傅冰：姬松茸多糖的提取工艺优化
姬松茸多糖的提取工艺优化
摘 要：以水为浸提液，在单因素试验基础上采用三因素三水平正交试验
对提取工艺进行优化。结果表明，多糖提取率的主要影响因素及其顺序为浸提温度、浸提时间、料液比。最佳提取工艺参数为浸提温度95℃、浸提时间3h、料液比1∶30，多糖提取率为23.01％． 关键词：姬松茸；多糖；提取；优化
Optimization of extraction of polysaccharides from Agaricus
Abstract: This experiment is on the basis of single factor with three factors and three
level orthogonal test to optimize the extraction process to water extraction. The results showed that the main factors and their order that affecetd the extraction rate of polysaccharides were extraction temperature, extraction time, solid to liquid ratio.The prime technics was as follows:temprature 95℃,time 3h and the ratio of material with liquid 1∶30.The polysaccharide extraction rate is 23.01％.
Key words:agaricus;polysaccharide;extract;optimization
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山西农业大学本科毕业论文（设计）
1 前言 ............................................................................................................................................. 1 2 材料与方法 ............................................................................................................................. 4
2.1 材料 ........................................................................................................................... 4
2.1.1 原料 ................................................................................................................... 4 2.1.2 试剂 ................................................................................................................... 4 2.1.3 仪器设备 ........................................................................................................... 4 2.2 方法 ........................................................................................................................... 4
2.2.1 提取工艺流程 ................................................................................................... 4 2.2.2 多糖含量的测定 ................................................................................................... 4
2.2.2.1 原理 ......................................................................................................... 4 2.2.2.2 标准蓝色葡聚糖溶液曲线制备 ............................................................. 5 2.2.2.3 多糖提取率的测定 ................................................................................. 5 2.2.3 单因素实验 ..................................................................................................... 5
2.2.3.1 温度对多糖提取率的影响 ..................................................................... 5 2.2.3.2 浸提时间对多糖提取率的影响 ............................................................. 5 2.2.3.3 料液比对多糖提取率的影响 ................................................................. 5 2.2.4 多糖提取条件优化 ......................................................................................... 5
3 结果与分析 ....................................................................................................................... 6
3.1 多糖标准曲线的绘制 ............................................................................................... 6
3.1.1 多糖含量的测定 ................................................................................................. 6 3.2 不同条件对姬松茸多糖提取率的影响 ......................................................................... 6
3.2.1 浸提温度对多糖提取率的影响 ......................................................................... 6 3.2.2 浸提时间对多糖提取率的影响 ........................................................................... 7 3.2.3 浸提时料液比对多糖提取率的影响 ................................................................... 8 3.2.4 最佳条件的优化 ................................................................................................... 8
