微生物学---培养基的制作
? 牛肉汤培养基
1. 去掉筋膜及脂肪的新鲜牛肉,切成条、绞碎、按1000g牛肉加入DH2O 2000ml浸泡,
置冰箱过夜.
2. 次晨,将其煮沸半小时,并同时不断用不锈钢饭勺去掉脂肪及油汽（注意:不能用铁勺
以免Fe2+掉入汤中影响细菌生长）,静置15分钟,肉汤分层,将上清液吸出,沉渣过滤. 3. 于上述肉汤中加入蛋白胨10g每1000ml,NaCl 3g 每1000Ml,再煮沸3分钟,用
10mol/L的NaOH调节PH 7.2～7.6（实际应用中应调到处7.7～8.0 每12000ml 加入10mol/L 的NaOH调出浓度即大致为PH约为8 即每400ml加入1mlNaOH） 4. 再按2g每1000ml 加入K2HPO4（对肉汤的PH起缓冲作用）,煮沸150秒,静置30
分钟吸取上清液,沉淀过滤用1mol/L NaOH 滴到PH为8 （以酚红作指示剂）再煮沸静置1～2小时,吸取上清液,以DH2O补至原有体积,再测PH8（因高压会使PH降低）分装、高压灭菌、置室温备用
? 肝化汤
1. 取猪胃数个,洗净绞碎称400g 与绞碎的猪肝400gI混合,再加50摄氏度DH2O
4000ml 浓盐酸40ML置50～56度水箱中消化18～24小时
2. 加2N Na2CO3溶液约25ML或3N Na2CO3 15ml 煮沸30分钟,静置过夜.
3. 吸上清液加热70摄氏度调PH7.2,补充DH2O至4000ML,再煮沸30分钟,静置30
分钟以上.
4. 加入K2HPO4 8g 煮沸15分钟,调节PH7.6 再煮沸30分钟,静置数小时,吸上清液
分装,高压灭菌.
｛附注;国产的营养粉可代替牛肉汤和肝化汤作血培养基和巧克力培养基｝
? 肝化汤和血清肝汤
1. 肝化汤
肝汤（PH7.6）: 100ML 牛肉汤（PH8）: 100ML
混合后,以200ML量分装三角烧瓶,高压灭菌,临用时倒入无菌试管 2. 血清肝汤〖问;是否可以不要肝汤？答;可以〗 肝汤（PH7.6）: 100ML 牛肉汤（PH8）: 100ML
混匀灭菌后,加新鲜兔或羊血清20ML,混合备用同上
? 普通琼脂培养基（作用和成分类似于M-H水解酪蛋白培养基,常用于做药敏）※※※
蛋白 10g NaCl 5g DH2O 1000ml 肉浸膏 5g 酵母膏 5g
1. 溶解、煮沸15分钟,调PH7.4～7.6,过滤后补充体积,再测PH 7.4～7.6 2. 分装每瓶300ML,加琼脂5g 或琼脂粉1.5～2g, 高压15 磅15分钟. 3. 室温保存,临用时加热溶化制板.
+c
（注意;在用普通琼脂做药敏时,应先用无菌NS调菌浓度,革兰氏阳性球菌G应调1个
-b-b
麦氏单位,因它生长速度没有G快,而G调0.5个麦氏单位）
? 血琼脂培养基及巧克力培养基※※※※
肝化汤 100ML 牛肉汤 100ML
1 .混合后调节PH至7.6 ,加琼脂5g,分装三角烧瓶、高压、备用.
2 .临用时加热溶化冷却至50摄氏度左右,加兔血20～30ML（8～10%或以上）混合制板,冰箱4度保存备用,有效期一周
附注;巧克力培养基制作:即趁80度时加入兔血，按5～8%比例混匀,再到80摄氏度水浴中10～15分钟（同时不停轻摇）让V、X因子充分释放,最后加入用NS或DH2O适量稀释的万古霉素（每100ML加8mg）摇匀,冷却至50度左右制板（常用去甲万古霉素
+c
50～80mg/ml且在制板之前加）,以抑制G菌的生长,大多数G-b 能生长,也可加杆菌肽（最好）300mg/ml.
为使血琼脂保存的时间相对较长,适量多加点兔血,这样可保存一个月,但巧克力不能太多,因太多太浓时V、X因子不易释放出来.
? 沙氏培养基※※※
蛋白胨 10g DH2O 1000ML
调PH5.5 ,分装200ML/瓶,每瓶加4g琼脂,高压10磅15 分钟 ,备用.
临用前每瓶加入8g葡萄糖和氯霉素针一支（抑制细菌生长,只允许霉菌生长.在临倒之前直接加入）. 制斜面.（？是否煮）
? 双糖（克氏双糖铁琼脂KIA）培养基※
一、上层（产酸产气将变黄并有气泡）
蛋白胨 10g NaCl 5g DH2O 1000ml 牛肉膏
煮沸,冷却后,调PH7.6 ,补充DH2O 至1000ML,加入0.6%酚红4ML,分装,每200ML加入4g琼脂. 临用前加乳糖成1%浓度,煮沸（注;不能高压）
二、下层（产酸产气将变黄并有气泡）
蛋白胨 10g NaCl 5g Na2S2O3 0.5g 枸櫞酸铁铵 ０．５ｇ
混合煮沸，补充ＤＨ２Ｏ至１０００ＭＬ，调ＰＨ７．４～７．６，加入０．６％酚红溶液４ＭＬ，０．８ｇ／２００ｍｌ（？）琼脂粉分装，高压，临用时加入葡萄糖２００ｍｇ，煮沸备用
? 乙酰甲醇（Ｖ—Ｐ）试验培养基（葡胨水）〖甲基红M和Vp试验均应用葡胨水〗※ 蛋白胨 5g 葡萄糖 5g 磷酸氢二钾（对PH起缓冲作用） 5g DH2O 1000ml 将以上成份混合加热溶解,调节PH7.2 ,分装小试管内,每管约2.5ml,再10磅20分钟灭菌
? 蛋白胨水〖用于靛基质试验的培养基〗※
蛋白胨 10g NaCl 5g DH2O 1000ml.
