⑹．硝酸盐还原试验
NO3ˉ→→NO2ˉ（大肠） NO3ˉ→→NH4＋
NO3ˉ→→N2（沙雷氏菌属） 试剂甲：对氨基苯磺酸 试剂乙：α-萘胺
观察结果时甲液和乙液要等量加入，立即或10min内出现红色为阳性。若不变色，则要加入锌粉：①变红色，说明硝还试验为真阴性②仍不变色，说明硝还试验真阳性，但原先还原产物不是NO2ˉ。
阴性结果出现时有三种可能：①细菌不能还原硝酸盐②亚硝酸盐继续分解生成氨或氮③培养基不适合细菌生长
肠杆菌科细菌均能还原硝酸盐为亚硝酸盐。
⑺．氨基酸脱羧试验
细菌产生脱羧酶分解氨基酸使其脱羧生成胺和CO2，虽然各种细菌所产生的脱
羧酶不一定相同，但最后都能生成胺（赖氨酸→尸胺，鸟氨酸→腐胺，精氨酸→精胺）和CO2。然后胺能使培养基变碱性，通过指示剂（溴甲酚紫）由黄变紫即为阳性。对照管（无氨基酸）为黄色。
注意：①微量管接种好后要加石蜡，使培养基造成厌氧环境。（生成的胺更稳
定，还能诱导氨基酸脱羧酶的产生）
②对照管如果不显黄色，则结果不能判断。
应用：除伤寒沙门氏菌，鸡沙门氏菌外，其他沙门氏菌鸟AA，赖AA均为阳性；
除宋氏和鲍氏志贺菌外其他志贺菌也菌为阳性。 ⑻．葡萄糖酸盐试验
微量管在培养18～24h后，加班氏试剂，水浴煮沸10min，由兰色变黄绿色到
砖红色即为阳性，不变为阴性。
1． 肠杆菌的鉴定流程 ⑴．根据苯丙氨酸脱羧酶实验：
（＋）：变形杆菌属，普罗威登斯菌属，摩根氏菌属
－）：埃希氏菌属，志贺氏菌属，沙门氏菌属，枸橼酸杆菌属，爱德华菌属；克雷
伯菌属，肠杆菌属，沙雷氏菌属，哈夫尼亚菌属。 ⑵．苯丙氨酸脱羧酶实验阴性，加做葡萄糖酸盐实验
（＋）：克雷伯菌属，肠杆菌属，沙雷氏菌属，哈夫尼亚菌属
a． 动力（－）：克雷伯菌属，属内种的鉴定主要根据吲哚试验（肺克吲哚实验阴性，三个亚种鉴别试验IMViC：肺炎－－＋＋，臭鼻－＋－d，鼻硬结－＋－－） b． 动力（＋），DNA酶（＋）：沙雷氏菌属
动力（＋），DNA酶（－），枸橼酸盐（＋）：肠杆菌属（主要是阴沟肠杆菌和产气肠杆菌，前者赖氨酸阴性，而后中为阳性）
动力（＋），DNA酶（－），枸橼酸盐（－）：哈夫尼亚菌属
（－）：加做IMViC（靛基质-甲基红-VP-枸橼酸盐）试验
a． IMViC（＋＋－－）：大肠埃希菌（H2S－）或爱德华菌属（H2S＋）。 b． IMViC（－／＋＋－＋）：枸橼酸杆菌属 ⑶．苯丙氨酸脱羧酶实验阳性，根据产H2S可分
（＋）：变形杆菌属
属内主要鉴定试验如下
尿素酶 鸟氨酸 靛基质 麦芽糖 木 糖 普变 ＋ － ＋ － ＋ 奇变 ＋ ＋ － － ＋ 产粘变 ＋ － － ＋ － 潘尼氏 ＋ － － ＋ ＋
（－）：普罗威登氏菌属，摩根氏菌属
普罗威登氏菌属：鸟氨酸：－；枸橼酸盐：＋（属内鉴定尿素酶及一些碳水化合物的产酸试验，如甘露醇﹑阿拉伯糖﹑海藻糖等）
摩根氏菌属：鸟氨酸：＋；枸橼酸盐：－（只有一个种：摩氏摩根氏菌） ⑷．志贺氏菌属和沙门氏菌属
这两种菌属在肠道选择性培养基（SS、麦康凯）形成不发酵乳糖的透明或半透明的无色菌落，但一些沙门氏能产H2S就会形成中心黑色的菌落，鉴定时在选
择性培养基上挑选可疑菌落进行鉴定。 a．志贺氏菌属
主要系统生化：KIA：K/A（只有福氏6型能产气），H2S（－）；MIU：－+/-－；
苯丙：－；枸橼酸盐：－。
报告结果时要根据其血清学的结果鉴定到种，即A群（痢疾志贺氏菌）﹑B群（福氏志贺氏菌）﹑C群（鲍氏志贺氏菌）﹑D群（宋氏志贺氏菌）；我国主要以B群和D群为主。
b．沙门氏菌属
主要系统生化：KIA：K/AG，H2S（+/－）；MIU：＋－－；苯丙：－；枸橼酸盐：－。
伤寒沙门氏菌的抗原结构：菌体抗原（O抗原），鞭毛抗原（H抗原），包膜抗原（主要是Vi抗原）
根据系统生化鉴定到沙门氏菌属后，在根据其抗原结构的特点，用血清学凝集分到种即可报告结果。
血清凝集步骤如下： A-F多价O（＋）：
O2，Ha（＋）：A群（甲型副伤寒沙门氏菌） O4，Hb（＋）：B群（乙型副伤寒沙门氏菌） O6﹑7，Hc，Vi（＋）：C群（丙型副伤寒沙门氏菌）
O9，Hd，Vi（＋）：D群（伤寒沙门氏菌） O3﹑10，Heh（＋）：E群 O11，Hi（＋）：F群
A-F多价O（－），做Vi血清因子凝集：（＋）浓菌液沸水煮沸30min，再用A-F多价O血清定群；（－）继续以A-F以外的多价O血清凝集分型。
血清凝集注意：确定O群后， 一定要用H因子再做凝集；最终结果要以凝到H相后才能报告。
七．非发酵革兰阴性杆菌
非发酵革兰阴性杆菌是指一群不利用葡萄糖或仅以氧化形式利用葡萄糖﹑需氧或兼性厌氧﹑无芽胞的革兰阴性杆菌。氧化酶试验一般阳性，除不动杆菌属和嗜麦芽假单胞菌外。
非发酵菌按下列试验进行初步分属
菌属 氧化酶 O-F试验 动力 MaCC生长情况 触酶 假单胞菌属 ＋ O/－ ＋/－ 生长 ＋ 无色杆菌属 ＋ O/－ ＋/－ 生长 ＋ 不动杆菌属 － O/－ － 生