4 结论 ....................................................................................................................................... 9
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傅冰：姬松茸多糖的提取工艺优化
1 前言
姬松茸（Agaricus blazei Murill.）又名小松菇、柏氏蘑菇、巴西蘑菇，属担子菌亚门，层菌纲，伞菌目，蘑菇科，蘑菇属。是一种大型真菌，具有浓郁杏仁香味。
姬松茸是夏秋发生的草地腐生菌。姬松茸的子实体粗壮，菌盖扁圆形、馒头形，直径5～10cm，表面覆有淡褐色或褐色的纤维状鳞片，中央较厚，可达10cm以上，边缘薄，有菌幕的碎片，颜色为白色；菌褶离生，较密集；菌柄圆柱状，柄基部稍膨大，长4～14cm，粗2～3cm；菌环着生菌柄的上部，膜质，白色；孢子印黑褐色，孢子暗褐色，光滑，宽椭圆形至球形，6.3～7.0×4.5～6.3μm。
姬松茸含有多糖、糖蛋白复合体、凝集素、甾醇类物质及核酸等多种提高免疫力、抗肿瘤、抗病毒成分。新鲜子实体含水分85%～87%。干菇中粗蛋白40%～50%，多糖类38%～45%，纤维素6%～8%，粗灰分5%～7%，粗脂肪3%～4%，干菇含VB10.3%、VB23.2%、烟酸49.2%。矿质元素的组成：总灰分（干菇）P 7486mg/kg，Mg 528mg/kg，Ca 157mg/kg，Na 118mg/kg，Cu 14mg/kg，B 9mg/kg，Zn 9mg/kg，Fe 6mg/kg，Mn 0.1mg/kg，与抗癌有关的极引人注目的铬含量在干菇中为28mg/kg。
多糖类化合物广泛存在于动物细胞膜和植物、微生物的细胞壁中，是由醛基和酮基通过苷键连接的高分子聚合物，也是构成生命的四大基本物质之一。
20世纪50年代发现真菌多糖具有抗癌作用，后来又发现地衣、花粉及许多植物均含有多糖类化合物，并进行分离提纯，确定了其化学结构、物理化学性质、药理作用，尤其对多糖类化合物的抗肿瘤和免疫增强作用进行深入研究。
近年来国内学者对姬松茸多糖的生命活性进行了大量研究，成果包括: (1)抗肿瘤机制 研究证明其可通过提高机体免疫力间接发挥抗肿瘤效果；也有通过抑制肿瘤细胞增生，进而促进肿瘤细胞凋亡的作用。国内外实验研究证明，应用从姬松茸子实体和菌丝体中提取的多糖，具有增强机体免疫力、抑制肿瘤细胞增殖和诱导肿瘤细胞凋亡等明显的抗肿瘤作用。
(2)增强机体免疫力 崔红霞等采用mT法检测姬松茸多糖体外与肝癌细胞Bel一7402作用48 h的细胞毒作用，以及与小鼠脾细胞共培养上清对Bel一7402细胞作用48 h的抑制作用，结果表明姬松茸多糖体外无直接细胞毒作用，不同浓度的小鼠脾细胞共培养上清体外对Bel一7402细胞生长均有抑制作用，其中低剂量组作用最显著，抑制率为39.65％说明姬松茸多糖可通过增强小鼠脾淋巴细胞功能，抑制Bel一7402细胞的生长。
(3)保肝作用 国内研究表明，姬松茸有效成分能促进慢性乙型肝炎患者肝功恢复。段县平等
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在姬松茸多糖对四氯化碳染毒兔肝脏的保护效应，以及
其毒性反应的研究表明，一定剂量范围内的姬松茸多糖不但对动物无毒害作用，反而能提高对肝脏保护作用尤其是显著降低肝脏的谷丙转氨酶(GPT)水平。研究显示出姬松茸多糖通过刺激肝细胞DNA的合成使肝细胞增殖，同时提高抗氧化酶活性、保护肝细胞膜完整性、减少其破损，抑制血清和血浆中GPT和GOT(谷草转
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氨酶)活性的升高。
近年来，关于姬松茸粗多糖提取方法主要有酶提法，热水浸提法。前者采用加入纤维素酶、果胶酶、蛋白酶等酶法进行提取，但加酶提取不仅生产成本高，同时也给产物的分离带来困难。据有关文献记载，多糖提取的影响因素主要有料液比、提取温度和提取时间。本文针对热水浸提法提取姬松茸中粗多糖成分的工艺，研究了这3个因素对多糖提取率的影响，结合正交试验优化的操作方法，具有实际生产意义。
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2 材料与方法
2.1 材料 2.1.1 原料
姬松茸：购于山西农业大学食用菌中心。
2.1.2 试剂
苯酚溶液、无水乙醇、蓝色葡聚糖、丙酮、乙醚，浓硫酸等均为分析纯，实验用水为蒸馏水。
2.1.3 仪器设备
科伟电热恒温水浴锅 （北京化玻联医疗器械有限公司） 756型紫外可见分光光度计 （上海光谱仪器有限公司） BS210S型电子天平 （北京赛尔利斯天平有限公司） Thermo Scientific Finnpipette Focus移液器（芬兰雷勃Thermo） 新飞BCD-248GBS/M型冰箱
2.2 方法 2.2.1 提取工艺流程
60℃对姬松茸子实体干燥处理→粉碎→过40目筛→浸提→过滤→滤渣复提→合并滤液浓缩→醇沉→离心→乙醚洗涤→丙酮洗涤→粗多糖
2.2.2 多糖含量的测定 2.2.2.1 原理
以苯酚-硫酸为显色剂，用比色法测定姬松茸子实体中多糖含量，其中多糖
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类成分在浓硫酸作用下，先水解成单糖，单糖迅速脱水生产糠醛衍生物，糠醛与苯酚直接结合成橙色衍生物，该衍生物在490nm处出现最大吸收，其吸收值与糖质量浓度呈线性关系，样品测定以标准曲线来计算多糖含量
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。
2.2.2.2 标准蓝色葡聚糖溶液曲线制备
称取干燥后的蓝色葡聚糖(200,0000D)0.100 g，加适量蒸馏水溶解，转移至1000mL容量瓶中，加蒸馏水至刻度，摇匀。分别精确吸取葡萄糖标准溶液0、0.1、0.2、O.3、0.4、0.5、0.6 mL置于25 mL比色管中，加水至1.0 mL，再分别加入5％苯酚溶液1.0 mL和浓硫酸10.0 mL，放置10 min，摇匀，置于20～30℃水浴中保温15 min。然后在490nm波长下测定吸光值，以葡聚糖含量(mg／mL)为横坐标，吸光值为纵坐标，绘制标准曲线。
2.2.2.3 多糖提取率的测定
用葡聚糖标准品通过苯酚硫酸法
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制备工作曲线，得到线性回归方程，同
法测定样品提取液中多糖吸光度，通过回归方程计算姬松茸多糖含量
姬松茸水溶性粗多糖质量?100% 粗多糖提取率(％)=
（原料质量?多糖的百分含量）2.2.3 单因素实验
2.2.3.1 温度对多糖提取率的影响
分别准确称取姬松茸样品100g，在六份样品中分别加入蒸馏水，料液比1∶30，置于水温为75、80、85、90、95、100℃的恒温水浴锅内提取3h。6份样品分别提取1次，纱布过滤后取滤液。在滤液中加入1倍体积的95%的乙醇，经离心处理后分别加入乙醚和丙酮进行洗涤，干燥后称量粗多糖质量。
2.2.3.2 浸提时间对多糖提取率的影响
分别准确称取姬松茸样品100g，在七份样品中分别加入蒸馏水，料液比1∶30，置于水温为90℃的恒温水浴锅内分别提取0.5、1、1.5、2、2.5、3、3.5h。7份样品分别提取1次，纱布过滤后取滤液。在滤液中加入1倍体积的95%的乙醇，经离心处理后分别加入乙醚和丙酮进行洗涤，干燥后称量粗多糖质量。
2.2.3.3 料液比对多糖提取率的影响
分别准确称取姬松茸样品100g，在六份样品中分别加入蒸馏水，料液比1∶10、1∶20、1∶30、1∶40、1∶50、1∶60。置于水温为90℃的恒温水浴锅内提取3h。6份样品分别提取1次，纱布过滤后取滤液。在滤液中加入1倍体积的95%的乙醇，经离心处理后分别加入乙醚和丙酮进行洗涤，干燥后称量粗多糖质量。
2.2.4 多糖提取条件优化
在单因素试验的基础上，以浸提温度、时间、料液比为因素采用三因素三水平正
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