混合煮沸10分钟,校正PH7.4 ,分装高压10磅15分钟,临用时倒入无菌管.
? 尿素培养基※
蛋白胨 1g NaCl 5g KH2PO4 2g DH2O 1000ml 加热溶解---以1N NaOH 调节PH至6.9---煮沸---补充DH2O至1000ml,再调节PH至6.9 ,分装200ML/瓶,加4g琼脂高压.
临用前加热煮沸并加入:尿素 4g 0.6%酚红4ml 葡萄糖0.2g 煮沸冷却至50摄氏度左右制斜面.
? 伊红美兰琼脂培养基（EMB）※※※
蛋白胨 10g NaCl 5g 乳糖 10g 琼脂 20g
2%伊红水溶液 10ml 1% 美兰水溶液 5ml DH2O 1000ml
1. 将蛋白胨、NaCl溶于DH2O中,水浴煮沸,调节PH7.2～7.4,DH2O补足至1000ml 2. 分装6g琼脂于300ml 1.液中三角烧瓶内高压.
临用前加3g乳糖、2%伊红3ml、1%美兰1.5ml,煮沸制板.
附:它为鉴定性培养基,无色半透明菌落为可疑菌,有金属光泽的紫黑色菌落为非致病菌.
? SS琼脂培养基※※※
SS粉 18.5g DH2O 1000ml 煮沸溶解---高压---制板
附: 它为强选择性培养基,抑制非致病菌如大肠杆菌和阳性球菌的生长. 目的是选择志贺氏和沙门氏以及2号病菌等,以无色半透明和黑色菌落为可疑菌.（粉红色为利用乳糖的非致病菌）
注意:伊红美兰麦康凯SS溶于DH2O后都必须在水浴中煮沸.
? 6.5%NaCl肉汤培养基
NaCl 6.5g 1.6% 溴甲酚紫 0.05ml 肉汤 100ml 葡萄糖 0.5g ～1.0g 调节PH至7.0
? 七叶素苷培养基
蛋白胨 15g 枸橼酸铁铵 ２ｇ 琼脂 １％ ＤＨ２Ｏ １０００ｍｌ
将上述成分煮沸溶化调ＰＨ至７．０，临用时加２００ｍｇ七叶素苷制成斜面．
? 高盐培养基
牛肉浸液 １０００ｍｌ 蛋白胨 ２０ｇ ＮａＣｌ ４０～５０ｇ 调节ＰＨ７．４～７．６分装于３００ｍｌ三角烧瓶内高压灭菌．
? 硝酸盐培养
蛋白胨 １ｇ 硝酸钾（无ＮＯ２）０．１ｇ ＤＨ２Ｏ １０００ｍｌ 将上述成分混合后溶解，矫正ＰＨ７．４～７．６，用滤纸过滤，分装试管１５磅高压灭菌１５分钟后备用．
注意：１． 如无硝酸钾可用蛋白胨１０ｇ ＮａＣｌ ５ｇ 硝酸钠０．２ｇ ＤＨ２Ｏ １０００ｍｌ代替．
２． 用营养肉汤１０００ｍｌ＋硝酸钾１ｇ均可．
? 枸橼酸盐及醋酸钠培养基
ＮａＣｌ ５ｇ ＭｇＳＯ４ ０．２ｇ （ＮＨ４）２Ｈ２Ｐ０４ １ｇ ＫＨ２ＰＯ４ １ｇ 枸橼酸钠或醋酸钠 ２．３ｇ 溶于１０００ｍｌＤＨ２Ｏ中，调节ＰＨ７．０
加１％溴麝香草酚酒精溶液１０ｍｌ、琼脂４ｇ 分装１５磅高压２０分钟，制斜面
? 丙二酸培养基
酵母浸膏１ｇ 硫酸铵２ｇ 磷酸氢二钾 ０．６ｇ 磷酸二氢钾 ０．４ｇ ＮａＣｌ ２ｇ 丙二酸钠 3g 葡萄糖 ０．２５ｇ １％溴甲麝香草酚兰 ２．５ｍｌ ＤＨ２Ｏ １０００ｍｌ
将以上成份（除指示剂外）混合加热溶解，调节ＰＨ６．８７．０后再加入指示剂．分装小试管内，每管约３．５ｍｌ，１５磅高压灭菌１５分钟，同时做一份不加丙二酸钠的空白对照培养基． ? 苯丙氨酸培养基
酵母膏 ３ｇ 磷酸氢二钠 １ｇ ＤＬ－苯丙氨酸２ｇ（Ｌ－苯丙氨酸１ｇ） ＮａＣｌ ５ｇ 琼脂 １２ｇ ＤＨ２Ｏ １０００ｍｌ
将以上成份混合加热溶解；调节ＰＨ至７．０，分装于小试管内，１５磅高压１５分钟取出制成斜面，４摄氏度备用． ? 代替牛肉汤培养基
1. 蛋白胨 10g 2. 牛肉膏 5g 3. 酵母膏 5g 4. NaCl 3g 5. K2HPO4 2g
将以上1、2、3、4用DH2O溶解至1000ml，煮沸后，调节PH至7.6 再加5.