6、AFLP：扩增片段长度多态性，其特点是把RFLP和PCR结合了起来。其基本步骤是：把DNA进行限制性内切酶酶切，然后选择特定的片段进行PCR扩增(在所有的限制性片段两端加上带有特定序列的“接头”，用与接头互补的但3?端有几个随机选择的核苷酸的引物进行特异PCR扩增，只有那些与3?端严格配对的片段才能得到扩增)，再在有高分辨力的测序胶上分开这些扩增产物，用放射性法、荧光法或银染染色法均可检测之。
7、SNP：单核苷酸多态性，是一种较为新型的分子标记，其依据的是一位点的不同等位基因之间常常只有一个或几个核苷酸的差异，因此在分子水平上对单个核苷酸的差异进行检测是很有意义的。
8、FISH：荧光原位杂交技术，是一种利用非放射性的荧光信号对原位杂交样本进行检测的技术。它将荧光信号的高灵敏度、安全性，荧光信号的直观性和原位杂交的高准确性结合起来，通过荧光标记的DNA探针与待测样本的DNA进行原位杂交，在荧光显微镜下对荧光信号进行辨别和计数，从而对染色体或基因异常的细胞、组织样本进行检测和诊断，为各种基因相关疾病的分型、预前和预后提供准确的依据。 9、Genome：基因组，有机体或细胞中的所有DNA，包括核中的染色体和线粒体中的DNA。
10、RNA in situ hybridization：RNA原位杂交，是利用cDNA为探针来检测与其互补的mRNA链在细菌或其他真核细胞中的位置，是检测基因组织特性表达的常用方法。
11、单克隆抗体：每个B淋巴细胞有合成一种抗体的遗传基因。动物脾脏有上百万种不同的B淋巴细胞系，含遗传基因不同的B淋巴细胞合成不同的抗体。当机体受抗原刺激时，抗原分子上的许多决定簇分别激活各个具有不同基因的B细胞。被激活的B细胞分裂增殖形成该细胞的子孙，即克隆由许多个被激活B细胞的分裂增殖形成多克隆，并合成多种抗体。如果能选出一个制造一种专一抗体的细胞进行培养，就可得到由单细胞经分裂增殖而形成细胞群，即单克隆。单克隆细胞将合成一种决定簇的抗体，称为单克隆抗体。
12、基因芯片：所谓基因芯片，是指将大量探针分子固定于支持物，上，然后与标记的样品进行杂交，通过检测杂交信号的强弱进而判断样品中靶分子的数量。由于用该技术可以将极其大量的探针同时固定于支持物上，所以一次可以对大量的DNA分子或RNA分子进行检测分析，从而解决了传统核酸印迹杂交，技术复杂、自动化程度低、检测目的分子数量少、效率低，等不足，而且，通过设计不同的探针阵列，，用一定的分析方法，还可以用于序列分析，称作杂交测序。
二、描述cDNA文库构建原理与方法（25%）：（1）cDNA获得方法，（2）克隆方法，（3）文库质量定义。
答： cDNA：以mRNA为模板，利用反转录酶合成与mRNA互补的DNA(complementary DNA，cDNA)，再复制成双链cDNA片段，与适当载体连接后转入受菌体，扩增为cDNA文库(cDNA library)，然后再采用适当方法从cDNA文库种筛选出目的cDNA。与基因组DNA文库类似，由总mRNA制作的cDNA文库包括了细胞全部mRNA信息，自然也含有我们感兴趣的编码cDNA。当前发现的大多数蛋白质的编码基因几乎都是这样分离的。
（1） cDNA获得方法：①Total RNA的提取；②mRNA的分离；③cDNA双链合成：Superscipt II—RT合成第一链，cDNA第二链的合成，双链cDNA末端补平，EcoR I adaptor 加接，双链cDNA末端的磷酸化及Xho I酶切，胶回收cDNA。 （2）克隆方法：①载体制备：pBlueScriptII的提取，pBlueScriptII的双酶切消化，载体去磷酸化，载体效率检测；②cDNA双链和载体的连接：连接，检测（PCR方法）；③电转化：电转化感受态细胞的制备，连接产物纯化，电转化；④快速鉴定、菌落PCR⑤pBlueScript cDNA文库扩增。
