如何选择流式细胞仪测定常用的荧光染料
流式细胞仪测定常用的荧光染料有很多种,我们如何来选择流式细胞仪测定的常用荧光染料呢？ 首先要考虑，他们分子结构不同,激发光谱和发射光谱也不同,选择荧光染料时，必须依据流式细胞仪所配备的激光光源的发射光波长做为重点考虑。 发射光波长，如：氩离子气体激光管,它的发射光波488nm；
氦氖离子气体激光管发射光波长633nm；
488nm激光光源常用的荧光染料有FITC（异硫氰酸荧光素）； PE（藻红蛋白） PI（碘化丙啶） CY5（化青素） preCP(叶绿素蛋白)
ECD(藻红蛋白-得克萨斯红)等。 激发光和发射光波长，如下：
FITC PE PI ECD CY5 PreCP 激发光波长（nm） 488 488 488 488 488 488 发射光峰值（nm） 525（绿） 575（橙红） 630（橙红） 610（红） 675（深红） 675（深红）
流式细胞仪中常用的荧光染料光学特征以及需要的激光器
名 称 Ex波长(nm) Em波长(nm) 备 注 激光器 Hoechst 33342 355 Hoechst 33258 DAPI Indo-1 FITC R_PE PE_CY5 PE_CY5.5 PerCP 365 372 350 490 480 480 480 490 465 465 456 405 520 578 670 695 675 517 613 540 526 501 510 615 640 660 668 667 DNA染色 核酸标记 351nm 紫外激光器 细胞内钙离子标记 标记抗体 488nm 氩 离 子 线粒体标记 细胞内钙离子标记 内质网标记 激 光 器 Alexa Fluor 488 494 PE_Texas Red 480 Rhodamine 123 500 Fluo-3 DiOC6(3) YOYO-1 506 480 490 DNA染色 Propidium Iodide 530 Acridine Orange 490 APC 650 核酸标记 Alexa Fluor 647 650 CY5 650 标记抗体 633nm 氦氖激光器
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ml
荧光染料谱
染料名称 Excitation(nm) Emission(nm) 分子量 备注信息 Reactive and conjugated probes Hydroxycoumarin 325 386 33Succinimidyl ester 1 330 317 596 406 294 240 k NBD-X Maleimide Hydrazide Succinimidyl ester Succinimidyl ester Aminocoumarin 350 445 Methoxycoumarin 360 410 Cascade Blue (375);401 423 Pacific Blue 403 455 Pacific Orange Lucifer yellow 403 425 551 528 NBD 466 539 R-Phycoerythrin (PE) 480;565 578 480;565;6PE-Cy5 conjugates 50 480;565;7PE-Cy7 conjugates 43 480;565 490 490,675 670 aka Cychrome, R670, Tri-Color, Quantum Red 767 Red 613 PerCP TruRed 613 675 695 587 389 444 PE-Texas Red Peridinin chlorphyll protein PerCP-Cy5.5 conjugate FluorX 494 520 GE Healthcare Fluorescein 495 519 FITC; pH sensitive BODIPY-FL 503 512 TRITC 547 572 TRITC X-Rhodamine 570 576 54XRITC 8 Lissamine Rhodamine B 589 615 625 104 k Sulfonyl chloride 570 590 Texas Red Allophycocyanin (APC) APC-Cy7 conjugates 650 660 650;755 767 PharRed Alexa Fluor系列荧光染料 410 1028 702 643 700 714 724 1079 1250 792 820 QY 0.66 QY 0.69 QY 0.1 QY 0.79 QY 0.61 QY 0.92 Alexa Fluor 350 343 442 Alexa Fluor 405 401 421 Alexa Fluor 430 434 540 Alexa Fluor 488 499 519 Alexa Fluor 500 503 525 Alexa Fluor 514 517 542 Alexa Fluor 532 530 555 Alexa Fluor 546 561 572 Alexa Fluor 555 553 568 Alexa Fluor 568 579 603 Alexa Fluor 594 591 618 Alexa Fluor 610 610 629 12