠运动恢复正常。
(6)加入1mol//L NaOH 2～3滴，观察小肠收缩情况，出现变化后立即冲洗使其恢复正常。
(7)加入1mol/L HCl 2～3滴，观察小肠收缩变化，冲洗肠段，使其恢复正常。 (8)用无钙台氏液冲洗小肠(尽量充分冲洗)，观察小肠收缩。
(9)用0.01%乙酰胆碱2～3滴滴入，观察小肠运动变化。如仍无变化，再用含钙台氏液冲洗，直至收缩恢复。
(10)再次加入0.01%乙酰胆碱，观察收缩是否加强。
(11)降低麦氏浴槽水浴温度至25℃，观察小肠收缩情况，再将温度升至38℃，观察小肠收缩情况。 【注意事项】
(1)兔先禁食一段时间，实验前1小时饲喂青菜，肠运动情况较好。
(2)每次加药液之前，准备好38℃的新鲜台氏液，效果出现后，立即进行充分冲洗。每次实验记录时，台氏液的液面须保持一致。
(3)上述加药量系参考值，可根据玻璃槽内台氏液的多少以及肠管的兴奋性变化而增减。
(4)通O2速度不宜太快，以看到单个气泡陆续出现为宜。不要因为O2的进入影响小肠运动的记录。 【思考题】
(1)离体小肠的运动和离体蛙心的收缩对环境所需条件有何不同? (2)Ca2+在小肠收缩中有何作用?
实验30胃肠运动的观察
【实验目的】 通过描记兔在体胃内压力的测定，了解胃的运动情况及其调节机制；同时可在胃肠表面滴加化学物质，以观察对胃肠运动的影响。
【实验原理】 胃肠平滑肌都有自动节律性。当其发生自发运动时可以出现胃肠压力的变化。可以以胃内压力为指标，观察胃的运动情况。在整体情况下，胃肠运动接受自主神经系统的控制和体液因素的影响。 【实验动物】 家兔。
【器材和药品】 兔手术台、哺乳类动物手术器械（见实验8）、刺激输出线、保护电极、压力换能器、带气囊的导尿管、注射器(20ml、5m1)、滴管、20%氨基甲酸乙酯(或3%戊巴比妥钠)、0.01%乙酰胆碱、0.01%肾上腺素、阿托品、生理盐水。
【操作步骤】 (1)称重、麻醉、固定：用3%戊巴比妥钠按lml/kg（或20%氨基甲酸乙酯5ml/kg）耳缘静脉注射麻醉，背位固定。
(2)颈部手术：插好气管插管，分离出左侧迷走神经，穿线备用。
图5-23 离体肠段灌流装置
(3)描记胃运动：将前端缚有小气囊的导尿管由口腔经食管插入胃内，随时注意兔呼吸变化，防止插入气管，一般插入约20cm即进胃内。将导尿管的另一端放入水中，没有气泡发生，家兔呼吸平稳，表示未误入气管。用三通管向气囊内打
入气体，使囊内压力上升到7～8mmHg，用压力换能器将气囊内压力输入生物信号记录分析系统。 (4)仪器调试：
①打开生物信号记录分析系统。
②输入信号的选择:“信号输入”→“通道1或者其他通道”“实验项目：压力”。
③根据信号图形适当调整放大倍数、扫描速度。
④刺激设置：连续串刺激、延时0ms、强度2.0V、波宽20ms、波间隔10ms、串长1个。
【观察项目】
(1)观察基础状态下胃运动波形。
(2)电刺激左侧迷走神经离中端，观察胃运动变化。
(3)耳缘静脉注射0.01%乙酰胆碱0.5ml，观察胃运动的变化。 (4)耳缘静脉注射0.01%肾上腺素0.3ml，观察胃运动变化。
(5)先静脉注射0.5～1.0mg阿托品，观察胃运动变化。再重复观察项目的(2)项和(3)项，观察结果有何不同。
(6)针刺家兔胫前结节下1cm处(相当于人的“足三里”位置)，轻度捻转，观察胃运动的变化。
(7)沿腹正中线切开皮肤，分离皮下组织，沿腹白线打开腹腔，充分暴露胃肠，直接观察胃和小肠的运动。注意胃的形状，紧张度，有无运动；小肠的运动形式，有无分节运动、蠕动。
(8)电刺激迷走神经离中端，观察胃和小肠运动的变化。
(9)直接在胃和小肠表面滴加0.01%乙酰胆碱，观察其运动变化。 (10)直接在胃和小肠表面滴加0.01%肾上腺素，观察胃肠运动变化。 (11)先静注阿托品0.5mg，再刺激迷走神经离中端、观察胃肠运动变化。 【注意事项】
(1)麻醉宜浅，随时用温热生理盐水保持胃肠表面湿润。
(2)每进行一项实验后，应等待胃运动基本恢复稳定，再进行下一项观察。 【思考题】
使用阿托品前后，刺激迷走神经离中端和注射乙酰胆碱的胃运动变化有何不同?机理为何?
