布氏杆菌病(2)

2019-04-22 15:58

(2)虎红平板凝集试验

虎红平板凝集试验RBPT抗原是将布鲁氏菌菌株(抗原性良好)经培养、灭活、离心后收集菌体用虎红染料染色后于乳酸缓冲液中制成,与被检血清在洁净的玻璃板上进行凝集反应,若出现沙粒状凝集者则判为阳性。该方法操作简易、检测快速,成本低廉,但准确性易受温度和凝集时间的影响,且抗原的标准化也可影响其敏感性[12],有时会因牛种布鲁氏菌S19弱毒疫苗免疫和交叉反应造成假阳性结果,偶尔会因前带现象出现假阴性结果[13],故RBPT适于动物布病的普查,目前,在国际贸易中仍用于牛、羊、猪布病检测,在我国也用于人布病监测的初筛。

(3)试管凝集试验

试管凝集试验SAT可以定量,因而在判定反应强度上比虎红平板凝集试验更精确。该实验操作步骤繁琐,需37℃条件下孵育过夜,较费时,不适于现场检疫和基层采用,家畜感染(自然感染或人工免疫)布病一定时间后,机体中先后产生IgM与IgG两种抗体,而SAT检测IgM敏感性较高,因此可用于布病期诊断,且对人畜布病疫苗免疫后血清抗体也能检测[14],但不适合绵羊种布病的诊断。单独应用会造成误诊和漏诊,因为不是所有感染动物所处的抗体水平都具有诊断意义。同RBPT一样,SAT也不能鉴别人工免疫和自然感染动物。

2、补体结合试验

补体结合试验(CFT)是世界动物卫生组织(OIE)公认的布病确诊性试验。相比SAT和RBPT,特异性和敏感性较高[15],具有较高的临床诊断价值,对于慢性布鲁氏菌病,RBPT检测为阴性,而CFT检测为阳性,且在检测成年牛(未经免疫或犊牛时给予免疫的)时非常准确[16]。主要应用于牛、羊、绵羊附睾种布氏杆菌病的诊断,但不适合猪个体布病的诊断,因为豚鼠补体会受到猪补体的干扰,使实验敏感性降低38%~40%。发生溶血的样品,也不能用CFT检测,另外,实验参与反应成分多,需设立多组对照,结果判定主要通过肉眼观察溶液颜色的深浅判定出溶血程度,所以结论主观性强,易产生误差。而且实验要求条件高,操作复杂,基层检疫难以采用。

3、酶联免疫吸附试验

酶联免疫吸附试验ELISA分为间接ELISA(i-ELISA)和竞争ELISA(C-ELISA) , 可用于血清及乳汁样本布病的检测,i-ELISA是以光滑型布鲁氏菌菌体脂多糖(S-LPS)作包被抗原,主要检测IgGs或IgG亚型,i-ELISA敏感性高,优于上述其他血清学方法[17],但在实际应用中仍存在血清交叉问题,难以区分人工免疫和自然感染。C-ELISA方法,即在ELISA微孔上包被光滑型布鲁氏菌菌体脂多(S-LPS),加入O型多糖(OPS)表位之一的特异单克隆抗体,再加入稀释被检血清,洗涤,加入酶标抗鼠IgG辣根过氧化物酶的复合物。该方法较敏感,无假阴性结果出现,且能较好的区分人工免疫和自然感染。敏感性与i-ELISA相当,但大于缓冲平板凝集试验(BPAT)。在检测未免疫动物和假阳性样品时,特异性高于或等于i-ELISA,为此,2004年,C-ELISA被OIE列为诊断和清除牛布鲁氏菌病的推荐方法。

上述常规血清学方法均是基于抗体对布鲁氏菌脂多糖O链抗原的检测,而布鲁氏菌脂多糖O链抗原可以和结肠炎耶尔森氏菌(O:9)、大肠杆菌(O:157)等阴性菌抗原以及小牛胸腺DNA发生交叉反应,故都有假阳性结果产生[18] 。研究表明:若将抗原血清混合液的pH值降低到3~4,可大大降低非特异性凝集,而不影响感染血清的凝集。

6.5 分子生物学诊断

1、多重PCR

其特异性、敏感性、重复性和稳定性均优于细菌分离和血清学诊断方法,特别是能区分各种和部分生物型,这对布病的筛查和确诊有重要意义[19]。

2、限制性片段长度多态性聚合酶链反应(PCR-RFLP)

