用IM进行普查应考虑下列原则:(1)应十分清楚该肿瘤的发病率,(2)该肿瘤标志物应能检测早期肿瘤,(3)该肿瘤的早期治疗应比晚期治疗更经济有效,(4)测定方法的灵敏度、特异性和重复性良好,(5)普查所需费用能被接受。
2.3.2定位:
TM基本上不能对肿瘤定位,因为绝大多数TM无器官特异性,只有极少数的TM如前列腺特异抗原(PSA),前列腺酸性磷酸酶(PAP),具有器官特异性,只可惜这些指标虽能进行器官定位,但不具肿瘤特异性。
2.3.3.确诊:
由于TM无足够的灵敏度,不能排除假阴性结果,同时还有假阳性的可能,因此,通常不能单凭TM进行确诊。但本周蛋白、AFP、β-HCG)和降钙素等有助于确诊。
2.3.4.分期:
大多数TM与疾病分期有关,且浓度与肿瘤大小(如结肠癌CEA浓度与肿瘤大小有关)或分期(如几乎所有的TM在肿瘤晚期时呈现较高的浓度)之间通常存在着关联,但这只是总体而言。由于各期TM的浓度范围极广,且互相重叠,因此,并不能根据个体测得值来判断肿瘤大小,也不能以TM的浓度来精确地指示各期肿瘤。
2.3.5.疗效监测:
TM最重要的价值,是能明确手术、放疗或药物治疗是否有效。有的TM可反映肿瘤残存量,这种定量关系十分重要,如用β-HCG监测绒毛膜癌的疗效、检测抗药性和推断\零肿瘤细胞\检测极限以下),以决定何时停止治疗的报道就是最好的例子。
任何标志物半寿期显著超过\正常\半寿期,均与残留肿瘤不断产生TM有关,表示手术切除得不完全,或肿瘤抗药,或肿瘤复发。虽然目前尚无一种能被普遍认可的、用TM浓度来评价治疗有效性的标准,但Beastall提出的方案是值得重视的,即:无效:则浓度与治疗前相比下降<50%;改善:TM浓度与治疗前相比下降>50如;有效:TM浓度与治疗前相比下降>90%;显效:TM浓度下降至非恶性肿瘤的参考值内。
治疗中或治疗后TM浓度变化有3种基本类型:(1)浓度下降到正常水平,提示肿瘤全部除去或病情缓解;(2)浓度明显下降但仍持续在正常水平以上,或短期下降到正常水平后又重新增高,提示有肿瘤残留和(或)肿瘤转移;(3)浓度下降到正常水平一段时间(约数月)后,又重新增加,提示复发或转移。应注意,如化疗、放疗或手术后立即测定TM浓度,可能会有短暂的升高,这是由于肿瘤坏死所致。另外,化疗、放疗或手术后TM浓度重新恒定升高,可能表示治疗无效,应尽可能改用其他治疗方式。并不是同一器官的肿瘤均表达相同的TM,为了确定何种TM适宜监测疗效,最好在手术前检测一组TM,然后选择升高的TM作为监测指标。但是,即使某些TM在手术前浓度并不增加,也可能可以作为预示复发和转移的指标。少数肿瘤也可采用组合TM来进行监测,如AFP和HCG监测睾九癌。
2.3.6.预后:
术前TM浓度增加,术后浓度降低,表示这些TM对此肿瘤具有预后价值。特别在病程监测中,TM的浓度增加或降低与疾病的预后密切相关。如睾九癌时以 HCG和AFP作为预后指标,HCG<50KU/L或AFP<500 ng/ml的4年生存率为96%,HCG>50KU/L或AFP>500ng/ml的4年生存率为56%。另外,结肠癌时CEA浓度、非何杰金淋巴瘤(特别是多发性骨髓瘤)时β微球蛋白、卵巢癌时CA125等都有预后的价值。
2.3.7.预测:
TM另一重要的特性就是预测价值,其依据是Bayes'法则。可用阳性预期值(PPV)和阴性预期值(NPV)来表示。PPV与NPV不仅与灵敏度与特异性有关,还与人群的患病率有关。某一TM的灵敏度、特异性、PPV、NPV不是固定不变的,而是依赖于选定的临界值。将临界值提高,可增加特异性,但灵敏度随之降低;反之,将临界值降低,则灵敏度提高,但特异性下降。对TM而言,以正常参考值表示已基本无意义,通常以临界值来表示。因为,在实际应用中考虑的是最佳临界值,即区分\正常''的分界限。它不同于正常参考值的运用,正常参考值来自一组对照人群,而临界值是根据金标准确诊为患者和正常对照组两组人群所确定的。
3、 肿瘤标志物测定方法及影响因素
3.1 TM的测定方法
3.1.1 血清TM的测定方法:
RIA、IRMA、ELISA、CLIA、IFA、TRFIA。特别是CLIA的应用,使TM的测定更加准确、快速、结果稳定。
3.1.2 细胞TM的测定方法:
免疫组织细胞化学法、流式细胞术、放射免疫显像。特别是流式细胞术的应用,使定量检测细胞TM方面发挥了较大的优势。
3 .2 TM测定的影响因素
3.2.1体内因素:
肝、肾功能异常和胆汁淤滞等均可造成TM浓度增高,如CEA、AFP。风湿病时CAl9-9浓度可增高,强烈的治疗作用(手术、放疗、化疗)和连续的细胞死亡、肿瘤部位供血障碍等均可导致TM浓度变化。某些药物会影响TM的浓度,如前列腺癌抗雄激素治疗可抑制PSA产生。另外,已发现屡次进行直肠检查后,PSA和PAP值可升高,因此采血前不应进行直肠检查。