实验31胆汁分泌的调节
【实验目的】 学习记录胆汁分泌量的方法，观察迷走神经和体液因素对胆汁分泌的影响。
【实验原理】 胆汁是由肝细胞分泌的。在非消化期，肝胆汁流入胆囊储存。消化期，肝胆汁直接进入十二指肠，同时胆囊胆汁也由于胆囊平滑肌的收缩而进入十二指肠。如用塑料引流管直接插入胆总管，可将进入十二指肠的肝胆汁和胆囊胆汁进行计量。从而观察神经体液因素对胆汁分泌和排出的影响。 【实验动物】 家兔。
【器材和药品】 兔手术台、哺乳类动物手术器械（见实验8）、记滴器、刺激输出线、保护电极、注射器(20ml、5ml、lml)、细塑料管、烧杯、生理盐水、3%戊巴比妥钠(或20%氨基甲酸乙酯)、促胰液素(自制)、胆盐、0.01%乙酰胆碱。 【操作步骤】
(1)称重、麻醉、固定：用3%戊巴比妥钠lml/kg（或20%氨基甲酸乙酯5ml/kg）施行耳缘静脉麻醉，背位固定于手术台上。
(2)颈部手术：沿颈正中线切开皮肤，分离皮下组织，插好气管插管，分离出左侧迷走神经，穿线备用。
(3)胆汁引流：沿剑突下腹正中线切开腹部皮肤，分离皮下组织，沿腹白线打开腹腔。沿胃幽门端找到十二指肠，在十二指肠背面可见一黄绿色较粗的肌性胆总管。仔细分离，避免出血，在胆总管下穿线备用。在靠近十二指肠端的胆总管处剪一斜切口，插入塑料管，用线结扎固定。插入塑料管后，立即可见绿色胆汁顺管流出。如果没有胆汁流出，则可能插到夹层，需取出重插。注意塑料管不要扭曲，应与胆总管相平行。将胆汁引流管插进记滴器。 (4)仪器调试：
①打开生物信号记录分析系统，将记滴器输入端插入生物信号记录分析系统，记滴器输出线与记滴装置连接并置于尿滴位置。 ②设置弹出活动窗口“记滴趋势图参数设置”。
④刺激设置：连续单刺激、延时10ms、强度2V、波宽1ms、波间隔10ms。 【观察项目】
(1)观察正常胆汁分泌数量（滴/min）。
(2)电刺激右侧迷走神经，观察胆汁分泌速度有何变化?
(3)静脉注射用生理盐水稀释一倍的胆汁5ml，观察胆汁分泌速度有何变化? (4)静脉注射0.01%乙酰胆碱0.5ml，观察胆汁分泌速度有何变化? (5)静脉注射自制促胰液素4～6ml，观察胆汁分泌速度有何变化? 【注意事项】
(1)手术操作轻柔，手术中注意止血。
(2)打开腹腔后用温热生理盐水纱布覆盖切口，并随时更换，以保持温度和湿润。 (3)自制促胰液素的方法，两端双结扎兔的十二指肠后取下十二指肠，将肠腔冲洗干净，重新扎好，注入0.5%HCl 50ml。放置2小时，纵向剪开肠壁，平铺在桌面上，刮下粘膜，并置研钵中研磨。将研成的组织匀浆倒入烧杯中，加10% NaOH中和至中性，并用滤纸过滤，滤液中即含有促胰液素，置冰箱中保存备用。 【思考题】
刺激迷走神经离中端可通过哪些机制影响胆汁的分泌?