（3）文库质量定义：评价一个文库是否有实用价值主要在于文库的含量和插入片段的大小两个方面。所构建的文库中必须有足够多的克隆数, 这样才能确保基因组cDNA 中的每一个序列至少有一个拷贝存在于重组文库中, 为达到这一要求, 文库的容量应不小于1.7×105 , 同时为保证cDNA片段的完整性, 插入片段的平均大小应不小于1kb。
三、阐述基因突变的概念及引起突变的可能途径(25%)：（1）化学诱变，（2）物理诱变，（3）T-DNA插入，（4）缺失、插入，（5）无意突变概念，（6）碱基修复概念 1l>9|+T`
答：基因突变属分子水平上的变异,是指染色体上个别基因所发生的分子结构的变化，基因突变在自然界普遍存在。 基因突变的方式很多，主要有：（1）化学诱变，基因突变可以由某些化学物质所引起，这些化学物质称为化学诱变剂。现已知很多的化学诱变剂，它们诱变的机制是不同的。在DNA复制过程由于碱基类似物的取代，碱基的化学修饰以及碱基的插入和缺失都会引起突变。（2）物理诱变，利用物理因素引起基因突变的称物理诱变，如X射线、紫外线、电离辐射等物理因素可造成
（3）T-DNA插入，改变读码或变成假基因。（4）移码突变：基因中插入或者缺失一个或几个碱基对，会使DNA的阅读框架（读码框）发生改变，导致插入或缺失部位之后的所有密码子都跟着发生变化，结果产生一种异常的多肽链。移码突变诱发的原因是一些像吖啶类染料分子能插入DNA分子，使DNA复制时发生差错，导致移码突变。（5）无意突变，由于一对或几对碱基对的改变而使决定某一氨基酸的密码子变成一个终止密码子的基因突变。（6）碱基修复：DNA损伤的修复系统主要有以下几个：①损伤碱基的直接修复；②切除修复，包括碱基切除修复、核苷酸切除修复和DNA交链的切除修复；③错配修复；④重组修复，又称复制后修复；⑤跨损伤DNA合成，这是一种利用损伤核苷酸为模板，通过DNA聚合酶I使碱基掺入到复制终止处进行DNA合成，从而延长DNA链的修复。 基因突变的特点为：
第一，基因突变在生物界中是普遍存在的。 第二，基因突变是随机发生的。
第三，在自然状态下，对一种生物来说，基因突变的频率是很低的。
第四，大多数基因突变对生物体是有害的，由于任何一种生物都是长期进化过程的产物，它们与环境条件已经取得了高度的协调。
第五，基因突变是不定向的。
四、阐述一条反向遗传克隆功能基因的途径(25%)
答：反向遗传学是相对于经典遗传学而言的。经典遗传学是从生物的性状、表型到遗传物质来研究生命的发生与发展规律。反向遗传学则是在获得生物体基因组全部序列的基础上，通过对靶基因进行必要的加工和修饰，如定点突变、基因插入\\缺失、基因置换等，再按组成顺序构建含生物体必需元件的修饰基因组，让其装配出具有生命活性的个体，研究生物体基因组的结构与功能，以及这些修饰可能对生物体的表型、性状有何种影响等方面的内容。
比较典型的反向遗传克隆功能基因的途径如RNAi。
RNAi的机制可能是细胞内双链RNA在Dicer酶的作用下，可形成-22 bp大小的小干扰RNA(small interfering RNAs，siRNAs)，siRNAs可进一步掺入多组分核酸酶并使其激活，从而精确降解与siRNAs序列相同的mRNA，完全抑制了该基因在细胞内的翻译和表达(下略)
南开大学2005年分子生物学考博试题
一、选择题 1、Ⅱ型核酸内切酶的产物是？①5?粘末端②3?粘末端③平末端④以上都有 2、基因工程诞生的时间？
3、限制性内切酶产生5?PO4 ,3?OH 4、cDNA合成需要反转录酶
5、 T4-DNA连接酶连接的最适温度是？
6、 将TcR基因用p BR322运载，受体细胞将产生的基因型？ 7、 Cosmid怎么产生？
8、 将phage DNA转入宿主的方法 9、 DNA探针标记的方法
10、用杂交来筛选重组子的优点 11、蛋白质分泌的介导序列
12、Mini-Cell中含有：DNA、RNA、蛋白质中的哪几种 13、酵母的4种载体
14、λ phage基因表达的重要特征