是以DNA指纹图谱为基础用于微生物分型鉴定的方法[20],其原理是用限制性内切酶将细胞基因组DNA进行切割,然后在凝胶上电泳分离,以显示不同种群基因组DNA的RFLP。

3、扩增片段长度多态性(AFLP)分子遗传标志技术

是一种DNA分子标记技术,基因组经酶切后连接特定的接头,形成带接头的特异片段,以此为模板,通过接头序列和PCR引物3′端的识别进行扩增,将AFLP技术的可靠性和PCR技术的快捷方便结合起来[21],克服了普通PCR技术的缺点,不需要了解样品基因组序列即可对其进行检测,是检测基因组变异较为理想的一种方法。

7 防控

布鲁菌病的防控工作要坚持“预防为主”的方针。采取以监测、检疫、扑杀阳性牲畜为主的综合性防控措施。

1、定期检疫家畜

对易感家畜进行净化和监测,特别是进出境的动物要严格按照政策执行,检测出来的阳性牲畜一律扑杀,并进行无害化处理。

2、隔离或淘汰病畜

按照尽量减少病畜数量、合理控制流动、避免混养的原则,因地制宜地采用扑杀或隔离饲养的方法处理病畜。

3、建立健康畜群

在经济状况允许的地区,可对畜群实施先净化后监测的防控措施;在经济欠发达地区可采取培育健康畜群措施,以减少经济损失

4、切断传播途径

家畜的流产胎儿、胎衣应在指定地点深埋或焚烧;被污染的场地,应立即彻底消毒;来自疫区的皮毛应在收购地点进行消毒、包装后方可外运;人工授精应选择健康种公畜的精液;奶和奶制品应加热后食用;家畜粪便须经生物热发酵消毒。

5、疫苗接种

布鲁氏菌病的免疫是以细胞免疫为主,特异的T细胞与布鲁氏菌抗原反应,产生淋巴因子,提高巨噬细胞活性,从而消除细胞内的细菌。常用疫苗有牛流产布鲁菌19号苗、猪布鲁菌2号弱毒活苗、马耳他布鲁菌5号弱毒活苗。

8公共卫生

人类感染本病多数与职业有关,多见于兽医、牧工、皮革厂的工人、乳肉加工人员以及实验室工作人员等。传染源主要是患病动物,一般不由人传染于人,所以人类布鲁氏菌病的预防与消灭,有赖于动物布鲁氏菌病的预防与消灭。患病羊、牛、猪为其主要传染源。狗对三种主要布鲁氏菌经常是隐性感染,可成为人的传染源。主要通过接触,食入,吸入感染。人与患病动物或病料接触,经消化道、皮肤、粘膜、生殖道感染。感染牛的布鲁氏菌无自觉症状,但血液中存在抗体;感染猪的布鲁氏菌,症状轻,关节炎、肌肉疼痛,疲劳,局部炎症;感染羊的布鲁氏菌,症状重,发生波浪热,在发热期体温晚间升高,但神志清醒,清晨体温下降(出汗)至接近常温,这时病人感觉症状加重肌肉、关节疼痛加剧,大量出汗,体重减轻,关节、肌肉疼,肝脾肿胀,男性可发生睾丸炎,女性可流产、神经炎。由此可见,感染羊的布鲁氏菌对公共卫生的危害更为严重。

职业人群应从控制传染源、切断传播途径、保护易感人群等方面加强对本病的预防,具体措施包括:对家畜采取“淘汰病畜,病畜、健康畜分群圈养,疫苗免疫”等防治措施,加强动物检疫。并加强动物制品作业场所的消毒措施,如紫外灯照射、喷消毒剂。对畜产品加工工具进行消毒处理,包括紫外灯照射、煮沸消毒、消毒剂浸泡等。大力进行卫生宣传,加强人、畜粪便管理。保护水源,防止被病畜、病人的排泄物污染。进行这方面知识的宣传,凡从事畜牧业的兽医、饲养员、挤奶员、毛肉类和乳制品加工销售人员、野生动物园的饲养人员,接触畜牧流产物、排泄物等,要做好个人防护,如戴N95口罩、橡胶手套、穿工作服等。特别在处理羊只流产物过程中一定要做好个人防护。同时把流产羊只的排泄物深埋消毒处理。 在工作完成后,个人防护用品要统一收集,按上述第3条进行消毒处理。也可对从事这方面职业的人员进行免疫接种。 M104菌苗,现有19 ~ 13A菌苗。对从业人员定期进行体检,争取早诊断,早治疗。患者可用青霉素,链霉素共同治疗,疗程42天,由于是布氏杆菌是胞内寄生,有的能治愈,有的不能治愈。

参考文献

[1] Dawson C E, Stubberfield E J, Perrett L L, et al . Phenotypic and molecular

characterisation of Brucella isolates from marine mammals [J]. BMC Microbiol, 2008, 8: 224.

