6.超氧自由自测定
6.1实验试剂
1实验试剂
Tris-Hcl缓冲液（配制PH8.20 50mmol/L） 邻苯三酚(配制3mmol/L) VC 无水乙醇
6.2标准曲线的绘制 6.2..1试剂的配制
Tris-HCl（pH8.2 50mmol/L）缓冲溶液：取0.6057g三羟甲基氨基甲烷（Tris），蒸馏水溶解定容至50mL容量瓶；取0.309mL分析纯盐酸溶液至100mL的容量瓶中用蒸馏水定容至刻度，即得0.1mol/L盐酸溶液；分别取配置好的Tris50mL和0.1mol/L盐酸溶液22.9mL于100mL容量瓶中，蒸馏水定容至刻度，用pH计进行校正即可以得到Tris-HCl（pH8.2 50mmol/L）缓冲溶液。邻苯三酚：配制10mmol/L的稀盐酸，取0.310mL分析纯盐酸溶液至1000mL的容量瓶中用蒸馏水定容至刻度线；取焦性没食子酸0.0095g，至25mL的容量瓶中用10mmol/L的稀盐酸溶液定容至刻度线。 6.2.2标准溶液的配置及测试
精密称取Vc标准样品0.0300g置于100mL烧杯中,用纯净水溶解后定容至100mL 容量瓶中,即可得0.3mg/mL的Vc标准溶液。
将0.3mg/mL的Vc标准溶液分别配制成0.0mg/mL，0.03mg/mL，0.06mg/mL，0.09mg/mL，0.12mg/mL，0.15mg/mL，0.18 mg/mL,0.21 mg/mL,0.24 mg/mL,0.27 mg/mL,0.3 mg/mL的溶液，分别加入4.5mL的Tris-HCl（pH8.2 50mmol/L）缓冲溶液于10mL的试管中，再加入1mL不同浓度样品或待测液，25℃反应10min，再加入25℃预热的邻苯三酚0.1mL（3mmol/L用10mmol/L的盐酸配制），迅速摇匀，于325nm出测定，加入邻苯三酚即开始计时，每隔30s读取一次，至5min，做好记录。邻苯三酚的自氧化速率以无水乙醇代替样品，Tris-HCl缓冲溶液作空白。
清除率%=[(△Ac-△Ai)/△Ac]×100%
式中，△Ac：邻苯三酚自氧化速率；
△Ai：加入待测液后邻苯三酚自氧化速率。 6.2.3测试数据及标准曲线的绘制
序号 1 2 3 4 5 6
吸光值 1st 0.142 0 0.032 0.015 0.012 0.007 0.006
5th 0.411 0 0.246 0.179 0.13 0.074 0.025
自氧化速率
0.06725 0 0.05350 0.04100 0.02950 0.01675 0.00475
抑制率 0 20.45 39.03 56.13 75.09 92.94
时间min 邻苯三酚0.1ml 浓度ug/ml 0
30 60 90 120 150
表6-1：Vc的质量浓度与吸光值和抑制率的的数据
图6-1：Vc的质量浓度与其清除超氧自由基关系