六、泌 尿
实验32 尿生成的影响因素
【实验目的】 学习记录尿量的方法，观察神经体液因素对尿生成的影响。 【实验原理】 尿的生成是持续不断的。尿的生成包括肾小球的滤过，肾小管和集合管的重吸收、分泌和排泄等过程。肾小球的滤过作用受滤过膜的通透性、肾小球有效滤过压和肾小球血浆流量等因素的影响。肾小球和集合管重吸收受小管液溶质浓度和血液中血管升压素及肾素-血管紧张素-醛固酮系统等因素的影响。凡能影响上述各种因素者，均可影响尿的生成。 【实验对象】 家兔。
【器材和药品】 兔手术台、哺乳类动物手术器械、刺激输出线、动脉夹、动脉插管、酒精灯、试管夹、试管、输尿管插管、输液装置、记滴器、保护电极、注射器(2ml、20m1)、3%戊巴比妥钠(或20%氨基甲酸乙酯)、生理盐水、0.01%去甲肾上腺素、速尿、垂体后叶素、25%葡萄糖、斑氏试剂。 【操作步骤】
(1)麻醉固定：3%戊巴比妥钠lml/kg(或20%氨基甲酸乙酯5ml/kg)耳缘静脉注射。背位固定。在耳缘静脉用输液瓶缓慢输液(或用注射器通过三通管将头皮输液针插入耳缘静脉)，用动脉夹将头皮输液针固定在耳朵上。
(2)沿颈正中切开皮肤，分离皮下组织，插入气管插管。分离出双侧颈总动脉和迷走神经，穿线备用。
(3)将左颈总动脉接上压力换能器，输入1通道以记录血压。 (4)在耻骨联合上方，沿正中线作4cm的皮肤切口，沿腹白线剪开腹壁及腹膜(注意勿伤及腹腔脏器)，找到膀胱翻出体外，在膀胱底部辨认出左、右侧输尿管，钝性剥离、穿线，在靠近膀胱处将输尿管结扎，此时，输尿管将由于尿液不能顺利流到膀胱而充盈，用眼科剪剪一斜口，将塑料管插进输尿管，用线结扎固定。插管的另一端接至记滴器，记滴器进入2通道。 (5)仪器调试：
①打开生物信号记录分析系统。
②输入信号的选择:“信号输入”→通道1选“压力”，通道2选“计数”。 ③刺激设置：连续单刺激、强度3V、波宽1ms、波间隔10ms。 【观察项目】
(1)记录基础尿量和血压。
(2)静脉快速注入37℃生理盐水20ml，观察记录血压、尿量的改变。
(3)电刺激右侧迷走神经离中端5～10s左右，使动脉血压下降至50mmHg，观察血压和尿量的变化。
(4)静脉注射25%葡萄糖液5ml，观察血压和尿量的变化，注射前和注射后分别作尿糖定性实验。
(5)静脉注射0.01％去甲肾上腺素0.5ml，观察血压和尿量的变化。 (6)静脉注射速尿0.5ml(5mg/kg)观察血压和尿量变化。
(7)将输液瓶内液体减至10ml，加入5u垂体后叶素，缓慢滴注(8滴/min)，如血压升高则减慢速度，在血压不升高的前提下，观察尿量和血压的变化。
(8)分离一侧股动脉，插管放血，使动脉血压迅速下降，观察此时尿量随血压的变化。
(9)从输液瓶重输入37℃生理盐水以补充循环血量，观察动脉血压与尿量的变化情况。
观察项目 血压变化 尿量变化（滴/分） 基础尿量 尿糖定性（ ）
静脉快速注入37℃生理盐水20ml， 刺激右侧迷走神经离中端
静注25%葡萄糖液5ml 尿糖定性（ ） 静注0.01％去甲肾上腺素0.5ml 速尿0.5ml(5mg/kg) 静注垂体后叶素5u 股动脉放血20ml 静脉输液20ml 【注意事项】
(1)实验前给家兔多喂青菜，或灌水40～50ml，以增加基础尿量。 (2)手术轻柔，不要过度牵拉输尿管。
(3)插输尿管时，注意不要插入夹层，避免损伤组织造成出血。插管不要扭曲。