测试效果
VIDAS ECO 可检测有动力与无动力的大肠杆菌0157。 沙门氏菌N群和部分枸橼酸杆菌可出现交叉凝集。
附录:培养基
改良胰酶大豆汤(mTSB)规格:1升
脱水胰酶大豆汤 30.0g 胆盐3号 1.5g 无水Na2HPO4 1.25g 酪蛋白水解物 10.0g 加1000ml蒸馏水,121℃高压灭菌15分钟。
对于日常食品,冷至室温,加2ml过滤除菌的盐酸吖啶黄酸水溶液,使终浓度为100μg/ml;对于其它食品,加入1ml过滤除菌的新生霉素(20mg/ml),使终浓度为20mg/l。 含头孢克肟和亚碲酸钾的麦康凯肉汤(CT-MAC)
按操作手册制备麦康凯肉汤(货号51015)。121℃高压灭菌15分钟。
每升肉汤中加入2.5mg亚碲酸钾(即250ml 1%的盐酸溶液,货号55501)和50mg过滤除菌的头孢克肟(即1ml 50mg/l的储备液)。
为避免非特异性干扰,建议使用专用的生物梅里埃麦康凯肉汤(货号51015)。
含头孢克肟和亚碲酸钾的山梨醇麦康凯琼脂(CT-SMAC)
按操作手册制备山梨醇麦康凯琼脂(SMAC)。121℃高压灭菌15分钟。冷至45-50℃,每升融化的琼脂中加入2.5mg亚碲酸钾(即250ml 1%的盐酸溶液,货号55501)和50mg过滤除菌的头孢克肟(即1ml 50mg/l的储备液)。
制备50mg/l的头孢克肟储备液
在100ml 100mmol/l的碳酸氢钠溶液(pH8.0)中溶解5mg Cefixim,过滤除菌并储存于 2-8℃。
参考文献
1. E. J. BOLTON, L. CROZIER, J.K. WILLIAMSON. Optimisation of methods for the isolation of E. coli O157 from beefburgers PHLS Microbiol. Diag ; 1995, 12 : 67-70.
2. CARTER A.O., BORCZYK A.A., CARLSON J.A.K., HARVEY B., HOCKIN J.C., KAMALI M.A.,
KRISHNAN C., LIOR H. A severe outbreak of Escherichia coli 0157:H7 associated hemorrhagic colitis in a nursing home. N. Engl. J. Med., 1987, 317, 1496-1500.
3. FIELDS P.I., BLOM K., HUGUES H.J., HELSEL L.O., FENG P., SWAMINATHAN B. Molecular characterization of the gene encoding H antigen in Escherichia coli and development of a PCR-restriction fragment length polymorphism test for identification of E. coli 0157:H7 and O157:NM. J. Clinical microbiol., 1997, 1066-1070.
4. HOCKIN J., LIOR H. Hemorrhagic colitis and haemolytic uremic syndrome caused by Escherichia coli O157 : H7 in Canada. Can. Dis. Weekly Rep. Health Welfare Can., 1987, 13, 203-204.
5. KARMALI M.A., STEELE B.T., PETRIC M., LIM C. Sporadic cases of hemolytic uremic syndrome associated with fecal cytotoxin and cytotoxin-producing Escherichia coli in stools. Lancet, 1983, vol.1, 619-620.
6. KNIGHT P. Hemorrhagic E. coli : the danger increases. ASM news, 1993, 59, 5.
7. PADHYE N.V., DOYLE M.P. Rapid procedure for detecting enterohemorrhagic E. coli 0157:H7 in food. Appl. Environ. Microbiol., 1991, 57, 2693-2698.
8. PUDDEN D., TUTTLE N., KORN D., CARLSON J., CARTER A., HOCKIN J. Hemorrhagic colitis in a nursing home-Ontario. Can. Dis. Weekly Rep., 1985, 11, 169-170.
9. RILEY L.W., REMIS R.S., HELGERSON D.S., McGEE H.B., WELLS J.G., DAVIS B.R., HERBERT R.J., OLCOTT E.S., JOHNSON L.M., HARGETT N.T., BLAKE P.A., COHEN M.L. Hemorrhagic colitis associated with a rare Escherichia coli serotype. N. Engl. J. Med., 1983, 308, 681-685.
10. ROBAEYS G., SURMONT I., LEMMENS P., COREMANS G., VANTRAPPEN G., VANDESPITTE J. Haemorrhagic colitis and verotoxin-producing Escherichia coli 0157 in Belgium. Lancet, 1987, vol.1,1495-1496.
11. SMITH H.R., ROWE B., CROSS R.J., FRY N. K., SCOTLAND S.M. Haemorrhagic colitis and verocytotoxinproducing Escherichia coli in England and Wales. Lancet, 1987, vol.1, 1062-1065.
SMAC 和CT-SMAC琼脂平板阳性结果确认
方法1 山梨醇阴性菌落
O157抗血清试验(测5个菌落)
凝集反应阳性 凝集反应阴性
检测5个山梨醇阳性的菌落
生化鉴定
(见方法2)
大肠杆菌 非大肠杆菌
H7抗血清凝集试验 结束
阴性反应
大肠杆菌O157:非H7
阳性反应 大肠杆菌O157:H7
产毒鉴定
SMAC 和CT-SMAC琼脂平板阳性结果确认 方法2
山梨醇阳性菌落
O157抗血清试验(测5个菌落)
产毒鉴定
凝集反应阳性
凝集反应阴性
生化鉴定
结束
非大肠杆菌 结束
大肠杆菌
产毒鉴定