15、纯化或抽提DNA时，DNA存在于哪一相中 16、DNA在琼脂糖凝胶电泳中用什么染色 17、从乙醇中得到DNA，最重要的条件是什么
18、用pUC19将克隆插入lacZ,选择克隆子时，要求宿主的基因型是什么 19、琼脂糖凝胶电泳中DNA被降解的特征
20、λ phage的Cos site能被下列哪个基因的产物切割：gene A,E,J,W 21、EMBL4载体是插入型还是取代型
22、酵母的哪个载体在非选择培养基上最稳定：YIp, YEp, YCp, YRp 23、E.coli有哪三个天然质粒载体 24、哺乳动物基因组转移的方法
25、基于conjugative transfer,质粒分为哪两类 26、植物原生质体转化的方法
27、plasmid中含有复制起始位点的是plasmid还是phage 28、质粒转化B.subtilis 的要求 二、 问答题（共70分）
1、 Tat蛋白激活HIV表达的全过程
2、 从分子水平上解释多抗、单抗的产生？怎样理解产生抗体的多样性
3、 （互补实验）根据两个图说明E.coli操纵子的二倍体表型，并解释原因
4、 利用λ phage A、B两个点突变株，证明E.coli中甲基介导的错配修复系统有存在
5、 用实验证明原核生物和真核生物基因结构的差别
6、 病毒感染引发的宿主细胞应答的有关基因或蛋白
7、 基因A序列已知（其上游序列亦已知），在它上游（-370bp）存在-GGTCAT-的调控元件，证明该调控元件中每个碱基在调控中贡献可能不同
中科院 医药与健康所 2008 博 分生
1、表观遗传，及调控方式，还有蛋白质通过哪些共价修饰调控其功能？
2、蛋白质与DNA结合的方法和比较，EMSA和DNase1足迹法？
3、密码子改造研究新蛋白药物，原理，关键和方法
4、设计研究未知基因（预测两个跨膜区域）功能的实验方案（不低于4个）
5、质粒改造原则
6、诱导全能干细胞的方法，实验方案等
中科院 2005 博 生化和分生
三、简答题：
1、简诉SH2与SH3结构域的功能。
2、某一酶催化单一底物反应。S1,S2都是该酶的底物，已知他们的Kcat(或Vmax)和Km值,在S1,S2同时存在并且浓度相同的情况下，请给出该酶催化S1和S2反应速度之间的表达式。
3、依次写出三羧酸循环中的酶。
4、解释下列非编码RNA(non-coding RNA)名词：
(1)核仁小RNA(small nucleolarRNA,snoRNA);
(2)干扰小RNA(small interferingRNA,siRNA);
(3)微RNA(microRNA,miRNA)。
5、生物体存在大量的mRNA前体的选择性剪切(alternative splicing)过程。什么是选择性剪接，有几种方式？
四、问答题：
1、阐诉磷脂酶A2催化的反应与信号转导的关系。
2、在纯化某一蛋白质的过程中，有一个分子量比目标蛋白质小的蛋白质与目标蛋白一同被纯化，请举例两种办法来证明或排除这个分子量小的蛋白质是目标蛋白质的部分降解产物。
3、试诉非离子型去垢剂增容膜蛋白的机制。
4、阐诉逆转录转座子与逆转录病毒的异同点。
5、阐诉酵母转录激活因子GAL4的调控方式及其在酵母双杂合系统(yeast two hybrid system)中的应用
湘雅 2006 博 分生
一、问答题
1、简述逆转录病毒的生活周期及其在基因治疗中的应用
2、什么是DNA指纹图谱，阐述DNA指纹图谱的产生机制及其在医学生物学中的应用
3、什么是质粒？简述质粒的结构特点及其用途
4 、什么是RNAi？简述RNAi技术的原理及其在恶性肿瘤治疗中的应用前景
5、什么是基因定位诱变技术？举例说明基因定位诱变技术的应用
6、简述真核生物基因表达的调控机制
二、名词解释 1、无义突变
2、基因家族
3、顺式作用元件
4、人类基因组计划
5、多顺反子
6、蛋白质工程
7、Klenow片断
8、转座子
9、proteomics
10、反义RNA
11、real-time PCR
12、同工异源酶
13、基因表达酶