分子生物学复习提纲2012(3)

2019-04-23 11:50

双拷贝的单链RNA基因组经逆转录复制成双链DNA,进入细胞核,整入到宿主细胞的基因组,以前病毒的形式存在于宿主细胞内。当其转录时,形成具有双重功能的病毒RNA,既可作为信息RNA指导蛋白质的合成,也可作为基因组被组装,成为成熟的病毒颗粒释放出细胞,再去感染其他靶细胞。

其致病机理:破坏人体的免疫能力,导致免疫系统失去抵抗力,而导致各种疾病及癌症得以在人体内生存,发展成为最后的艾滋病(获得性免疫缺陷综合症).

第八章 基因诊断和基因治疗(概念)

基因诊断:以DNA或RNA为诊断材料,利用分子生物学技术,通过检查基因的存在、缺陷或表达异常,对人体状态和疾病作出诊断的方法和过程。常用方法:核酸分子杂交、PCR、PCR-SSCP(单链构象多态性)、限制酶酶谱分析、

DNA序列测定、DNA芯片技术

基因治疗:就是向有功能缺陷的细胞补充相应的功能基因,以纠正或补偿其基因缺陷,从而达到治疗的目的。基本程序包括:治疗性基因的选择;基因载体的选择;靶细胞的选择;基因转移;外源基因的筛选;外源基因导入体内。 分子生物学的研究方法

电泳:在不含变性剂的中性聚丙烯酰胺凝胶中电泳时,DNA单链的迁移率除DNA链的长短有关外,更主要的是取决于DNA单链所形成的构象,在非变性条件下,DNA单链可自身折叠形成具有一定空间结构的构象,其构像由DNA单链碱基决定,其稳定性靠分子内局部顺序的相互作用来维持,即使是一个碱基的差别都会使其构象不同,电泳迁移率也不同,从而将变异DNA与正常DNA分开。

核酸分子杂交:Southern印迹法(是最经典的基因分析方法,不但能检出特异性的DNA片段,而且能进行定位分析,可用于基因的酶切图谱分析、基因突变分析等)、Northern印迹法(组织细胞中的总RNA或mRNA的定性和定量分析)、斑点杂交(可用基因组中特定基因及其表达的定性及定量分析,但不能鉴定所测基因的分子量,特异性不高)、原位杂交(可查明染色体中特定基因的位置,用于染色体疾病的诊断)

PCR(聚合酶链式反应):在体外酶促作用下特异性DNA片段扩增技术,根据体内细胞DNA半保留复制机理,在微凉离心管中,加入适量缓冲液,模板DNA,四种脱氧单核苷酸,耐热聚合酶,一对合成DNA的引物,通过高温变形、低温退火和中文延伸若干个循环后,DNA可扩增2n倍。 基因工程

RNA干扰:利用双链小RNA高效、特异性降解细胞内同源mRNA,从而阻断

体内靶基因表达,使细胞出现靶基因确实的表型。

克隆:将外源DNA插入具有复制能力的载体DNA中,使之得以永久保存和复制的过程。

重组DNA技术:目的是将不同的DNA片段(如某个基因或基因的一部分)按照人们的设计定向连接起来,在特定的受体细胞中与载体同时复制并得到表达,产生影响受体细胞的新遗传性状。基本过程为——目的基因的制备;载体的选择和制备;DNA分子的体外连接;将外源DNA导入宿主细胞;目的基因的筛选和鉴定

DNA文库: 某一特定来源DNA通过细胞-DNA克隆技术构建成含有所用DNA片段的重组DNA分子,并转化至细菌内,构成DNA文库。

cDNA文库:以mRNA为模板,经反转录酶催化,在体外反转录,与适当的载体连接后转化受体菌,则每个细菌含有一段cDNA,并能繁殖扩增,这样含着全部mRNA信息的cDNA克隆集合称为该组织细胞的cDNA文库。

限制性内切酶(概念)一种在特殊核甘酸序列处水解双链DNA的内切酶,切除末端有粘性末端或者非粘性末端。

分子克隆的载体应具备的条件:①能够在宿主细胞中复制并稳定的保存;②具有多个限制酶的单一切点,以便与外源基因拼结;③有某些特殊基因,以便进行筛选;④拷贝数多。 基因克隆技术所涉及的主要步骤 目的基因的获得方法: ① 已知序列基因:PCR扩增

② 未知序列基因(仅知道一部分序列):RACE—PCR

③ Aa已知部分

基因工程步骤:

① 目的基因的分离或合成;②将目的基因与载体DNA连接,构建重组DNA分子-表达载体;③将重组DNA分子导入受体细胞,并获得具有外源基因的个体;④转基因生物的检测与鉴定;⑤转基因生物的安全性评价。

反义RNA技术是借助基因重组技术,根据碱基互补原理,用人工合成或生物体合成的特定RNA片段(或其化学修饰物)抑制或封闭基因表达的技术。

基因超表达采用cDNA会出现过表达现象,cDNA可以确保产生更多的信使RNA,也就会产生更多的蛋白质或下游产物。

基因敲除:通过一定途径使机体特定基因失活或缺失的一种分子生物学技术;从分子水平上看,是将一个结构已知而其功能未知的基因去除,或者用其它顺序相近的基因取而代之的人工突变技术,然后从整体观察实验动物,推测相应基因的功能。

基因沉默:指生物体中特定基因由于种种原因不能表达。作为一种基因表达调控机制,基因沉默通常只在外来核酸入侵时发挥作用。这里特定基因主要针对外源基因,也包括与外源基因同源的内源基因。


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