[2] Scholz H C, Hubalek Z, Sedlacek I, et al . Brucella microti sp. nov., isolated from the

common vole Microtus arvalis[J]. Int J Syst Evol Microbiol, 2008, 58(2): 375-382.

[3] Scholz H C, Hofer E, Vergnaud G, et al . Isolation of Brucella microti from mandibular

lymph nodes of red foxes, Vulpes vulpes, in lower Austria[J]. Vector Borne Zoonotic Dis, 2009, 9(2): 153-156.

[4] Scholz H C, Nockler K, Gollner C, et al . Brucella inopinata sp. Nov isolated from a

breast implant infection[J]. Int J Syst Evol Microbiol, 2010, 60(4): 801-808.

[5] O'Callaghan D, Whatmore A M. Brucella genomics as we enter the multi-genome era [J].

Brief Funct Genomics, 2011, 10(6): 334-341.

[6] 朴范泽主编.家畜传染病学[M],中国科学文化出版社,2004:ll0. [7] 杨东东.浅谈人用布鲁氏菌疫苗[J],现代畜牧兽医,2011(12):81-82.

[8] 刘建鹏, 杨增岐, 马杰, 等. 布鲁菌病的综合防控措施[J] . 动物医学进展, 2009 , 30(10) :121-124.

[9] 白媛媛,姚江华,白颖,等2布鲁氏菌病[J].Journal of Animal Science and Veterinary Medicine Vol.201332(3):34.

[10] 王传清,李星.布鲁氏菌病的流行和研究现状及防控策略[J].中国动物检疫,2009,

26(6):63~65.

[11] 赵凤菊.布鲁氏菌病诊断方法的研究进展[J].中国兽医杂志,2011,38:(8):193~196. [12] 曾瑞霞,苏玉虹.布鲁氏杆菌各类检测方法的比较[J].现代畜牧兽医,2006,(5):

65~69.

[13] 徐春厚,吴凌,邵红,等.四种凝集试验检测牛布鲁氏菌病血清抗体的比较[J].中国

动物检疫,2008,15(4):14.

[14] 王佳,徐卫民.布鲁氏菌病血清学诊断研究进展[J].中国病原生物学杂志,2008,3(2):149~152.

[15] 梅建军,任林柱,王兴龙.布鲁氏菌检测技术的研究进展[J].动物保健,2006,(9):

13~15.

[16] 邢进,王金锋,赵宝华.布鲁氏菌病及其诊断方法研究进展[J].动物医学进展,2009,

30(3):69~73.

[17] Kittelberger,R.F. Hilbink,M.F. Hansen,G.P. Ross,G.W. de Lisle,A. Cloeckaert,

and J. de Bruyn. Identification and characterization of immunodominant antigens during the course of infection with Brucella ovis. J.Vet. Diagn. Investig. 1995,7:210~218. [18] 许邹亮,南文龙,陈义平.布鲁氏菌检测技术的研究进展[J].中国动物检疫,2011,

28(9):68~70.

[19] 唐浏英,李元凯,尚德秋,等.应用分子生物学技术检测布氏菌抗原的研究[J].中国

地方病防治杂志,1995,10(1):199~201. [20] Cloeckaert A,Verger JM,Grayon M,Crepinet O,Restriction site polymorphism of the

genesencoding the major 25kDa and 36 kDa outer-membrane proteins of Brucella[J].Microbiology,l995,141:2 111~2 121.

[21]骆利敏,李明,芮勇宇.AFLP法构建布鲁氏菌基因组DNA指纹图谱[J].中国

人兽共患病学报,2006,22(1):15-7.


布氏杆菌病(2).doc 将本文的Word文档下载到电脑 下载失败或者文档不完整,请联系客服人员解决!

下一篇:2011年历史学博士招生简章

相关阅读
本类排行
× 注册会员免费下载(下载后可以自由复制和排版)

马上注册会员

注:下载文档有可能“只有目录或者内容不全”等情况,请下载之前注意辨别,如果您已付费且无法下载或内容有问题,请联系我们协助你处理。
微信: QQ: