在起始点上游还有一段6bp的保守序列5’-TTGACA-3’，称为-35区。-35区是DNA分子中可被RNA聚合酶σ因子特异性识别的序列。 在-35区和-10区之间大约间隔有16~18个核苷酸，两个序列之间为17个核苷酸时转录效率最高。
5、简要说明原核生物的转录过程。
原核生物转录过程可分为起始、延长和终止阶段。
转录的起始是RNA聚合酶与启动子相互作用并形成活性转录起始复合物的过程。首先由RNA聚合酶的σ亚基识别启动子的-35区，引导RNA聚合酶全酶与-35区结合，此时DNA没有解旋。随后RNA聚合酶向-10区移动并与之紧密结合，DNA双链局部被解开。随后σ亚基脱离核心酶，核心酶离开启动子，起始阶段结束。
在延长阶段，RNA聚合酶核心酶延模板链3’->5’方向滑行，一面使双股DNA解链，一面催化NTP按模板链互补的核苷酸序列逐个添加到RNA链的3’-OH端，使RNA按5’-3’方向不断延伸。
RNA聚合酶核心酶遇到终止子，酶与RNA链离开DNA模板，转录终止。
6、简述乳糖操纵子基因表达的正、负调控。
大肠杆菌乳糖操纵子有三个结构基因Z、Y、A，分别编码三种参与乳糖分解代谢的酶，即β-半乳糖苷酶、β-半乳糖透性酶、β-半乳糖苷乙酰化酶，其上游还有一个启动子P、一个操纵序列O。调节基因I编码产生阻遏蛋白。阻遏蛋白与O序列结合，使操纵子受阻遏而处于关闭状态。在启动子上游还有一个代谢物基因活化蛋白CAP。由启动子、操纵序列和CAP接合位点共同构成乳糖操纵子的调控区。
乳糖操纵子的负调控：在没有乳糖的条件下，阻遏蛋白能与操纵序列结合。由于操纵序列与启动子有部分重叠，阻遏蛋白与操纵序列结合后，抑制了RNA聚合酶与启动子结合，从而抑制结构基因的转录。当有乳糖存在时，乳糖进入细胞后转变为半乳糖。后者作为诱导物与阻遏蛋白结合，使阻遏蛋白的构想发生改变，导致阻遏蛋白与操纵序列O解离，引起结构基因的转录，负调控解除。
乳糖操纵子的正调控：当细菌在含有葡萄糖和乳糖的培养基中生长时，优先利用葡萄糖。当葡萄糖耗尽后，细菌经过一段停滞期，在乳糖诱导下，β-半乳糖苷酶开始合成，细菌才能利用乳糖。这是通过启动子上游存在的CAP结合位点发挥作用的。 CAP分子内有DNA结合区和cAMP结合位点。当环境中没有葡萄糖时，cAMP含量升高时，CAP与cAMP结合后转变为有活性的构象，这时CAP结合在lac启动子附近的CAP位点，可激活乳糖操纵子转录活性；当环境中有葡萄糖存在时，cAMP含量降低，CAP与cAMP结合受阻，同时乳糖操纵子表达下降，使细菌只能利用葡萄糖。
7、说明色氨酸操纵子的衰减机理。
大肠杆菌中色氨酸操纵子有5个结构基因：trp E、trp D、trp C、trp B、trp A，编码催化分支酸合成色氨酸的三种酶。其上游还有一个启动子（P）、一个操纵序列（O）。在操纵序列O和结构基因trp E之间有一段162个核苷酸的前导序列trp L，前导序列内有一段衰减子序列，是位于转录起始区的一段内部终止子。
衰减子序列中有2个连续的色氨酸密码子，对tRNAtrp和trp的浓度敏感。衰减子中具有4段反向重复序列，分别编号为1、2、3和4区。1区和2区、2区和3区、3区和4区能配对形成发夹结构。3区和4区形成的发夹结构是转录的终止信号。
序列1、2、3和4形成何种发夹结构，是由trp L基因转录物的翻译过程所控制的。Trp L基因转录不久核糖体就与mRNA结合，并翻译trp L衰减子序列。细胞内有色氨酸时，形成
色氨酰tRNAtrp，翻译过程可顺利进行。核糖体通过1区，同时影响2区和3区之间发夹结构的形成，但3区和4区形成发夹结构，即形成转录终止信号，从而导致RNA聚合酶作用停止。如果细胞内没有色氨酸时，色氨酰tRNAtrp缺乏，核糖体就停止在1区中两个相邻的色氨酸密码子的位置上，核糖体占据1区，1和2之间不能形成发夹结构，2和3之间可形成发夹结构，则3和4就不能形成转录终止信号，后面的trp E、trp D、trp C、trp B、trp A基因得以表达。
8、简述真核生物mRNA转录后的加工过程？