3.2.2体外因素:
血清是测定肿瘤标志物最常用的样品,但由于血液的稀释作用,检测的阳性率有一定的局限性,若能直接收集肿瘤组织或其附近组织分泌的体液进行测定,可提高检测灵敏度和特异性。例如,经内窥镜采集胰液测定以19-9、CA72-4含量,可明显提高胰腺癌的检出率。同样,如用乳汁作为CA15-3和CEA的测定样品,则乳腺癌的阳性检出率也比用血样品大大提高。 汗液、唾液和其他体液中均含有鳞状上皮细胞癌抗原(SCC),因此,检测SCC抗原时,如污染上述体液可造成假性升高结果。红细胞、浆细胞和血小板中存在神经特异性烯醇化酶(NSE),因此样本在离心前放置一段时间(60-90min),血液中NSE浓度可能增高。另外,血清保存于室温中,PAP可因抗原不稳定而在几小时内降解。有些TM如CAl5-3对蛋白酶和神经酰胺酶很敏感,因此,血清样本应避免微生物污染,以免影响测定结果。
引起假阳性的因素(1)在良性疾病时,如炎症性疾病会使一些肿瘤标志表达增加。肝脏良性疾病时, AFP、CA19-9, CEA和肿瘤多肽抗原及肾功能衰竭的β2-微球蛋白及CAl5-3、19-9、CEA和PSA水平均会升高。(2)有一些生理变化,如妊娠时 AFP、CAl25、人绒毛膜促性腺激素和月经时CAl25也会升高。(3)在肿瘤手术治疗、化疗和放疗过程中,由于肿瘤组织受到破坏或肿瘤坏死时某些肿瘤标志产生增加,从而影响肿瘤标志的测定,造成假阳性。引起假阴性的因素(1)产生肿瘤标志的肿瘤细胞数目少。(2)细胞或细胞表面被封闭。(3)机体体液中一些抗体与肿瘤标志(肿瘤抗原)形成免疫复合物。(4)肿瘤组织本身血循环差,其所产生肿瘤标志物不能分泌到外周血中。此外,血标本的采集,贮存不当也会影响肿瘤标志测定的结果。
4、 肿瘤标志物的合理应用及注意事项
4.1动态记录IM的浓度变化:
TM测定的临床价值在于动态观察,有时即使在参考值范围内的浓度变化,可能也是有价值的。某些肿瘤如术后CEA浓度快速增高(每6个月>4μg/L)表示骨和肝转移,而术后CEA浓度缓慢增加(每6个月2-4μg/L)表示脑、软组织和皮肤转移。因此,每个患者总是最佳的自身对照。但为了保证结果的可靠性,当测得的TM浓度增加时,应在短期内(14-30d)进行重复测定。
4.2定期测定TM浓度:
应根据不同的患者,不同的肿瘤制定不同的测定时间表。一般而言,治疗前应测定每个患者TM的原始值,治疗后第1-2年,应每月测定(测定时间应根据TM的半衰期,通常在2-14d完成),至则浓度明显下降后,每3个月测定1次。第3-5年,应每年测定1-2次。第6年起,每年1次。但每次改变治疗之前、TM浓度增加或怀疑复发和转移时,均应及时测定TM浓度。
4.3合理选用TM:
同一肿瘤可含有一种或多种TM,而不同或同种肿瘤的不同组织类型既可有共同的TM,也可有不同的TM。因此,选择一些特异性较高的TM联合测定某一肿瘤,有利于提高检出的阳性率,而且,合理选用TM,常可在临床症状出现之前数月鉴别出复发和转移。
1.4.4TM组合测定:可提高检测的灵敏度,但常导致特异性下降,NPV增高,PPV降低。
因此,TM的组合测定应同时考虑灵敏度、特异性、NPV和PPV。几种常见肿瘤的常用联合检测\谱\如下: 结肠癌:CEA、CA19-9是首选,其特异性达到80%以上。如CEA、CAl9-9加。α1酸性糖蛋白(AGG)、C反应蛋白、肌型肌酸激酶同功酶,其敏感性、特异性皆较为理想。 胰腺癌:CAl9-9对胰腺癌的诊断已较好,如加上CAl25、CA50及DU-PAN-2(一种胰腺癌标志物)则可把诊断率提到90%以上。 肺癌:单用CEA对肺癌诊断已有较高的特异性,但如加上NSE、唾液酸、CEA、SCC则特异性更高。细胞角蛋白19加CEA对小细胞腺癌诊断率达78%,可与AFP诊断肝癌媲美。乳腺癌:以粘蛋白型糖蛋白分子CAM26+CAM29+脑型肌酸激酶同功酶(CK-BB)和CAM26+CAM29+CAl5-3两个组合最好,敏感度可达94%和96%。卵巢癌:CA125加CA19-9和铁蛋白等皆是较好的联合,其他许多检查尚不成熟。胃癌:由于尚无更特异的标志物,以19-9加CEA仍是目前较好的联合,有条件时可加CA72·4,则阳性率更高。以上介绍的各种联合也不是十全十美,有时联合检测的增加,提高了敏感性,反而降低了特异性。因此,在联合应用时,一定选准特异性较强的标志物,作不同标志物的联合,再作仔细的分析,才能使联合检查达到尽可能\完美\的程度。