分子生物学实验室常用试剂的配制(2)

2019-06-11 19:21

成分及终浓度

配制10ml溶液各成分用量 0.15%溴酚蓝

0.15%二甲苯青FF 5 mmol/L EDTA 50%甘油 水

1.5ml 1%溴酚蓝

1.5ml 1%二甲苯青FF

100ul 0.5mol/L EDTA(pH8.0) 3ml 3.9ml

6×蔗糖凝胶上样液(室温贮存)

成分及终浓度

配制10ml溶液各成分用量 0.15%溴酚蓝

0.15%二甲苯青FF 5 mmol/L EDTA 40%聚蔗糖 水

1.5ml 1%溴酚蓝

1.5ml 1%二甲苯青FF

100ul 0.5mol/L EDTA(pH8.0) 4g

补足到10ml

10×十二烷基硫酸钠/甘油凝胶上样液(室温贮存)

成分及终浓度

配制10ml溶液各成分用量 0.2%溴酚蓝

0.2%二甲苯青FF 200 mmol/L EDTA 0.1%SDS 50%甘油 水

20mg 20mg

4ml 0.5mol/L EDTA(pH8.0) 100ul 10% SDS 5ml

补足到10ml

三.常用培养基

LB培养基

将下列组分溶解在0.9L水中: 蛋白胨 酵母提取物 氯化钠 10g 5g 10g

如果需要用1N NaOH(~1ml)调整pH至7.0,再补足水至1L。注:琼脂平板需添加琼脂粉12g/L,上层琼脂平板添加琼脂粉7g/L。

SOB培养基

将下列组分溶解在0.9L水中: 蛋白胨 5g 1 mol/L 氯化钾 20g 氯化钠 2.5ml酵母提取物 0.5g

用水补足体积到1L。分成100ml的小份,高压灭菌。培养基冷却到室温后,再在每100ml的小份中加1ml灭过菌的1mol/L氯化镁。

SOC培养基

成分、方法同SOB培养基的配制,只是在培养基冷却到室温后,除了在每100ml的小份中加1ml灭过菌的1mol/L氯化镁外,再加2ml灭菌的1mol/L葡萄糖(18g葡萄糖溶于足够水中,再用水补足到100ml,用0.22um的滤膜过滤除菌)。

TB培养基

将下列组分溶解在0.9L水中: 蛋白胨 酵母提取物 甘油 12g 24g 4ml 各组分溶解后高压灭菌。冷却到60℃,再加100ml灭菌的170mmol/L KH2PO4/0.72 mol/L K2HPO4的溶液(2.31g的KH2PO4和12.54gK2HPO4溶在足量的水中,使终体积为100ml。高压灭菌或用0.22um的滤膜过滤除菌)。

2×YT培养基

将下列组分溶解在0.9L水中: 蛋白胨 酵母提取物 氯化钠 16g 10g 4ml

如果需要用1N NaOH(~1ml)调整pH至7.0,再补足水至1L。注:琼脂平板需添加琼脂粉12g/L,上层琼脂平板添加琼脂粉7g/L。

YPD培养基

将下列组分溶解在0.9L水中: 蛋白胨 酵母提取物 葡萄糖 20g 10g 20g

用水补足体积为1L后,高压灭菌。建议在高压灭菌之前,对色氨酸营养缺陷型每升培养基添加1.6g色氨酸,因为YPD培养基是色氨酸限制型培养基。为了配制平板,需要在高压灭菌前加入20g琼脂粉。

四.常用抗生素

氨苄青霉素(ampicillin)(100mg/ml)

溶解1g氨苄青霉素钠盐于足量的水中,最后定容至10ml。分装成小份于-20℃贮存。常以25ug/ml~50ug/ml的终浓度添加于生长培养基。

羧苄青霉素(carbenicillin)(50mg/ml)

溶解0.5g羧苄青霉素二钠盐于足量的水中,最后定容至10ml。分装成小份于-20℃贮存。常以25ug/ml~50ug/ml的终浓度添加于生长培养基。

甲氧西林(methicillin)(100mg/ml)

溶解1g甲氧西林钠于足量的水中,最后定容至10ml。分装成小份于-20℃贮存。常以37.5ug/ml终浓度与100ug/ml氨苄青霉素一起添加于生长培养基。

卡那霉素(kanamycin)(10mg/ml)

溶解100mg卡那霉素于足量的水中,最后定容至10ml。分装成小份于-20℃贮存。常以10ug/ml~50ug/ml的终浓度添加于生长培养基。

氯霉素(chloramphenicol)(25mg/ml)

溶解250mg氯霉素足量的无水乙醇中,最后定容至10ml。分装成小份于-20℃贮存。常以12.5ug/ml~25ug/ml的终浓度添加于生长培养基。

链霉素(streptomycin)(50mg/ml)

溶解0.5g链霉素硫酸盐于足量的无水乙醇中,最后定容至10ml。分装成小份于-20℃贮存。常以10ug/ml~50ug/ml的终浓度添加于生长培养基。

萘啶酮酸(nalidixic acid)(5mg/ml)

溶解50mg萘啶酮酸钠盐于足量的水中,最后定容至10ml。分装成小份于-20℃贮存。常以15ug/ml的终浓度添加于生长培养基。

四环素(tetracyyline)(10mg/ml)

溶解100mg四环素盐酸盐于足量的水中,或者将无碱的四环素溶于无水乙醇,定容至10ml。分装成小份用铝箔包裹装液管以免溶液见光,于-20℃贮存。常以10ug/ml~50ug/ml的终浓度添加于生长培养基。


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