料或充分说明理由。
3.给药频率
原则上应每天对试验动物进行给药，给药期限长（3个月或以上）的制剂每周至少应给药6天。
4.给药期限
原则上临床单次用药，需进行2周长期毒性试验；临床用药不超过2周者，需进行1个月长期毒性试验；临床用药超过2周者，试验周期应为临床疗程的3～4倍。采用啮齿类进行试验的一般最长不超过6个月，非啮齿类不超过9个月。
（五）检测指标和检测时间
给药前，对动物进行适应性饲养。啮齿类动物至少应进行3～5天的适应性观察，非啮齿类动物至少应驯养观察2周。
给药期间，对动物进行外观体征、行为活动、摄食量、体重、腺体分泌、呼吸、粪便性状、给药局部反应、血液学指标、血液生化学指标等的观测。非啮齿类动物还应进行体温、眼科检查、心电图、尿液分析，根据试验周期的长短和受试物的特点确定检测时间和检测次数。大鼠体重应雌雄分开进行计算。
长期毒性研究除必须的检测指标（参见附录）外，还应根据受试物的特点、在其他试验中已观察到的某些改变或其他的相关信息（如处方中组成成分有关于毒性的文献报道），增加相应的观察和检测指标。
在试验结束时应进行一次全面检测。当给药期限较长时，应根据受试物的特点选择合适的时间进行中期阶段性的检测；试验期间对濒死或死亡动物应及时取到标本进行观察
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和组织学检查，分析濒死或死亡的原因；恢复期结束时应进行一次全面的检测。
给药结束，对动物（除恢复期观察动物）进行全面的大体解剖，称重主要脏器并计算脏器系数；进行组织病理学检查并出具病理学检查报告，应附有相应的组织病理学照片。对照组动物、高剂量组动物以及尸检异常动物应详细检查。若高剂量组动物某一组织发生病理改变，应对其它剂量组动物的相同组织进行组织病理学检查。通常需要制备骨髓涂片，以便当受试物可能对造血系统有影响时进一步进行骨髓的检查。
在给药结束后对部分动物进行恢复期观察，以了解毒性反应的可逆程度和可能出现的延迟性毒性反应。
四、结果分析和评价
分析长期毒性研究结果可判断动物是否发生毒性反应，最终可判断人体可能出现的毒性反应。只有通过研究结果的科学分析和评价才能够清楚描述动物的毒性反应，并推断其与人体的相关性。
通过分析长期毒性研究结果的毒性起始时间、程度、持续时间、可逆性等和靶器官等，确定安全范围，并探讨可能的毒性作用机制。
在分析长期毒性研究结果时应综合考虑数据的统计学意义和生物学意义，正确利用统计学假设检验有助于确定试验结果的生物学意义，需要注意的是具有统计学意义并不一定代表具有生物学意义。在对长期毒性研究结果进行分析时，应对异常数据进行合理的解释。
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由于动物和人体的实际差异，动物长期毒性研究的结果一般不会完全再现于人体临床试验。但如果没有试验或文献依据证明受试物对动物的毒性反应与人体无关，在进行制剂评价时必须首先假设人最为敏感，长期毒性研究中动物的毒性反应将会在临床试验中再现。
总之，在对长期毒性研究结果进行评价时，应结合受试物的药学特点、药效学和其他毒理学研究的结果以及已取得的临床研究的结果，进行综合评价。
【附录】
长期毒性试验中必须检测的指标
1、血液学指标 ●红细胞计数 ●血红蛋白 ●红细胞容积 ●平均红细胞容积 ●平均红细胞血红蛋白 ●平均红细胞血红蛋白浓度 ●网织红细胞计数 ●白细胞计数及其分类 ●血小板计数 ●凝血酶原时间 2、血液生化学指标 ●天门冬氨酸氨基转换酶 ●丙氨酸氨基转换酶 ●碱性磷酸酶 ●肌酸磷酸激酶 ●尿素氮 ●肌酐 ●总蛋白 ●白蛋白 ●血糖 ●总胆红素 ●总胆固醇 ●甘油三酯 ●γ-谷氨酰转移酶（非啮齿类动物） ●钾离子浓度 ●氯离子浓度 ●钠离子浓度 3、尿液分析指标 非啮齿类动物尿液分析指标 ●尿液外观 ●比重 ●pH值 ●尿糖 ●尿蛋白 ●尿胆红素 ●尿胆原 ●酮体 ●潜血 ●白细胞 第8页—共9页 长期毒性研究技术指导原则
4、组织病理学检查指标
长期毒性试验中需称重并计算脏器系数的器官 ●脑 ●心脏 ●肝脏 ●肺脏 ●肾脏 ●肾上腺 ●胸腺 ●脾脏 ●睾丸 ●附睾 ●子宫 ●卵巢 长期毒性试验中需进行组织病理学检查的脏器、组织 ●脑（大脑、小脑、脑干） ●脊髓（颈、胸、腰段） ●垂体 ●胸腺 ●甲状腺 ●甲状旁腺 ●食管 ●唾液腺 ●胃 ●小肠和大肠 ●肝脏 ●胆囊* ●肾脏 ●肾上腺 ●脾脏 ●胰腺 ●气管 ●肺 ●主动脉 ●心脏 ●附睾 ●睾丸 ●卵巢 ●子宫 ●前列腺 ●乳腺 ●坐骨神经 ●膀胱 ●眼（眼科检查发现异常时）* ●视神经* ●给药局部 ●骨髓 ●淋巴结（包括给药局部淋巴结、肠系 膜淋巴结） 注：*为啮齿类动物可不进行组织病理学检查的组织或器官。
【参考文献】
1.《药品注册管理办法》
2.《医疗机构制剂注册管理办法（试行）》
3.《北京市医疗机构制剂注册管理办法实施细则（试行）》 4.《已上市中药变更研究技术指导原则（一）》 5.《已上市化学药品变更研究技术指导原则（一）》 6.《药物重复给药毒性试验技术指导原则（征求意见稿）》
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