紫外-可见分光检测操作规程
照品一般也应称取2份。吸收系数检查也应称取供试品2份，平行操作，每份结果对平均值的偏差应在±0.5%以内。作鉴别或检查可取样品1份。
4.5.6 供试品溶液的浓度，除各品种项下已有注明者外，供试品溶液的吸光度以在0.3~0.7之间为宜，吸光度读数在此范围误差较小，并应结合所用仪器吸光度线性范围，配制合适的读数浓度。
4.5.7 选用仪器的狭缝谱带宽度应小于供试品吸收带半高宽的10%，否则测得的吸光度值会偏低，或以减小狭缝宽度时供试品溶液的吸光度不再增加为准，对于中国药典紫外分光光法测定的大部分品种，可以使用2nm缝宽，但当吸收带的半高宽小于20nm时，则应使用较窄的狭缝，例如青霉素钾及钠的吸光度检查需用1nm缝宽或更窄，否则其264nm的吸光度会偏低。
4.5.8 测定时除另有规定者外，应在规定的吸收峰±2nm 处，再测几点的吸光度，以核对供试品的吸收峰位置是否正确，并以吸光度最大的波长作为测定波长，除另有规定外吸光度最大波长应在该品种项下规定的波长±2nm以内，否则应考虑试样的同一性、纯度以及仪器波长的准确度。
4.5.9 用于制剂含量测定时，应注意供试液与对照液的pH值是否一致，如pH值对吸收有影响，则应调溶液的pH值一致后再测定吸光度。 4.6 结果计算
4.6.1 对照品比较法 可根据供试品溶液及对照品溶液的吸光度与对照品溶液的浓度以正比法算出供试品溶液的浓度，再计算含量。
C样品=A样品×C对照/A对照
式中 A为吸光度值；C为测试液浓度（以mg/ml 计）。
4.6.2 吸收系数法 规定的吸收系数，系指E1cm，即在指定波长时，光路长度为1cm，试样浓度换算为1%（g/ml）时的吸光度值，故应先求被测样品的E1cm值，再与规定的E1cm值比较，可计算出供试样品的含量。
1%1%1á m（样品）
=
A C?L式中 A 为供试品溶液测得的吸光度值；
C 为供试品溶液的百分浓度，即100ml中所含溶质的克数（g/ml）； L 为吸收池的光路长度（cm）。
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1á)cm(样品供试品的含量%=1%×100 E1cm（标准）式中E1cm（样品）为根据前式计算出的供试品吸收系数；
1á m（标准）为药典或药品标准中规定的吸收系数。
4.7 吸收系数测定法
本法主要用于新品种的吸收系数测定。
4.7.1 测定方法 取精制样品精密称取一定量，使样品溶液配成吸光度读数在0.6~0.8之间，置1cm吸收池中，在规定波长处按5.5.8项的规定测出吸光度读数，然后再用同批溶剂将溶液稀释1倍，使吸光度在0.3~0.4之间，再按上述方法测定。样品应同时测定2份，同一台仪器测定的2份结果，对平均值的偏差应不超过±0.3%，否则应重新测定。测定时，先按仪器正常灵敏度测试，然后再减小狭缝测定，直到减小狭缝吸光值不增加为止，取吸光度不改变的数据。再用4台不同型号的仪器复测。
吸收系数可根据朗伯-比尔定律求算，以下例说明：
已知某化合物的分子量为287，用乙醇配成浓度为0.0030%的溶液，在波长297nm处，用1cm石英池，测得吸光度为0.6139，求E1cm值及摩尔吸收系数ε值。
1ácm297nm=A/CL=
ε297nm=A/CL=
1%0.614=205
0.0030?10.614=5874
10000.0030?100?1287
4.8 开机
开机前打开仪器样品室盖，观察确认样品室内无挡光物。
开机后，仪器显示初始化工作界面，仪器将进行自检并初始化整个过程需要约2min左右，如果初始化正常结束，系统进入仪器的操作界面，如下图所示：
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系统初始化 ?? ??
1.内 存 检 查： 正常 2.样品池电机复位： 正常 3.波 长电机复位： 正常 4.狭 缝电机复位： 正常 5.滤光片电机复位： 正常 6.光 源电机复位： 正常 7.钨 灯 检查： 8.氘 灯 检查： 9.波 长 检查： 10.参数 初始化：
系统忙? ?
仪器初始化完成后，您便可以开始对仪器进行操作。仪器通常需要经过60min的预热时间使光源达到稳定，为保证测量数据的准确性，尽量不要在仪器预热时进行测量。
5.0 光度测量
在此功能模块下，可测定样品在确定波长下的吸光度或透过率，完成K系数运算和测量数据打印等功能。
5.1 进入光度测量模式
在仪器主界面下根据提示按1键选择光度测量方式，仪器进入光度测量模式，显示界面变为光度测量主界面，按RETURN键返回仪器主界面，如图所示：
退出光度测量时，系统在信息提示区显示“数据将丢失，继续？（是：ENTER，
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否CLE）” 的信息提示您对当前已测得的数据进行操作。
测试按ENTER键，系统将返回仪器主界面，所有已测得的数据将丢失。按CANCLE键，系统退回到光度测量主界面，提示信息变为“请按START键测量”，您可以继续光度测量的操作。
下面根据图3-2给出了光度测量主界面的具体介绍：
①此处“光度测量”表示目前为光度测量模式；“990nm”为当前的工作波长；“0.000Abs”表示目前实时测得的吸光度值。
②此部分为工作区，以表格的形式显示具体测量的数据，每屏可显示最多9个测量数据值，超过则会自动分屏显示。
③此部分为信息提示区，当前的信息提示您按START/STOP键开始测量。 ④此处显示当前时间，图中显示的时间为4月15日8时34分。 ⑤此部分为功能键提示区，显示F1~F4键的功能。具体按键功能如下： ★F1—进入参数设定界面； ★F2—删除测量数据，刷新屏幕； ★F3—设置样品池状态； ★F4—打印测量结果。
另外在此画面下，按键盘的操作键GOTOWL可进行工作波长的设置；按AUTOZERO键可完成当前波长下自动校零的功能。
5.2 参数设置
在光度测量主界面下，按F1键进入光度测量参数设置界面，按RETURN键返回到光度测量主界面，如图所示：
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在该界面下可设置测量的光度方式，测量波长和K系数运算的系数，根据界面下方的提示按相应的数字进行各项参数的设置。所有参数设置完成后，按RETURN键返回到光度测量主界面。
5.3 设置光度方式
在光度测量模式下，仪器提供Abs（吸光度）、T%透光率和R%（反射率）
两种光度方式供您选择。
在光度测量参数设置界面按1键设置光度方式，每按一次1键，Abs、T%和R%交替变换，如图所示。
5.4 设置测量波长