由mRNA前提hnRNA加工成成熟mRNA的过程包括5’-端加帽，3’-端腺苷酸化，剪接去除内含子并将外显子连接以及RNA编辑等。
5’-端加帽：mRNA前体的5’-末端为pppNp-，在成熟过程中释放出Pi，成为pppNp-，然后在鸟苷酸转移酶催化下与另一分子GTP反应，末端成为GpppNp-。继而在甲酰转移酶催化下，由硫代腺苷甲硫氨酸提供甲基，在鸟嘌呤的N7上甲基化，形成7-甲基鸟苷三磷酸m7Gppp。 3’-端多聚腺苷酸化：mRNA前体在3’-末端的腺苷酰化位点切开，这个位点的上游约10~30个核苷酸处有一段保守的AAUAAA序列。腺苷酰化位点被特异核酸内切酶切断后，在poly（A）聚合酶的催化下，以ATP为底物，发生聚合反应，形成3’末端的poly（A）尾。 mRNA前体的剪接：真核生物的结构基因转录时，内含子和外显子一同被转录，形成mRNA前体，mRNA前体需要经过剪接加工，即出去内含子序列，并将外显子序列连接成为成熟的有动能的mRNA分子。
第十五章、蛋白质合成
1、什么是遗传密码？遗传密码的特点是什么？
在mRNA链上编码一种氨基酸的相邻三个碱基，成为密码子。 密码子的特性是：通用性、简并性、无间隔、不重叠、摆动性等。
2、何谓密码子的摆动性？
密码子与反密码子配对时，密码子中前两位碱基特异性强，是标准碱基配对（A与U配对，G与C配对），但第三位碱基配对时就不那么严格，而是有一定的自由度（即摆动），这一现象就是密码子的摆动性。
3、氨酰-tRNA合成酶的功能是什么？
氨酰-tRNA合成酶催化氨基酸与tRNA连接，形成氨酰-tRNA。这类酶对氨基酸及tRNA都具有高度的专一性，以防止错误的氨基酸掺入多肽链。氨酰-tRNA合成酶催化的反应分为活化和转移两步。可具体
4、tRNA有何功能？
3’-端接受氨基酸；识别mRNA链上的密码子；连接多肽链和核糖体；起始tRNA可以高度特异性的识别起始AUG密码子。
5、简述大肠杆菌蛋白质的合成过程。
（1）氨基酸的活化和转移：在氨酰-tRNA合成酶的催化作用下，先将氨基酸、ATP结合，生成氨酰-AMP，再将氨酰集团从AMP转移到tRNA上形成氨酰-tRNA。
（2）起始：由fMet-tRNAf、mRNA、核糖体、IF1、IF2、IF3等因子组装成起始复合物。 （3）肽链延长：肽链延长需要70S起始复合物、氨酰-tRNA、延长因子、GTP。肽链延长包括三步：①氨酰-tRNA的结合②转肽③移位。此过程每重复一次，便有一个新氨基酸进入，形成一个新的肽键，肽链延长一个氨基酸单位，直到达到终止密码子为止。
（4）终止：当核糖体移动到终止密码子UAA、UAG时，肽链延长便终止。终止时，释放因子进入A位，识别终止密码子。释放因子使肽基转移酶的催化作用转变为水解作用，使肽链从tRNA上分离出来，生成一条多肽链。以后，tRNA也离开核糖体。
6、试述蛋白质多肽链合成后几种重要的加工方式。
N端甲基化或N端氨基酸的除去、剪切加工、二硫键的形成、氨基酸侧链的修饰等。氨基酸侧链的修饰作用包括羟基化、糖基化、甲基化、磷酸化、乙酰化和硫酯化等。
第十六章、重组DNA技术 1、什么是重组DNA技术？ 重组DNA技术又称基因工程，是指利用人工手段将目标DNA与特定载体DNA连接，形成重组DNA分子，并将其转入受体细胞中。随着受体细胞的生长、分裂和分化，使目标DNA得到扩增或表达，从而改变受体细胞性状或获得目标基因表达产物的一种技术。
2、PCR技术的原理是什么？
聚合酶链反应（PCR）是1984年由Kary Mullis发展起来的体外核酸扩增技术。PCR反应需要模板、引物、耐高温的DNA聚合酶、dNTP作为原料，反应还需要一定浓度的Mg2+.反应时，先将双链模板DNA加热变性，使之成为单链；然后降低温度，引物和单链的DNA模板根据互补配对的原则退火；Taq DNA聚合酶等耐热的DNA聚合酶利用dNTP为原料，按照与模板链互补配对的原则从引物的3’端逐个加入核苷酸，使链得到延长。经过20~35个循环，目的DNA分子的量以指数级的速度得到扩增。循环结束后，还需要延续几分钟，使DNA链完成复制。