综合测评(八) 生物技术实践
测试时间：90分钟 满分：100分
范围：选修1
1．(14分)(2012·郑州三模)请回答下列有关微生物的一些问题。 (1)微生物的分布：微生物主要分布在富含________的土壤表层；不同微生物对pH的要求不同，细菌常生活在酸碱度________的潮湿土壤中。
(2)微生物的消毒和灭菌：在菊花组织培养中，对外植体常用酒精和________进行消毒。在微生物培养中，对培养基常用________方法进行灭菌。对于空气中的细菌可用紫外线杀灭，其原因是紫外线能使蛋白质变性，还能________。如果要检测灭菌是否彻底，可以采用
的
方
法
是
：
________________________________________________________________
________________________________________________________________________。
(3)微生物的应用：在葡萄酒的自然发酵过程中，运用吸附在葡萄皮上的野生酵母菌发酵产生酒精，请写出该过程的化学反应式：____________________。在果醋制作时，运用醋酸菌在________和糖源充足时，将糖分解成醋酸。
(4)微生物的接种：微生物接种的方法很多，最常用的是____________和____________。
(5)微生物的计数：根据培养基上出现的菌落数目和稀释倍数计算得出细菌数目往往比实际的数目低，原因是________________________________。
(6)微生物的鉴定：为检测尿素分解菌的存在与否，在以尿素为
唯一氮源的________(选择、鉴别)培养基中加入________指示剂，如果存在尿素分解菌，则指示剂将变________色。
答案：(1)有机质 接近中性
(2)氯化汞 高压蒸汽灭菌 损伤DNA的结构 将灭菌过的培养基在适宜的温度下放置一段时间，观察培养基上是否有菌落产生
(3)C6H12O6―酶―→2C2H5OH＋2CO2＋能量 有氧 (4)平板划线法 稀释涂布平板法
(5)当两个或多个细菌连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落
(6)选择 酚红 红
解析：(1)微生物主要分布在有机质丰富的土壤表层，细菌常生活在酸碱度接近中性的潮湿土壤中。
(2)植物组织培养时，对外植体常用酒精和氯化汞消毒，对培养基常用高压蒸汽灭菌法灭菌；紫外线能使蛋白质变性，还能损伤DNA的结构；可通过在适宜的温度下放臵灭菌过的培养基看其是否有菌落产生来确定培养基灭菌是否彻底。
(3)醋酸菌为需氧型生物。
(4)最常用的微生物接种方法有平板划线法和稀释涂布平板法。 (5)因一个菌落可由多个连在一起的细菌形成，所以计算得出的细菌数一般低于实际数目。
(6)用选择培养基筛选目的菌，加入酚红指示剂检测尿素分解菌，若存在尿素分解菌，指示剂变红色。
2．(17分)(2012·南昌一模)尿素是一种重要的农业肥料，需经细菌的分解才能更好地被植物利用。生活在土壤中的微生物种类和数量繁多，下列是从土壤中分离分解尿素细菌的有关问题，请分析回答：
(1)如图是利用________法进行微生物接种，把聚集的菌种逐步________到培养基的表面。除此方法外，常用的微生物接种方法还有________(写一种)。
(2)如果要对培养的菌落进行纯化，在培养基上划线操作中，操作的第一步及每次划线之前都要灼烧接种环，目的是对接种环进行________，灼烧的接种环冷却后才能接种的原因是______________________。
(3)下面是两种培养基的配方： 表1：A培养基配方 KH2PO4 1.4 g 表2：B培养基配方
MgS纤维素粉 Na2HPO4· NaNO37H2O KH2O4·PO4 7H2O 5 g
Na2HPO4 2.1 g MgSO4·7H2O 0.2 g 葡萄糖 尿素 琼脂 H2O 1 000 mL 10.0 g 1.0 g 15.0 g 酵母KCl 粉膏 H2O 1 g 1.2 g 0.9 g 0.5 g 0.5 g 0.5 g 1 000 mL
①配制培养基的操作步骤________(用字母顺序回答)。 a．倒平板 b．计算 c．溶化 d．称量 e．灭菌
②通常培养基采用____________法灭菌，在制备固体培养基的倒平板操作时，平板冷凝后，应将平板倒置，目的是________________________。
③如果要分离土壤中能分解尿素的细菌，应选择上述________(A、B)配方的培养基，在该培养基中加入________指示剂，可初步鉴定出该种细菌能否分解尿素。
④据B培养基的成分，所培养微生物的同化作用类型是________。
(4)如果进一步从尿素分解菌中提取出DNA，利用PCR技术扩增，则每次循环复制可分为________________三步。而尿素分解菌能分解尿素的直接原因是它们能合成________，该物质被提取出后的纯化
方
法
通
常
是
____________________________________________________。
(5)在微生物培养过程中，常需要对微生物进行计数，血球计数板是常用的工具，血球计数板的计数室长和宽各为1 mm，深度为0.1 mm，其中25×16型的血球计数板计数室以双线等分成25个中方格，每个中方格又分成16个小方格。一般计数时选取的中方格位于计数室的____________________。下图表示的是其中一个中方格的情况，对该中方格中的酵母菌进行计数的结果是________个。如果计数的几个中方格中的细胞平均数为20个，则1 mL培养液中酵母菌的总数为________个。
(6)抗生素可由微生物产生，具有抑菌作用，能在琼脂培养基中扩散。在筛选产生抗生素的菌种时，先在琼脂培养基平板上划线接种一种从土壤中获得的甲菌，在27 ℃下培养3天，形成菌落。然后接种乙、丙、丁三种致病菌(图A)，继续在同样条件下培养3天，结果如图B。分析结果，得出的结论是( )
①甲菌产生了抗生素 ②丁菌的生长被丙菌产生的抗生素抑制 ③乙菌的生长被甲菌产生的抗生素抑制 ④丙菌产生的抗生素抑制了乙菌的生长
A．①③ B．①④ C．②③ D．②④
答案：(1)平板划线'稀释(分散、分离)'稀释涂布平板法 (2)灭菌'防止高温杀死需接种的微生物
(3)①bdcea ②高压蒸汽灭菌 防止培养皿内壁上出现的冷凝水污染培养基 ③A'酚红'④异养型
(4)变性、复性、延伸'脲酶'凝胶色谱法 (5)四个角和中央的五个中方格 24 5×106 (6)A
解析：(1)图示利用平板划线法进行微生物接种，把聚集的菌种逐步稀释到培养基的表面。除此方法外，常用的微生物接种方法还有稀释涂布平板法。
(2)接种环通过灼烧灭菌，灼烧的接种环冷却后才能接种的原因是防止高温杀死需接种的微生物。
(3)①配制培养基的操作步骤：计算、称量、溶化、灭菌、倒平