起始电压为8V/cm,当染料进入分离胶后,将电压调至15V/cm,继续电泳至溴酚蓝到达分离胶底部,关闭电源。 4 染色
取下凝胶,将凝胶浸泡于考马斯亮蓝染色液中,在摇床上室温缓慢摇动30-60min。 5 脱色
换洗脱液,于摇床上室温缓慢摇动1-2 小时,其间更换1-2 次洗脱液。洗脱后的凝胶可以照像或干燥,也可置于含有20%甘油的水中密闭保存。 【注意事项】
1 SDS-PAGE 电泳要求样品的离子强度尽量要低,如果离子强度过高,应经透析或离子交换除盐后再进行电泳。
2 丙烯酰胺试剂是一种神经毒素,可通过皮肤吸收,会因多次积蓄而中毒。操作时应极其小心,需要带一次性手套。
3 上样量以10-15μl 为宜,如果样品蛋白含量过少,为保证区带清晰,可增加上样量,同时应将样品缓冲液浓度提高二倍或更高。 4 溴酚蓝染料是指示剂,为电泳时可见的迁移标志物。
5 凝胶聚合的时间与温度有关,夏天聚合快,可置于冰浴中减慢聚合,冬天室温低,可放入温箱中加快聚合。