3、了解血球计数板的计数原理，掌握血球计数板的计数方法。 二、实验材料：斜生栅藻、小球藻、铜绿微囊藻； 三、主要实验仪器和器皿
１．显微镜，血球计数板，计数器 ２．培养瓶（三角瓶） ，量筒； 四、试剂
１．培养液： BG11 培养液 ２．碘固定液 五、培养条件：
光照强度：1200Lux、温度：20-25℃、光照时间：24h连续光照 六、方法和步骤
1、前期准备：各种器皿的消毒、培养液的配制、准备并培养 3 种不 同的淡水微藻：斜生栅藻、小球藻、铜绿微囊藻；
2、接种：将不同的实验藻种分别接种到盛有培养液的不同三角瓶 (100ml)中,接种的藻容量和新培养液之间的比例为 1：2～1：3。培养量与总容量的比小于 2/3；
3、培养 ：按上述培养条件进行培养，在培养的过程中，每天摇瓶 3 次，使藻类充分见接触氧气和光照；
4、换代：5-7 天换代 1 次，换代浓度同上；
5、固定：将藻液摇匀，用小三角瓶分别倒取一定量(20-30ml)的上述3种藻液加入几滴碘液，摇匀杀死细胞；
6、取样：摇匀后，用吸管吸取上述不同的藻液分别滴到盖有盖玻片的血球计数板的边缘，使藻液慢慢进入盖有盖玻片的区域，避免盖玻片浮起，用吸水纸轻轻吸走多余的藻液，每种藻液取样 2 次；
7、观察计数：显微镜下观察不同的藻种并分别计数。 1）血球计数板计数原理 血球计数板是一块特制的载玻片，板的中部一“H” 型的凹槽， 横槽两边的平台上各有一个有九个大方格的方格网。每个大格：边长 为１ｍｍ，深为 0.1mm，容积为 0.1mm3(10-4ml)。中间大方格为计数 室以计数室为中心，对角线两端各有一个有 16 个中格组成的大格。
2）计算藻细胞密度 数出对角线上的 4 个大方格中的总藻数 A，若藻液的稀释倍数为 B，则计算公式如下：细胞密度＝A÷4×B×104（个／ml）（单位：个／ml） 七、实验结果
按下表记录实验数据。 次数 1 1 2 各大格中的藻数 3 4
2 八、问题与思考
用此法计数的结果是活藻体还是死、活菌体的总和？
实验七 土壤细菌、放线菌、霉菌及纤维素降解菌的分离及提纯 一、目的要求
通过平板涂布法学习土壤中一般异养性细菌、放线菌、霉菌及纤维素降解菌的分
离以及纯化方法 二、基本原理
微生物分离培养的基本原理是：选用不同成分和酸碱度的培养基，在不同的湿度
和不同的通气条件下进行培养，使只有适合该条件的微生物得以生长。微生物在固体培养基上生长形成的单个菌落可以是由一个细胞繁殖而成的集合体。因此可通过挑取单菌落而获得一种纯培养。由于土壤中菌数高，常需进行一定量稀释，使微生物能在培养基上长成单个菌落，以达到分离的目的。本实验将采用四种不同的培养基从土壤中分离不用的微生物 三、器材
1、培养基：牛肉蛋白胨琼脂培养基、高氏一号培养基、马丁培养基、赫奇逊培养基 2、土壤悬液、无菌玻璃棒、无菌吸管、盛有9ml无菌水的试管、无菌试管 四、操作步骤
1、选定采土地点后，铲去表涂层2～3cm，取3～10cm深层土壤10g。称取土样1g，
加入盛有99ml无菌水的锥形瓶中，振荡10min，使土壤中菌体、芽孢或孢子均匀分散，
－－
制成102稀释度的土壤稀释液。然后按10倍稀释法进行稀释分离，以制备107稀释度
－
为例，具体操作过程如下：取4.5ml无菌水试管6支，按103……10－7顺序编号，放
－
置在试管架上。取移液管一支，准确吸取0.5ml102土壤稀释液，此为10－3稀释度的
－－－－
土壤稀释液，依次操作，制成104、105、106、107的土壤稀释液。
2、用无菌吸管分别吸取适宜浓度的土壤稀释液0.1ml，接种于相应的培养基平板上。
每一稀释度至少有两个平板重复。接种时每一稀释度用一支无菌吸管，菌液注入平板后，应立即用无菌涂棒将该菌液均匀地涂布于平板表面，注意勿刮破琼脂。
通常，细菌采用10-4、10-5、10-6三种稀释液接种于牛肉膏蛋白胨琼脂培养基，
37°C培养；放线菌采用10-3、10-4、10-5三种稀释液接种于高氏一号培养基。28°C培养；霉菌则采用10-2、10-3、10-4三种稀释度接种于马丁培养基，28°C培养；纤维素降解菌采用10-2、10-3、10-4三种稀释度接种于赫奇逊培养基，28°C。
3、当单菌落长出时，用接种环挑菌落接到相应的斜面培养基上，在相应的温度下培养 五、问题与思考
1、你所涂布的平板是否较好的得到了单菌落？
2、在四种不同的平板上你得到了哪些类群的微生物？简述它们的菌落特征？ 实验八、微生物实验常用玻璃器皿清洗 一、 实验目的
二、 1.熟悉实验所需各种常用玻璃器皿的名称和规格 三、 2.掌握玻璃器皿等器材的清洗、包扎技术 二、实验原理
为确保实验顺利地进行，要求把实验所用的玻璃器皿清洗干净。为保持灭菌后和无菌状
态，需要对培养皿、吸管等进行包扎，对试管和三角瓶等加塞棉塞。这些工作看起来很普通简单，但如操作不当或不安操作规定去做，则会影响实验结果，甚至会导致试验的失败。 三、试剂和仪器
1.高压蒸汽灭菌锅、试管、三角瓶、培养皿和吸管、棉线、纱布、棉花、牛皮纸、报纸等 2.洗涤工具、去污粉和相应洗涤液 四、实验内容
（一） 玻璃器皿的清洗： 新购的玻璃器皿的洗涤
将器皿放入２％盐酸溶液中浸泡数小时，以除去游离的碱性物质，最后用流水冲净。
对容量较大的器皿，如大烧瓶、量筒等，洗净后注入浓盐酸少许，转动容器使其内部表面均沾有盐酸，数分钟后倾去盐酸，再以流水冲净，倒置于洗涤架上晾干，即可使用。 常用旧玻璃器皿的洗涤
确实无病原菌或未被带菌物污染的器皿，使用前后，可按常规用洗衣粉水进行刷洗； 吸取过化学试剂的吸管，先浸泡于清水中，待到一定数量后再集中进行清洗。 带菌玻璃器皿的洗涤
凡实验室用过的菌种以及带有活菌的各种玻璃器皿，必须经过高温灭菌或消毒后才能进行刷洗：
1.带菌培养皿、试管、三角瓶等物品，做完实验后放入消毒桶内，用0.1MPa灭菌20～30 min后再刷洗。含菌培养皿的灭菌，底盖要分开放入不同的桶中，再进行高压灭菌。
2.带菌的吸管、滴管，使用后不得放在桌子上，立即分别放入盛有3～5%来苏尔或5%石炭酸或0.25%新洁尔灭溶液的玻璃缸（筒）内消毒24h后，再经0.1MPa灭菌20 min后，取出冲洗。
3.带菌载玻片及盖玻片，使用后不得放在桌子上，立即分别放入盛有3～5%来苏尔或5%石炭酸或0.25%新洁尔灭溶液的玻璃缸（筒）内消毒24h后，用夹子取出经清水冲干净。 新购置的载片，先用2%盐酸浸泡数小时，冲去盐酸。再放浓洗液中浸泡过液，用自来水冲净洗液，浸泡在蒸馏水中或擦干装盒备用。
如用于细菌染色的载玻片，要放入50g/ L肥皂水中煮沸10min，然后用肥皂水洗，再用清水洗干净。
最后将载玻片浸入95%酒精中片刻，取出用软布擦干，或晾干，保存备用。 若用皂液不能洗净的器皿，可用洗液浸泡适当时间后再用清水洗净。 4.含油脂带菌器材的清洗 一）单独高压灭菌：
用0.1MPa灭菌20～30 min→趁热倒去污物→倒放在铺有吸水纸的篮子上→用100 ℃烘烤0.5h→用5%的碳酸氢钠水煮两次→再用肥皂水刷洗干净。
（二）玻璃器材的晾干或烘干
不急用的玻璃器材：可放在实验室中自然晾干； 急用的玻璃器材：把器材放在托盘中（大件的器材可直接放入烘箱中），再放入烘箱内，用80～120℃烘干，当温度下降到60℃以下再打开取出器材使用。
（三）器皿的包扎：
要灭菌后的器皿仍保持无菌状态，需在灭菌前进行包扎。
1.培养皿：洗净的培养皿烘干后每10套（或根据需要而定）叠在一起，用牢固的纸卷成一筒，或装入特制的铁桶中，然后进行灭菌。
2.吸管：洗净、烘干后的吸管，在吸口的一头塞入少许脱脂棉花，以防在使用时造成污染。塞入的棉花量要适宜，多余的棉花可用酒精灯火焰烧掉。每支吸管用一 条宽约4~5cm
的纸条，以30~50℃的角度螺旋形卷起来，吸管的尖端在头部，另一端用剩余的纸条打成一结，以防散开，标上容量，若干支吸管包扎成一束 进行灭菌。使用时，从吸管中间拧断纸条，抽出试管。
3.试管和三角瓶：试管和三角瓶都需要做合适的棉塞，棉塞可起过滤作用，避免空气中的微生物进入容器。制作棉塞时，要求棉花紧贴玻璃壁，没有皱纹和缝隙， 松紧适宜。过紧易挤破管口和不易塞入；过松易掉落和污染。棉塞的长度不小于管口直径的2倍，约2/3塞进管口。
目前，国内已开始采用塑料试管塞，可根据所用的试管的规格和试验要求来选择和采用合适的塑料试管塞。
若干支试管用绳扎在一起，在棉花部分外包裹油纸或牛皮纸，再用绳扎紧。三角瓶加棉塞后单个用油纸包扎。
问题与思考：
叙述常用玻璃器皿清洗方法及步骤